s******3
发帖数: 28 | 1 蛋白本身不长，才50个不到aa，但是有8个cysteine!之前做表达用大肠融合表达，切了
之后就沉淀啦，估计是二硫键氧化后聚集啦，后来先在空气中把溶菌液搅拌加过氧化氢
氧化，再切，发现切不掉啦，没办法，老板让做真菌和植物，觉得不怎么靠谱呀，因为
蛋白本身就是抗真菌的。哪位前辈给点提示吧，这个做包涵体然后复性有戏吗？或者其
他什么比较高效点的表达系统？有人做过类似的东西么？谢谢呀 |
p****s
发帖数: 3153 | 2 我觉得这老板胡出主意，要是真菌植物那么好做大家都还用大肠杆菌干嘛？关键你没说
清楚，蛋白是可溶的还是在包涵体里？如果是可溶的为什么能用包涵体复性？“切”是
什么意思？cysteine这种东西不能用过氧化氢吧，很容易氧化成磺酸。以前没人做过这
个蛋白么？找找类似的文章。
【在 s******3 的大作中提到】
: 蛋白本身不长，才50个不到aa，但是有8个cysteine!之前做表达用大肠融合表达，切了
: 之后就沉淀啦，估计是二硫键氧化后聚集啦，后来先在空气中把溶菌液搅拌加过氧化氢
: 氧化，再切，发现切不掉啦，没办法，老板让做真菌和植物，觉得不怎么靠谱呀，因为
: 蛋白本身就是抗真菌的。哪位前辈给点提示吧，这个做包涵体然后复性有戏吗？或者其
: 他什么比较高效点的表达系统？有人做过类似的东西么？谢谢呀
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C*********m
发帖数: 213 | 3 查granulin 的NMR 结构文章在protein science上,是用变性复性，HPLC纯化的。
【在 s******3 的大作中提到】
: 蛋白本身不长，才50个不到aa，但是有8个cysteine!之前做表达用大肠融合表达，切了
: 之后就沉淀啦，估计是二硫键氧化后聚集啦，后来先在空气中把溶菌液搅拌加过氧化氢
: 氧化，再切，发现切不掉啦，没办法，老板让做真菌和植物，觉得不怎么靠谱呀，因为
: 蛋白本身就是抗真菌的。哪位前辈给点提示吧，这个做包涵体然后复性有戏吗？或者其
: 他什么比较高效点的表达系统？有人做过类似的东西么？谢谢呀
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C*********m
发帖数: 213 | 4 还有,可以用thioredoxin-tag试试，纯化的时候不加还原剂。
【在 C*********m 的大作中提到】
: 查granulin 的NMR 结构文章在protein science上,是用变性复性，HPLC纯化的。
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W*****o
发帖数: 1780 | 5 Vector pET22b is good at expression of soluble proteins with disulfide bonds
in E.coli without any tag. |
C*********4
发帖数: 40 | 6 是不是还要看表达蛋白的e.coli,可以试试rosetta-gami,这种细菌表达含有二硫键的蛋
白好像不错 |
m**a
发帖数: 1228 | 7 先试试这个
我们以前一个类似的蛋白就是用pET22b在
periplasmic表达的
纯化的时候freeze/thaw，不用破菌
bonds
【在 W*****o 的大作中提到】
: Vector pET22b is good at expression of soluble proteins with disulfide bonds
: in E.coli without any tag.
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