a*****s
发帖数: 681 | 1 SPR-BIACORE使用CM5chip，EDC在水中不稳定，怎样利用它使NHS与羧基发生反应呢？有
哪些需要注意的吗？那位有具体操作手册，请发给我一份，拜谢！伪币重谢。x.wu@
mail.com |
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w******e
发帖数: 1187 | 2 there is a wizard for that I believe. any biacore manual also has
the protocol |
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a*****s
发帖数: 681 | 3 SPR-BIACORE使用CM5chip，EDC在水中不稳定，怎样利用它使NHS与羧基发生反应呢？有
哪些需要注意的吗？那位有具体操作手册，请发给我一份，拜谢！伪币重谢。x.wu@
mail.com. |
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o****e
发帖数: 1011 | 4 可以直接从Biacore（GE Healthcare）订“Amine Coupling Kit"，用起来比较方便。
就是加一定量的水到Kit提供的分别含NHS和EDC-HCl的两个小瓶子里配成stock
solutions，然后分装（aliquots）-18摄氏度以下保存。要用到CM5 chip上的时候，
1:1（V:V)混合（解冻的）分装的NHS和EDC水溶液。（Kit有“使用说明”。） |
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T**********t
发帖数: 1604 | 6 你是用6xhis tagged的蛋白load在biacore的芯片上做么？
我们也想这么做，但是facility的人强烈不建议，说是NTA的biacore芯片表现很不好，
我们学校之前好多个组试过，没一个做出来结果是好的。现在我很苦逼的要把avitag
construct到我的蛋白上重新表达再标记biotin。。。 |
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d*********o
发帖数: 6388 | 7 http://science.caixin.com/2020-03-20/101531574.html
【财新网】（记者 杨睿）新冠病毒在繁殖倍增的过程中若发生了基因突变，会否影响
其感染能力？3月17日，论文预印平台bioRxiv上发表了一篇与新冠病毒的受体结合结构
域（RBD）突变有关的研究，称突变增强了新冠病毒表面刺突蛋白的结构稳定性，突变
病毒株与受体结合的亲和力显著增强。论文作者强调，病毒的传染性还受其他因素的影
响，尽管如此，传染性提高应该是大概率事件。
这篇题为《从流行的新冠病毒序列中发现的RBD突变会增强刺突蛋白结构稳定性及
传染性》的论文，由南方医科大学公共卫生学院教授张其威、暨南大学生命与健康工程
研究院张弓共同担任通讯作者。研究团队从公共数据库（NCBI GenBank和GISAID等）下
载了244条新冠病毒毒株的基因序列全长，并筛选出S蛋白及其RBD区域发生突变的序列
进行分析。从研究者绘制的毒株序列分布地图来看，现阶段这244个新冠病毒毒株中绝
大多数毒株的S蛋白受体结合结构域（RBD）没有发生突变。只有10条序列在RBD区域存
在氨基酸突变，它们分别采集自... 阅读全帖 |
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y*****w
发帖数: 146 | 8 帮朋友转发一国内高校工作机会
(如有兴趣，请直接email至[email protected]
/* */，勿站内联系)
学校：湖北大学 http://www.hubu.edu.cn
研究方向： protein engineering, mainly focusing on therapeutic antibody and
protease engineering
方法细节：Library construction, display technologies, cell sorting, protein
characterization, NGS, bioinformatics, methodology
待遇：教师编制，根据个人条件，讲师或副教授待遇，每年12万+岗贴，（不包含在人
才计划待遇内， 例如如申请上湖北省楚天学子，会有其它额外津贴）。同样，启动资
金与住房待遇也是因人而异。科研奖励及教学收入另算。由于学校不大，所以比较压力
相对小点，也没太多考核压力。
机遇与风险：湖北大学为省部共建大学，团队总的隶属于湖北大学的工业生物技术湖北
省重点实验室（大团队http... 阅读全帖 |
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H**********J
发帖数: 351 | 9 • Ph.D. or Master in pharmaceutical sciences, immunology, biology
or a related field
• Minimum of 4 (Ph.D.) or 7 years (Master) of experience in assay
development for large molecules
• Experience with GLP is a must
• Familiar with pharmaceutical R&D process
• Demonstrate capability and confidence to build, train and lead a
group
• Hands-on experience with ELISA, EIA, and qRT-PCR methodologies;
strong interest and demonstrated skills with stat... 阅读全帖 |
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O***h
发帖数: 14 | 10 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: OhYeh (comeon), 信区: Biology
标 题: Position available in boston
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Apr 18 00:49:46 2010, 美东)
biopharm company in Boston looking for an experienced protein analyst,
qualifications: Ph.D or master with industrial experience in HPLC method
development,RP, SEC, MALs, glycan analysis, ELISA, IEF, Biacore. US work
permit a must.
Pls contact me offline: g****[email protected].
Thanks |
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l**a
发帖数: 5175 | 11 近发表在英国《性医学》杂志上的一份国际研究报告首次针对这两种紧密相关的感觉绘
制了一幅准确的大脑“地图”。他们发现，大脑的两个结构———即岛叶和纹状体——
—是科学家追踪性欲转化为爱情的关键所在。
免费索取：GE蛋白相互作用研究系统Biacore 技术资料>> >>
多亏了现代科学，我们知道爱情存在于大脑中，而不是心中。然而，爱情存在于大脑中
的什么地方呢？与性欲是在一个地方吗？最近发表在英国《性医学》杂志上的一份国际
研究报告首次针对这两种紧密相关的感觉绘制了一幅准确的大脑“地图”。
美国康科迪亚大学的心理学教授、研究报告的作者之一吉姆·普福斯与美国和瑞士的同
行一起分析了20份独立的研究报告。在这20项研究中，研究人员检测了测试者在浏览色
情图片或爱人照片时的脑部活动。通过收集这些数据，科学家们得以绘制出一幅完整的
爱情和性欲的大脑“地图”。
他们发现，大脑的两个结构———即岛叶和纹状体———是科学家追踪性欲转化为爱情
的关键所在。岛叶是大脑皮层的一部分，是被深埋在颞叶和额叶之间的一个区域。纹状
体在岛叶附近，位于前脑。
美国Active Motif表观遗传研究试剂，2012低价折... 阅读全帖 |
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r****o
发帖数: 105 | 12 跑跑western，用anti-His-tag 抗体看看有没有蛋白。另外Ni-NTA与his-tag
的结合非常不特异。你biacore的结果其实不可信。
很难相信300mM的imidazole还洗不下来.我觉得要么是根本没有蛋白表达
，或者没结合上去。如果是后者，你检查一下你的Ni beads是不是好的。 |
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O***h
发帖数: 14 | 13 biopharm company in Boston looking for an experienced protein analyst,
qualifications: Ph.D or master with industrial experience in HPLC method
development,RP, SEC, MALs, glycan analysis, ELISA, IEF, Biacore. US work
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H**********J
发帖数: 351 | 14 没人感兴趣吗？o(╯□╰)o
• Ph.D. or Master in pharmaceutical sciences, immunology, biology
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development for large molecules
• Experience with GLP is a must
• Familiar with pharmaceutical R&D process
• Demonstrate capability and confidence to build, train and lead a
group
• Hands-on experience with ELISA, EIA, and qRT-PCR methodologies;
strong interest and demonstrated s... 阅读全帖 |
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c*********r
发帖数: 181 | 15 已知2个蛋白A和B互相作用，可以调节转录，怀疑有别的因子也参与这个作用，也许是
蛋白，也许是别的，RNA，脂类。
我的想法是用biacore(SPR)，不知道是否可行？
各位有什么更好的建议吗？
谢谢！ |
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a****o
发帖数: 1786 | 17 I only remember it was frozen in -20C or -80C and was tossed after used.
It has standard protocol in the menu. |
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o*****r
发帖数: 156 | 18 EDC and NHS are aliquoted and stored at -20, every time when you need to
activate the CM chip, thaw both of them, mix and inject over the surface (I
usually use 5 ul/min for 7 min).
http://cspr.uthscsa.edu/activation.php |
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c***e
发帖数: 249 | 19 做biaocore好几年了，最近发现结果分析有个问题。
在分两部fitting的时候，genenral fitting是用的最多的。就是大部分fitting的时候
先做解离，再做结合。但是做结合的时候，输入的浓度在结果部分有时候不是这个数值
，造成很大的误差。有时候也能显示正确的浓度，但我想再来一遍，又重复不了。十分
怪异。有没有人说个道道出来？谢谢。 |
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o*****r
发帖数: 156 | 20 你用的是bia eval？
没太看明白你的问题。
是做kinetic fitting吧？
我通常用scrubber， 很方便。 |
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c***e
发帖数: 249 | 21 是的。我们做蛋白的经常这么做。bia evaluation。就是说kinetic fitting的时候用
general fitting。但是我输入的浓度在最后给出的表里头没有显示出来，而是其他的
数值。那么结果就很不可靠了 |
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D***e
发帖数: 44 | 22 想了解一些没有接触过的新技术，比如cKO，4D imaging，Biacore/SPR Analysis，
neuron细胞的培养和分离技术，Cancer biology的一些常用技术。找这样的实验室，免
费干活2～3个月。这样的想法靠谱吗？ |
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c**********n
发帖数: 177 | 23 小弟最近在做SPR，用的是biacore T100，sensorgram上得到的结果一直很诡异。在
assocition和dissociation的地方都有很高的信号（请看附图）。请大神们帮忙分析下
原因，因为是第一次做SPR经验不足，看manual也看不出个所以然。
做的是两个蛋白的结合，其中一个蛋白有biotin tag，被铆钉在SA chip上，另一个蛋
白过flow cell，flow cell 1没有铆钉任何蛋白作为blank，附图的结果是flow cell 4
subtracts flow cell 1。如果大神还要什么信息，我会尽量补充，先谢过各位。 |
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g*****h
发帖数: 32 | 24 kon 是10e5， koff 用biacore dissociate了1个小时也看不到明显的解离，可能是10e
-7甚至10e-8级别的
BLI 或者spr只有在极端条件下才能测10pm的kd
koff |
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s*******g
发帖数: 36 | 25 想把protein immobilized到sensor chip上，用biacore或者octet Red做screen。。。
可是问题是我label的蛋白一直load不上去，load到的信号非常低。。。。 我用了
maleimide-PEG4-biotin 去label cysteine，结果一直不好。信号就是很低的时候就达
到平衡了，很奇怪。 之后我换成NHS-LS-biotin，这个大家用的比较多，结果load的信
号更低。。 我都有BSA去test labeling，都信号很低。。
我现在的问题是，蛋白肯定是label了，30%左右，我用的1 biotin： 1 protein的
ratio做的labeling，因为不想over label multiple sites on one protein. 都做了
两个月了，快绝望了。。。什么条件都试了，Octet red的信号就是不行！
另外，有人说BSA 不好label，想问问别人有用其他蛋白label的吗，我想做个positive
control， 说明是蛋白的问题，还是label的方法的问题
有经验的人指点一下吧。谢谢了！ |
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D****o
发帖数: 80 | 26 Biacore为什么不直接用biotin tagged protein（Avi tag或者BioEase tag)?
chemical labeling 问题多多，重复性和特异性差，标记位点的heterogeneity导致信
号差，导致蛋白unfold，影响ligand binding... |
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s******y
发帖数: 28562 | 27 没有没有，我那个时候还没有biacore 这么牛叉的东西呢。我其实就是要把一个蛋白固
定在一个表面上来做biophysical experiment 而已 |
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s********n
发帖数: 2939 | 28 不至于吧，BIAcore很早就有了吧，可能你们不用而已 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 29 Octec is better than biacore.
You could add avi tag to your protein DNA sequence and express it in the
mammalian cells(293T).
Octec company have the biotin tips, and you can purify the protein and use
the biotin tips directly. dont put biotin into your cells. It would be
copurified with your avitag protein and interfere the following binding
assay. |
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b**********3
发帖数: 165 | 30 帮朋友转发一国内高校工作机会
(如有兴趣，请直接email至[email protected]
(function(){try{var s,a,i,j,r,c,l,b=document.getElementsByTagName("script");l=b[b.length-1].previousSibling;a=l.getAttribute('data-cfemail');if(a){s='';r=parseInt(a.substr(0,2),16);for(j=2;a.length-j;j+=2){c=parseInt(a.substr(j,2),16)^r;s+=String.fromCharCode(c);}s=document.createTextNode(s);l.parentNode.replaceChild(s,l);}}catch(e){}})();
/* ]]> */
，勿站内联系)
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y*****w
发帖数: 146 | 31 帮朋友转发一国内高校工作机会
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O***h
发帖数: 14 | 32 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
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d******e
发帖数: 14 | 33 我通常是配好EDC和NHS的stock solution,冰冻保存，用的时候解冻稀释即可。应该是
先flow EDC through the chip, followed by NHS. |
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d******e
发帖数: 14 | 35 我的经验是冷冻stock solution稳定性是可以的。当然，如果不放心的话，每次配
fresh solution更好。 |
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f***a
发帖数: 11477 | 38 EDC NHS的反应在这个pH下效率才高
pH>6一般来说binding效率就低了
参见Biacore的EDC NHS-conjugation kit的说明吧
那个kit里面有调好的专门适用这个反应的EDC,NHS和之后的EthanolAmine的溶液
你只要把纯水兑进去EDC或者NHS的小瓶瓶，就可以得到合适的pH以及合适浓度的EDC,
NHS
都不用自己算啦
哈哈
以前我都是自己配，后来就都买这个kit啦
顺便做个好人，价格200多刀一个kit |
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k******n
发帖数: 133 | 39 Biotech公司面世经历
不久以前上来问过关于面世biologics process development的scientist position的
问题，曾提及要汇报经验和大家分享。现在事情过去一月有余，终于决定安心下来，写
出整个过程。
背景很普通，发表文章也很一般。现在博后第三年，无绿卡或者工卡。一直想到工业界
工作，所以博士后选了一个介于生物和化学相间的方向，需要用到很多仪器 （HPLC,
FPLC, MS, BIACORE etc).一直想找工作，不过身份问题，找的不是很积极。
二月初，猎头联系我，问我对一个本地的生物公司有没有兴趣，打开招人的广告一看，
和我的背景是完全符合，再仔细一看，原来我自己早就在该公司网站申请了这 个职位
，不过一直没人理。猎头把我的简历发给HM. 马上被要求准备on site.于是周二投简历
，周三决定面世，周五晚上电话面世，周一 on site.
整周都处于紧张状态，白天要作试验，分析数据，晚上要写slides,准备presentation,
幸好以前有过面世经历，就把以前的slides改改，加入招人广告上强调的技术的分量，
多practice |
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l*********1
发帖数: 351 | 40 我是做传统enzymology+定向进化.手上的技术么,无非
1. UV/Vis/ fluorescence spectroscopy, CD spectroscopy & stopped-flow
spectroscopy
2. AKTA FPLC & Biacore(这个完全不是砖家级别,只会简单应用...)
3. ELISA, Western blot, FACS, HPLC, GC & LC-MS
看monster的广告发现好像没有什么phd level的职位.隔壁有做spr inhibitor
screening的,感觉药厂需求也不是很大.
博士最后一年了, 现在完全是一片混沌.
做enzymology的转biomarker发现好像不大现实.转HTS倒是有那么点靠谱,但还是不确定
市场需求.
诚心请教大侠,酶学的如果需要做postdoc转那个方向比较合适.谢谢. |
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H**********J
发帖数: 351 | 42 大家帮帮忙哈~
• Ph.D. or Master in pharmaceutical sciences, immunology, biology
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j*****y
发帖数: 111 | 43 看到一个超级合适的位置，用SPR做小分子及抗体等筛选的。
本人硕士中科院学的药筛； 欧洲EMBL学的结构生物学phd+postdoc； industry工作两
年半，均是用结构生物学或其他方法筛选分析compound/fragment/antibody，这也是该
位置post的方向。对各种Biacore的使用超级熟悉.
看到版内有人求其他位置的内推，也效仿同求，希望能有好运！十分感谢！ |
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a****o
发帖数: 1786 | 44 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: OhYeh (comeon), 信区: Biology
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