n***3
发帖数: 663 | 1 Nat Chem Biol. 2006 Nov;2(11):596-607. Epub 2006 Sep 24.
Nitric oxide activates TRP channels by cysteine S-nitrosylation.
Yoshida T, Inoue R, Morii T, Takahashi N, Yamamoto S, Hara Y, Tominaga M,
Shimizu S, Sato Y, Mori Y.
Please send the paper to e*********[email protected]
Thanks!! |
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C*********m
发帖数: 213 | 2 granulin, 44% Cysteine content |
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b******e
发帖数: 3348 | 3 MS不懂问MSKing，生物不懂问Sunny，：）
你digest Gel band之前都用IAA吗？这样的话cysteine 是不是多要加57？
ppl |
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s******3
发帖数: 28 | 4 蛋白本身不长，才50个不到aa，但是有8个cysteine!之前做表达用大肠融合表达，切了
之后就沉淀啦，估计是二硫键氧化后聚集啦，后来先在空气中把溶菌液搅拌加过氧化氢
氧化，再切，发现切不掉啦，没办法，老板让做真菌和植物，觉得不怎么靠谱呀，因为
蛋白本身就是抗真菌的。哪位前辈给点提示吧，这个做包涵体然后复性有戏吗？或者其
他什么比较高效点的表达系统？有人做过类似的东西么？谢谢呀 |
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p****s
发帖数: 3153 | 5 我觉得这老板胡出主意，要是真菌植物那么好做大家都还用大肠杆菌干嘛？关键你没说
清楚，蛋白是可溶的还是在包涵体里？如果是可溶的为什么能用包涵体复性？“切”是
什么意思？cysteine这种东西不能用过氧化氢吧，很容易氧化成磺酸。以前没人做过这
个蛋白么？找找类似的文章。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 6 GST-fusion protein,
bind完后用elution buffer洗出来了，然后pool，然后dialyze back to PBS (pH 7.3)
，dialyze完我测了下pH是7.56，然后加thrombin，切了一会儿就出现precipitation了
，根据我上次的经验，precipitates里面90%是我需要的蛋白。
现在一个问题是，为啥会有析出？我加完thrombin切的过程中测了一下pH，起码1个小
时的时候pH没有什么变化。。
所以想，是不是因为切了以后蛋白结构变了，疏水性增加？
这个116kD的fusion protein里有18个cysteine，结合之前有人发的帖子，我在想，是
不是这个原因？
谢谢。 |
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s********n
发帖数: 2939 | 7 18个cysteine，估计有不少的disulfide bonds，你是表达在E. coli的cytoplasm？如
果是的话，misfold的可能性很大。GST增加了fusion的可溶性，切掉以后就沉淀了。 |
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Z**S
发帖数: 1211 | 8 Is the cleavage metal dependent?
If yes, use EDTA to stop cleavage and look for conserved Asp and Glu;
if not, look for conserved His, Cys, Ser, Tyr.
If Zn+ is present, check if there are any conserved cysteines.
fragment
pH8 |
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w*******2
发帖数: 6 | 9 我有过一个类似的经历，重组表达cathepsin L-like cysteine protease会发生intact
变为truncated。 |
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r**a
发帖数: 121 | 10 最近在做组织的FACS，用Trypsin和collagenase处理
我用的是10X Trypsin EDTA，后来发现EDTA是Trypsin和collagenase的抑制剂
Trypsin Inhibitors:
* Pancreatic-, soybean-, lima bean-, and egg white- trypsin inhibitors (
see section on Trypsin Inhibitors)
* DFP
* Aprotinin
* Ag+
* Benzamidine
* EDTA
Collagenase Inhibitors:
* EDTA, EGTA
* Cysteine, histidine
* DTT
* 2-mercaptoethanol
* o-phenanthroline
* Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+, Zn2+
* Not inhibited by DFP or serum
(White and White ... 阅读全帖 |
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x***o
发帖数: 47 | 11 是 Cysteine proteinases，多谢，先看看 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 12 if cysteine cathepsins
please go to:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20860624
and
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9299326
ps: if you are satisfied with this answer,
BAOZI one please transfer to my mitbbs financial account,
Wei-bi 10. |
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s******y
发帖数: 28562 | 13 不好意思，得问一个白痴问题，在C-terminus 加的那个cysteine,
是要C-terminal free acid 形式呢，还是 amide 形式？就是末端那个羧基
的处理是否有讲究？
另外，能不能麻烦你给我贴个连接或者直接和我说说用tri-maleimide
合成dendrimer时候的反应条件？Buffer salt, pH, DTT?, temperature,
time, termination of reaction，等等。
for
e. |
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o****e
发帖数: 1011 | 14 参加反应的是Cysteine的side chain上的-SH。
（不必担心main chain上的-COOH或-CONH2）
the
i.
presented
. |
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L*****t
发帖数: 56 | 15 问题先复制在这里：半胱氨酸（L-Cysteine）的-SH官能团的pKa是多少？
Google第一个结果是8.0, 觉得好像有点低，再往下看发现其他网页都说是8.5
看来Google是很不靠普的，那么我查一下更专业的Wolfram Alpha, 答案是8.18
还是不放心又找来两本有机试剂手册，结果分别是8.33和8.14
我只是想优化一下实验条件而已，难道这种基础信息还要自己动手来验证么... |
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k******0
发帖数: 1073 | 16 I wanted to purify a protein, which is only stable for a couple day in DTT
and then started aggregation when DTT died out. How to prevent this, except
the change of DTT for TCEP? |
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B***Q
发帖数: 182 | 17 keep it anaerobically in the presence of DTT or TCEP? |
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b******y
发帖数: 627 | 19 Upon purification, freeze in glycerol using liquid N2, store at -80, thaw it
when in use. |
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s*******2
发帖数: 598 | 20 See below 1997 paper
Biochem J. 1997 Apr 1;323 ( Pt 1):233-7.
Actin is cleaved during constitutive apoptosis.
Brown SB, Bailey K, Savill J.
SourceDivision of Renal and Inflammatory Disease, Department of Medicine,
University Hospital, Nottingham NG7 2UH, UK.
Abstract
Proteases play an important role in the programme of cell death by apoptosis
but little is known of the substrates cleaved, particularly in constitutive
models of this type of cell death. Neutrophils spontaneously undergo
apoptosis ... 阅读全帖 |
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a********k
发帖数: 2273 | 21 这个的全文也就是一个abstract。
OPTIMIZATION OF RECOMBINANT STREPTOLYSIN-O EXPRESSION
AND ANALYSIS OF FINAL PRODUCT FORMULATIONS SUITABLE FOR
IMMUNODIAGNOSIS.
B Velázquez, H Massaldi and A Chabalgoity. Department of Biotechnological
Development, Institute of Hygiene, Av. Alfredo Navarro 3051, Montevideo,
Uruguay.
E-mail: b***[email protected]
The streptolysin-O gene of Streptococcus pyogenes was cloned in pGEX-2T and
expressed in Escherichia coli, with the aim of using the product in
immunoassays.
Expression... 阅读全帖 |
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r***e
发帖数: 2539 | 22 DMSO一般是还原剂吧，antioxidant. |
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p****u
发帖数: 239 | 23 For Cys-containing peptides, use DMF instead of DMSO. |
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a*********l
发帖数: 10 | 24 No big concerns if <5%. |
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r*****m
发帖数: 3619 | 25 和老子这一代留欧的王大成，留学期间直接贡献了一些方法学，Robert Huber 在诺贝
尔奖得奖致辞上特别提了他的贡献。当然他是一个学生。所谓晶体指导药物设计，那时
就吹起来了。
In 1970, I had begun work on the basic pancreatic trypsin inhibitor which
has later become the model compound for the development of protein NMR,
molecular dynamics, and experimental folding studies in other laboratories.
Work in the field of proteolytic enzymes and their natural inhibitors has
been continued and extended to many different inhibitor classes, proteases,
their proenzymes, and complexes betwe... 阅读全帖 |
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s*******g
发帖数: 36 | 26 想把protein immobilized到sensor chip上，用biacore或者octet Red做screen。。。
可是问题是我label的蛋白一直load不上去，load到的信号非常低。。。。 我用了
maleimide-PEG4-biotin 去label cysteine，结果一直不好。信号就是很低的时候就达
到平衡了，很奇怪。 之后我换成NHS-LS-biotin，这个大家用的比较多，结果load的信
号更低。。 我都有BSA去test labeling，都信号很低。。
我现在的问题是，蛋白肯定是label了，30%左右，我用的1 biotin： 1 protein的
ratio做的labeling，因为不想over label multiple sites on one protein. 都做了
两个月了，快绝望了。。。什么条件都试了，Octet red的信号就是不行！
另外，有人说BSA 不好label，想问问别人有用其他蛋白label的吗，我想做个positive
control， 说明是蛋白的问题，还是label的方法的问题
有经验的人指点一下吧。谢谢了！ |
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A******y
发帖数: 2041 | 27 Most people look at GSH depletion because the cells already have a lot of it
. Some cells if you treated them with high glutamate, it will block
cysteine uptakes and deplete its GSH level. Your probe has a Micheal's
acceptor, so I you will have toxicity around 10s microM, but it is probably
okay to do short term live cell imagining.
I wounder if you treated with certain compounds, would you be able to
determine specific GSH pool depletion because there is a cyto- and a mito-
pool of GSH.
Tsie... 阅读全帖 |
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j***x
发帖数: 1469 | 28 Gene
Volume 187, Issue 1, 10 March 1997, Pages 29–34
The involucrin gene of the tree shrew: recent repeat additions and the
relocation of cysteine codons
Thx |
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f*******K
发帖数: 34 | 29 我知道这篇文章，Sample Multiplexing with Cysteine-Selective Approaches:
cysDML and cPILOT, 相关工作在ASMS会议报道过。他们所用的方法基本还是基于传统
方法改良如Thiopropyl Sepharose 6B resin和Cys TMT，这些基于抗体和resin方法的
富集效率比较低，从鉴定数目就可以看到。我们的富集效率可以达到97%，很轻松鉴定
到10000+ unique peptides。
目前没有同时含有iodoacetamide+phosphate的tag。phosphate可能会被phosphatase酶
切掉，phosphonate不能，因此更加稳定。
至于为什么要富集Cys peptide,因为其low abundance,essential for the biological
activity and structure, highly sensitive and reactive.
同时富集目的是研究PTM crosstalk.在我的文章里面有很好的例子，protein tyrosine
... 阅读全帖 |
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r********r
发帖数: 789 | 30 Developmental regulation of IgM secretion: The role of the carboxy-terminal
cysteine
Roberto Sitia★, †, Michael Neuberger†, Cristina Alberini‡
, Paola Bet★, Anna Fra‡, Caterina Valetti★, Gareth Williams†,
Cesar Milstein† Cell Volume 60, Issue 5, 9 March 1990, Pages 781–790
这片文章太老了到处都找不到acces。 多谢多谢。 |
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j***i
发帖数: 61 | 31 maleimide coupling
接在Cysteine上面 |
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a*****m
发帖数: 13 | 32 因为怀疑现在用的一些含硫脲的化合物可能与蛋白质中的半胱氨酸缓慢起反应，但是不
太确定，问问二者能其反应么？是生成二硫键么？
谢了 |
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h***s
发帖数: 111 | 33 不知道有谁还有这张ACS的光盘?
帮忙找找这两片摘要，多谢！请帮我发到 s***[email protected]; 翻墙不容易
1 Youliang Zhao, Sébastien Perrier, “Controlled free radical
polymerization mediated by cysteine and glutathione-based chain transfer
agents”, oral presentation, Abstracts of Papers (PMSE Preprints), 233rd ACS
National Meeting, Chicago, Illinois, United States, March 25-29, 2007, 96,
p820-821. （Abstracts of Papers of the American Chemical Society 2007, 233:
- 457-PMSE Preprints.）
2 Youliang Zhao, Sébastien Perrier, “A comparative stud... 阅读全帖 |
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y********4
发帖数: 33 | 34 【作者】:
Sherman RL Jr, Chen Y, Ford WT.
【文题】:
Cadmium sulfide and cadmium selenide/cadmium sulfide nanoparticles
stabilized in water with poly(cysteine acrylamide).
【期刊名，年份，卷，起止页码】:
J Nanosci Nanotechnol. 2004 Nov;4(8):1032-8
【链接】:
【求助者email】:
j********[email protected]
【求助者是否发包子】:
Your help will be greatly appreciated |
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k****x
发帖数: 2751 | 35 可以，我以前经常遇到
一般是放些DTT还原回来 |
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k****x
发帖数: 2751 | 37 当年我的peptide是溶解在DMSO中的，因为氧化，换DMF了。 |
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S*********0
发帖数: 982 | 38 normally less than 2%. it depends |
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y***e
发帖数: 6082 | 41 做，用事实证明给他看
那我该如何向老板说no way呢？ |
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P********n
发帖数: 372 | 42 用polymer比较好一些，也比较稳定。另外polymer也容易往上接功能团，比如PEG什么
的，在酸性条件下会比较稳定。 |
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b*******g
发帖数: 1309 | 43 你老板是不是学化学的啊
不是，就抓住他的头 往bench上撞，知道同意为止
PS： 你老板如果是Bawendi就算了，好像只有他能publish cys 修饰的QD在 invivo的结果
纯胡扯。。 |
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y***e
发帖数: 6082 | 44 你好像很看不起B似的，那A呢
你老板是不是学化学的啊
不是，就抓住他的头 往bench上撞，知道同意为止
PS： 你老板如果是Bawendi就算了，好像只有他能publish cys 修饰的QD在 invivo的
结果
纯胡扯。。 |
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m*****e
发帖数: 1506 | 46 agree
那个polymer的合成问题很大
amine怎能和RAFT chain end共存?
的结果 |
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p******9
发帖数: 153 | 47 rt，在2ml的水里加了0.8g的NAOH，加0.4g都不行。 |
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