由买买提看人间百态

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全部话题 - 话题: beaded
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G***G
发帖数: 16778
1
来自主题: Living版 - how to homemake a fertilizer spreader
I tried my method once again after this spring.
It worked very well. Actually it is not tiring at all.
Buy fertilizer beads. The smaller, the better.
If you buy smaller fertilzier beads, you actually don't need to shake and
the beads will automatically fall into the ground from the milk bottle.
If you really don't want to shake, you can try put the milk bottle in a baby
cart. You just push the baby cart around your yard.
I don't try the baby cart method. I am afraid my neighbors will laugh at me... 阅读全帖
G***G
发帖数: 16778
2
来自主题: Living版 - how to homemake a fertilizer spreader
I tried my method once again after this spring.
It worked very well. Actually it is not tiring at all.
Buy fertilizer beads. The smaller, the better.
If you buy smaller fertilzier beads, you actually don't need to shake and
the beads will automatically fall into the ground from the milk bottle.
If you really don't want to shake, you can try put the milk bottle in a baby
cart. You just push the baby cart around your yard.
I don't try the baby cart method. I am afraid my neighbors will laugh at me... 阅读全帖
r*g
发帖数: 3159
3
最后一段有意思。
这个不算是贬珠算。是贬那个人而已。
"the cube root of 27 is 3 ..."
He picks up his abacus: zzzzzzzzzzzzzzz— "Oh yes," he says.
I realized something: he doesn't know numbers. With the abacus, you don't
have to memorize a lot of arithmetic combinations; all you have to do is to
learn to push the little beads up and down. You don't have to memorize 9+7=
16; you just know that when you add 9, you push a ten's bead up and pull a
one's bead down. So we're slower at basic arithmetic, but we know numbers.
i***A
发帖数: 261
4
来自主题: Louisiana版 - Mardi Gras真得是狂欢节!
带着远道而来得朋友去New Orleans看Mardi Gras,
parade真得很精彩,各种花车色彩鲜艳、造型别致,
很有味道。开始我们还要beads,到后来脖子上已经
挂了无数的各种各样的beads,目标转向毛绒玩具和
塑料玩具。可能因为今天是Fat Tuesday而且是最后
一天的parade,花车上的人显得特别大方,几乎每辆
车都扔玩具,有的干脆把所有存货统统扔了下来。站
在前排的许多人手上都要到好几个大的玩具,我们当
然也没有空手而归,前前后后也要到差不多十个玩具。
parade还是相当的精彩,大大出乎我们的预料。
晚上的bourbon street, 更加疯狂。beads飞来飞去,
当然,show something的是少数,不过我们还是看到
不少。有幸用DC拍了几组movie,虽然效果不是很好,
可以见证当时的疯狂。
如果你没有来过New Orleans看过Mardi Gras,还是有
必要来看一看,最好不要错过Mardi Gras当天(Fat
Tuesday)的parade,强烈推荐!!!
m*****5
发帖数: 23482
5
来自主题: NewYork版 - 手工劳作

broadway around 28th street, there are some stores carry all kinds of beads
even jewelry bead store, they also carry some cheap beads
also fashion district, check with button stores
b*******r
发帖数: 432
6
来自主题: Ohio版 - hehe...
1-a. beads的故事
现在凡是要去New Orleans的大概都知道French quarter和Bourbon St了,大概
也都知道Mardi Gras和beads的故事。不过么,这些东西如果搁在50年
甚至更多以前珠串还没有四处流行时还是很有趣的,但到了现在,很多
城市的嘉年华会和狂欢派对上几乎是一样的beads乱飞,如果你曾经
经历过这样的狂欢,NO至少在这方面已经没什么新意了,虽然我没有
经历过Mardi Gras, 但怀疑最多也只是规模上稍有区别而已。象俺们
Ohio, 虽然土一些,每年Halloween时在Athens也有类似的比较大规模的
狂欢庆祝:楼上楼下互相对着喊"show ur tits", 即使天气寒冷,仍可见
男人女人们裸露的胳膊大腿胸部臀部四处乱飞,另外人们戴着各式各样的
化妆和假面东游西逛,记得有一次看见三个小伙,中间一个人
化装成一个大大的penis,另外两个走在两边,化妆成testicles,
这倒也没什么,看了偷着乐就完了,偏在这时旁边一个同行的mm好奇地
盯着看,还问我“那是个什么东西呀?” 我当时就&$#(!&#~$)_+#%!,
灵机一动
V*****n
发帖数: 893
7
来自主题: Cycling版 - Tour De Cure Ride
you should find someone good to teach you by hand. you must try it to learn
it before the ride.
sounds intense, but girls who change their own tires are way sexy!
also need to determine the beads of your tires. you should have kevlar bead
(aka folding) tire. if you have wire bead tire, forget about it. most girls
don't have the figure strength to change it.
c*****l
发帖数: 83
8
来自主题: Cycling版 - anyone setup tubeless?
冬天在家·试着弄tubeless三辆车.
1.UST rim + rugular tire(wire bead), floor pump succeed (easy)
2.regular rim (claim tubeless ready)+ regular tire(folding) + gorilla tape,
floor pump succeed (with the soaping water method), little hard
3. regular rim + regular tire (folding bead) + gorilla tape. floor pump
impossible
use this this trick worked
http://www.bikeradar.com/us/mtb/gear/article/how-to-make-a-tube
same rim + wire bead tire, even with trick didn't work.... the tire is old
guess. 9 years old bike.
v*******l
发帖数: 5042
9
来自主题: Fishing版 - 给麻小鱼----Woolly Bugger fly tying
这里再加一个变种,我直接叫它 Bead chain eye leech,功效和屋里八哥差不多,甚
至更“通杀”!
其变化就是
1:用bead chain eye代替bead head;
2:钩可以小一些;
3:视鱼种、水域、季节看看是否加铅丝;
4:不需要使用颈羽缠绕出body毛毛;
以下是示意图,过程和woolly bugger差不多一样,在此不再重复。
好了,今冬的wet fly tying,暂时先做这些,以免引起“视觉疲劳”,嘿嘿!也算是
抛砖引玉,感兴趣的弟兄们可以参考并发挥,基本上fly tying就是昆虫学、想象力和
手工的综合,没有什么限制和禁忌,可以自由自在、无拘无束的任意发挥。所谓“甭管
黑毛还是白毛,钓到大鱼就是好毛!”
春天开始,随着季节变化,我会逐步根据鱼情,再加入一些Nymph,还有主要是一些dry
flies的介绍。(有些英文分类比较混乱,名词很多,我也记不住,什么streamer啥的
c*******z
发帖数: 604
10
周六午饭后赶往Russian River Ferry和约好的朋友钓鱼。钓鱼的人和往常一样多,但
是三文鱼情不好,大部分人身后都没鱼。瞎转了一会,朋友竟然打电话说不能来了。既
然来了,就钓一会吧。鱼情不好,也不想总是搞Bottom Bouncing,就决定钓钓Wild
Rainbow Trout。以前听人说过,在Kenai River 和 Russian River 交界的附近,有不
少Rainbow。这些Rainbow都比较懒,平常就躲着深浅水交界的地方的石头后休息,就靠
附近飘过的三文鱼鱼卵或碎鱼块为食。钓它们的就好方法就是用鱼卵或鱼肉做Bait,以
前看见有人用single bead pattern飞钓。single bead pattern 就是模拟loosed
salmon egg. 由于有足够的食物,那个区域的Rainbow 比较挑剔,因此Bead 的颜色和
光泽,以及整个presentation非常重要。Wild rainbow在那个区域很受保护,只允许
unbaited single hook with artificial lure, daily limit是1,并且只
v*******l
发帖数: 5042
11
来自主题: Fishing版 - 惊涛小论--披头士兵。
咱不是抬杠唱对头戏啊。这个饵我以前用得比较多,说实话也上鱼,但是效率差点。再
加上钓组比较啰嗦,经常和线乱缠,后来就不用了。也可能是我水平太差,玩不转这个
饵。
改装为:
8字环---------bead--spinner -- bead -- 钩子穿软饵(----为leader,bead为珠子
)。
这样简单有效一些,风阻也小。
M*******0
发帖数: 1502
12
来自主题: GunsAndGears版 - 今天遇到高人了!
那位老兄用的就是这把枪:
http://www.greatlakessportingarms.com/trap-combo-p-243.html
不过,他也说,真正的高手用什么枪都能打出好成绩。不禁让我联想到武林高手的兵器
也总是信手拈来的。
试了试那把枪,工艺精细,头重脚轻,云深不知处。
也咨询了一下HUNTING的事情,这位老兄很少在LOCAL打,而是去MEXICO,因为那里是
UNLIMITED,说一天能打二百多只。
在技术上的收获是进一步理解了什么是真正的“POINT”。他说我的打法是“指哪打哪
”,瞄准的时候几乎看不到BARREL上的RIB,以BEAD重叠在CLAY上为最佳,所以我的
SHOTGUN BEAD会与TARGET相互干扰。应该是只FOCUS在CLAY上,POINT的时候应该是能看
到部分的RIB,CLAY会在BEAD之上,有非常CLEAR的VISION。我试了试,打得比之前轻松
了很多,不过成绩略差于之前,估计是还没有完全适应。另外,就是要在CLAY的上升期
干掉它。如果是下降期,会有所不同。
再有,避免肿脸的方法是要紧贴枪托,CHEEK PAD也是有帮助的。刚O
f*********n
发帖数: 11154
13
来自主题: GunsAndGears版 - 现在想去死了,真的是要请教练了
那就是眼睛和rib不是平行的,一般trap枪上有两个beads,眼睛看出去因该是中间那个
bead把front
bead盖住70-80%,但是没有完全盖住,这样打出去比你实际看得地方要高一些。
如果你的sporting也是打下面,那trap枪弹丸一般就从目标上面过去了。
S**********s
发帖数: 4534
14
来自主题: GunsAndGears版 - 战术霰弹打slug归零的问题
the sad part about bead sight is....there is probably no zero.
you have to HAVE a rear sight in order to zero.
bead is just....a ball. depends on your cheek weld, your zero pretty much
changes every time, but it really makes no difference since you're not
shooting for nail driving accuracy with a bead.
f****t
发帖数: 15913
15
来自主题: GunsAndGears版 - Dick's 店里 Shotgun 有渐渐多起来了。
那个红色bead穿透了枪管,从枪管内壁可以看到红色的塑料bead,不知那bead何时会崩
飞了。
f*********n
发帖数: 11154
16
来自主题: GunsAndGears版 - American Trap的规则及入门
每个打碟人孜孜不倦追求的目标都是准确命中更多的碟;抛开枪弹的因素,最重要的就
是人的技巧了。虽然每个人的修炼程度不一,但是有很多适用于每个人的技巧:
---- Patterning以及Point of Impact
新枪到手,多数人第一反应就是拿上子弹直接去靶场打几局;我也这么干。但是想要真
正了解这把新枪,需要做patterning,也就是了解这把枪在特定的sight picture里弹
丸打出来的是什么样的pattern。具体步骤勃郎宁的网站有一个很详细的介绍,我也是
从那里学来的:
http://www.browning.com/customerservice/qna/detail.asp?ID=290
这个步骤的最重要原因是了解point of impact,也就是你的枪打出来的散步有多少是
在你的瞄准点之上,多少在之下。根据这个信息你要调整你在打飞碟时候的瞄准点。如
果枪的POI是50/50,那么打碟的时候你的枪口需要将碟的下半部盖住;而如果是60/
40,你的枪管只需要将碟的最下面1/4盖住;如果POI是90/10,那么在跟踪碟的飞行
轨迹时飞碟始终应该在枪的front b... 阅读全帖
z**********n
发帖数: 233
17
来自主题: Craft版 - 请问版上的JM们
1.那个金属片是花托,也就是你说的bead cap,有时是用在两端做固定用,有大有小,
主要是看你珠子的大上来选择。
2.要挂一个珠时通常用T型针(head pin)或9针(eye pin)来固定,然后挂到bail上。
不过你贴的那第二个图,我看不太清,好象没有用到这pin, 有可能本身就是一个整体
的项链坠。如果用到的话,应该是选head pin。
仅供参考。

bead
bead
s*****y
发帖数: 4595
18
这个不难做,我们从图书馆借的专门教小孩子beading的书,她也不认识字,就是照着
图,再听我给她解释穿着玩儿。我们用的是这本书 Totally Beads,里面有专门一章就
是讲做bracelet的。
http://books.google.com/books?id=I0OcdQgan9QC&dq=totally+beads&printsec=frontcover&source=bl&ots=IeFAFbcxM7&sig=XkHuNfInukM_ilYNrPkD3lMTXTE&hl=en&ei=z1JwSpCSB47iMNfL7NwI&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=4
我女儿自己做了一套项链,手链,发卡送她的好朋友做生日礼物,小姑娘很喜欢呢。材
料就是walmart和micheals买的普通塑料珠,主要考虑到这么大的孩子容易弄坏弄丢东
西,象版上mm通常用的比较好的材料做的首饰给小孩还是有点可惜。;p
不过家有小小宝是要注意点,最好等他/她睡了再做。
r*****g
发帖数: 573
19
好像是没有见过在珍珠外面加bead cap的
关键还是要买对size啊,你觉得有没有百搭的bead cap?

bead
..
s***e
发帖数: 404
20
来自主题: Exchange版 - 也转点DIY的首饰
non-cc paypal or BOA transfer, 站内信箱联系
下面都是仿jcrew的耳环,吊坠长都是大概1 inch,
#1. Blue $6.99
#2. rosaline (pink): $6.99
#3. Bronze: $6.99
#4. creamrose light:$6.99
材料:9mm blue/rosaline/bronze/sreamrose light Swarovski pearls, 8mm fireballs, 5mm or 6mm 5500 Swarovski crystal AB beads, silver plated round beads or gold-plated stardust beads
耳针:sterling silver (925银即首饰用纯银) or 14K gold-filled(14K包金)
Chain: sterling silver or 14K gold filled
#5 multi-color druk glass $5.99
材料:druk glass 6-10mm, 8mm fireballs
耳针
s***e
发帖数: 404
21
来自主题: Exchange版 - 也转点DIY的首饰
21. bracelet
$11.99
All sterling silver and Swarovski beads:
sterling silver chain,
sterling silver daisy spacer beads
sterling silver wire
sterling silver clasp
Swarovski 5mm rose bicones, and Swarovski 5-6mm crystal AB 5500 beads.
s******i
发帖数: 188
22
来自主题: Exchange版 - 也转点DIY的首饰
I want 4 11 19 24
Thanks mm!

fireball(#1) or 8mm fireballs(#2,3,4,5), 5mm or 6mm 5500 Swarovski crystal
AB beads, silver plated round beads or gold-plated stardust beads
p***y
发帖数: 516
23
来自主题: Exchange版 - 转手工耳环
$5.5
材料: 耳钩:gold filled
clear crystal beads: swavoski crystal
green bead: quartz
pink bead: rose quartz
m****t
发帖数: 609
24
来自主题: Exchange版 - haha,水晶珊瑚贝壳耳环来咯
Paypal交易,邮费不含。目前所有耳环上都是用的925银钩钩,要是mm们想换成gold
plated的钩钩或者耳夹都可以。不过耳夹会稍微贵一点。呵呵,谢谢大家,希望大家喜
欢。
1号 $5 :Blue/Black swirl glass,Natural shell beads
2号 $5 : Green Opaque Class Fctd,gold plated beads
3号 $5 : 黑色水晶,仿珍珠
4号 $5 : 黑色和红色水晶
5号 $5 : 红色珊瑚和黑色水晶
6号 $3 : 毛绒球球,镀银链子
7号 $5 : 红色珊瑚石
8号 $2 : 镀银球球和蝴蝶结
9号 $3 :red jasper semi-precious, natural shell beads
10号 $4:仿绿松石
11号 $3:贝壳珠子
12号 $6:各色水晶
s****r
发帖数: 742
25
来自主题: LZU版 - 汗。。
我终于知道是怎么回事情了!!!
beads 是用来交换的, 很多males 拿beads 换一些females to show their breasts...
females 也可以让males show 一些身体. 真搞笑! 和电视上演的college girl gone
wild 一样.
我晚上去了6th 大街,那个热闹压!
警察巨多,天上费的,地上跑的,摩托车,汽车,甚至还有骑警..
男生可是大饱眼福,快赶上看脱衣舞了,还是免费的.

到处都是音乐,很多人都脖子上挂着一串或者几串各色各样的bead,
r****o
发帖数: 105
26
本文献给YL
(二十一)离子交换层析
 做完硫酸铵沉淀以及等电点沉淀之后,下一步就是做离子交换层析
(ion-exchange chromatography)。离子交换层析原理很简单,利用蛋
白质表面的带电基团和resin上带相反电荷的ion exchanger group相互结
合来纯化蛋白。离子交换柱和affinity chromatography一样,属于
absorption/desorption型的层析方法,与gel filtration完全不一样,其中
一个最大的优点是,样品体积可以很大,最后的洗脱样品的体积可以小很
多,这样实际起到了一个浓缩样品的作用。还有一个优点是,离子交换层
析其实不需要柱子,可以用batch 的方法(在离心管里面混合beads和样
品)。当然如果beads量多情况下,batch方法平衡得不是很好,导致
resolution不是很好。这一点我们做实验的时候深有体会,以后的一篇中我
会提到。我们纯化钙调蛋白用了柱子做纯化,原因是因为所用的beads 相
当于Sephadex G-50再加上阴离子交换基团,所以实际上可以看成是
S*****s
发帖数: 287
27
gel extraction 有两种 kit,一种是用 column 纯化,另一种是用 beads 纯化,和做
co-ip 的 beads 差不多。100bp 的小片段最好还是买那种 beads 纯化的 kit 比较好
,产量也高。
T**********t
发帖数: 1604
28
来自主题: Biology版 - 有人用sulfo-NHS-LC-biotin吗?
Pierce专门有测biotin labeling efficiency的kit,不过我嫌麻烦没买。
我做fluorophore labeling也是用它家的kit,反应的chemistry都差不多,那个的
efficiency不错,我就将就认为biotin label的也不错了。
biotin-streptavidin的binding很好的,我用biotin label的peptide和streptavidin
beads incubate,前后能相差80%。
还有一个可能,就是你的protein太多,beads太少,beads饱和了。
f******e
发帖数: 125
29
来自主题: Biology版 - Sephadex G150
How long is Sephadex G150 shelf time? We have one bottom of Sephadex G150 in
our lab. The bottom looks very old. I swelled the beads and when I prepared
the column a lot of beads came out of the column. The column is brand new
and this is the first time I used the column.
The column is supposed to hold beads larger than 20 micron.
Any suggestions? Do I need to buy new Sephadex? or something wrong with the
column preparation.
Thanks alot
C***Y
发帖数: 61
30
来自主题: Biology版 - 关于co-ip的!

状态,我们文章里面,
overexpression可以检测到binding,但内源的试了几次,摸索了不同buffer条件没有
成功,以前就看相关文献,一篇cell
里面可以内源检测到该蛋白和一个底物binding,但我们没有重复出来,就连
overexpression这2个蛋白,我们也没检测到
binding,哎,十分frustrated啊,coip就是很tricky。
Hopefully these tips will be helpful.
Make sue you have a very good 1st antibody. A strong antibody is capable of
pulling down weak interaction
partners.
Crosslink 1st antibody to beads and elute co-purified protein complex from beads
after washing (instead of boiling
beads) to reduce background.
Use ECL plu
K**********e
发帖数: 188
31
想用来亲和纯化细胞裂解液里面的Flag tag的蛋白。用了sigma公司的ANTI-FLAG M2
Affinity Gel。
请问
1 这种beads使用前想离心wash,很难离心下去,因为很细小。一般每次用多少转速多
久?我用了500 g,怕转速高了把
beads弄坏了。
2 100 ul beads最多能结合多少毫克蛋白?
这两个问题sigma的datasheet上都没说(或者我没找到)。
盼望能有人指点下。谢谢!
e****s
发帖数: 1125
32
来自主题: Biology版 - 亲和层析的功过是非
乱猜一下,感觉这个更像是蛋白在Beads上Denature了。
你说的“最后Beads fraction”是用SDS之类的变形溶液洗下来的吗?还是GSH洗下来的
?都被Thrombin切开了(有没有试过GST elute下来以后再切?我猜你是在Beads上切的
)?
S******e
发帖数: 393
33
谢谢!
我做了两次,基本是一致的结果,目前还在做。
用的是sigma的M2 flag agarose beads,
600-1000ug总蛋白做IP,pre-clearance with IgG beads for 3hrs,
add flag beads, 4度rotate for 5hrs,
wash 3 times with lysis buffer,
then wash once with high salt(500mM NaCl) lysis buffer,
final wash with TBS,
SDS sample buffer elute(下次准备用flag peptide elute)
还请多指教。

domain
affinity
y******8
发帖数: 1764
34
proton也许是1 um
bead本身没有极限,但是太小了,chip loading需要很大改动,没准要一个20k的
loader
再就是Ion的pH计原理让信号不稳定,尤其需要bead这个中介。这让今后的downsizing
变得困难。如果没有了bead,整个下限会多一个数量级,通量会上100倍。
去掉emPCR, 流程可能快很多。
这些都需要Ion推出新的芯片甚至机型,所以proton应该降价。
a******c
发帖数: 597
35
来自主题: Biology版 - CoIP- mass spectrum 求助
如果IP后bands很多,可能是lysate的微小的不溶性pellet沉淀的原因,同时也和
antibody特异性有关。可以这样改进,细胞lysate IP前,超高速离心15分钟,上清用
protein A beads preclear。在lysate里加一抗binding不要超过一小时。加protein A
beads前,先用5% BSA 将beads 在4度block一小时。
C*******e
发帖数: 4348
36
大大降低浓度是说纯化以后的蛋白大大降低浓度然后加在一起?
还是说共表达的这一步,比如不加IPTG,同时表达groESL之类的?
忘了说,蛋白A有一个GSTtag的version
用过magnetic beads
一样的,上清液一加到magnetic beads以后
beads立刻变成一整块,完全没有办法吹洗
就好像被什么东西crosslink了一样
C*******e
发帖数: 4348
37
我可能没说清楚
GST-A蛋白如果用GST resin的话是可以纯化,并且浓缩的
我是说如果GST-A,B共表达,用GST的magnetic beads做in vitro pull-down
上吸铁石,
很快beads变成一整片
没有办法吸吹
我不能说是A或者A+B aggregate了
是bead变成一整片无法分开
当然具体什么原因我不知道

aggregate
g*********5
发帖数: 2533
38
Ab conjungation with beads, which company have a good kit to conjungate
primary antibody to beads? (esp magnetic beads).

,IP和
y*********1
发帖数: 46
39
My guess is that you used too much chromatin and magnetic beads. Using less
chromatin and magnetic beads should reduce the problem of 粘结.
As to whether TE buffer has any effect on 粘结, you could do a qPCR on ChIP
DNA eluted from beads with and without TE wash. Comparison of fold of
enrichment as well as Ct values will tell you if you have loss of protein
during TE wash.
n**r
发帖数: 103
40
Ocean NanoTech has an immediate opening for a full time Research Scientist
or part time Consultant to support our development of nanoparticle-based
tools and reagents.
Job Description:
The candidate will be a member of our development team.
1. Study surface chemistry of the particles for various applications and
provide suggestions to our Chemists for surface functionalization/
modification;
2. Conjugate nanoparticles and different biomolecules;
3. Develop nanoparticle-based assays.
Qualificati... 阅读全帖
f**********r
发帖数: 95
41
来自主题: Biology版 - protein A sepharose问题求助
可以试试先把抗体偶联到protein A sapherose beads上。这样可以把beads表面的
抗体浓度做得大,而且antibody和beads解离的问题就不存在了。我经常这么做,感觉
效果好很多。
g*****s
发帖数: 1016
42
来自主题: Biology版 - Streptavidin求问
各位前辈,
小弟最近用magnetic beads (coated with steptavidin)去pull down biotin ssDNA.
在pulldown以后,我有一步工序是加热beads到80摄氏度。我发现streptavidin会从
bead上脱落下来。我洗过很多遍,都是一样的问题。我想知道有没有什么方法能够阻止
这种脱落,谢了!
s******s
发帖数: 795
43
来自主题: Biology版 - 包子求赐教-也问streptavidin
想研究protein A与B/C/D等的相互作用。
因为没法(或者很难)把蛋白A偶联到sepharose beads上,但是有commercially
available biotinylated protein A可以直接买(sepharose conjugated with
streptavidin当然也有卖),所以计划通过streptavidin+biotin搭桥,间接把protein
A
结合到sepharose beads上(sepharose-streptavidin + biotin-protein A),然后装
填柱子,然后apply protein B/C/D。
从来没做过avidin+biotin相关的实验,请问有朋友做过类似的么?streptavidin+
biotin的结合够强壮么?
假设 protein C可以与protein A结合,最后形成sepharose-streptavidin + biotin-
protein A + protein C。在wash和elute的时候,有特定的或者通用的条件可以
1。wash掉非特异结合的其他protein
2。特... 阅读全帖
L****e
发帖数: 499
44
来自主题: Biology版 - 请教关于蛋白质的酶活性研究
我现在要研究一种蛋白质的酶活性,这个蛋白家族的另外一个同源蛋白有一种水解酶活
性,我现在想要研究我这种蛋白是否也有这种酶活性。开始我是直接用转染了蛋白的细
胞 homogenate 加上底物体外反应后做质谱,检测到水解产物,但是因为cell
homogenate 里有太多的各种蛋白了,所以结果没有直接的说服力。现在我想用his tag
来纯化我这种蛋白。
我的问题是我在裂解转染的细胞的时候肯定是不能加蛋白酶抑制剂的,否则纯化的蛋白
就没有活性了,可是纯化有这么多的步骤,经过很长的时间,我如何保证我的蛋白在纯
化过程中不被细胞中的各种蛋白酶降解呢。另外,我用His60 Ni resin 来纯化蛋白,
这个beads 是在ethanol 里,有没有必要在将bead加到细胞裂解液中之前洗掉bead中的
ethanol? washing buffer 中的imidazol 对蛋白活性有影响吗?
还请有蛋白纯化经验的前辈指教一二。多谢了
d****i
发帖数: 2346
45
来自主题: Biology版 - 我被怀疑造假的经历
http://www.abcam.com/protocols/immunoprecipitation-protocol-1
Protein A or G agarose/Sepharose beads用1000-3000g 2min。楼主用的什么beads?
如果用magnet beads的话想把tube盖子上的load到管底部用多大速度?
M****d
发帖数: 131
46
需要分的是分子量2000左右的有机物,极性不是特别大,大致极性是在silica和C18上
都要拖。准备自己填一根大玻璃柱,看了一下resin,只查到两家:
BIO-RAD的polystyrene beads和Tosoh的toyopearl的hydroxylated methacrylic beads
前者理论上来说是完全hydrophobic的,后者表面有OH,理论上会有吸附?
就我的用途来说是不是应该用polystyrene的比较好?
还有什么推荐的vender吗?BIO-RAD beads的operating range跟我的体系不是特别地
match
谢谢!
n**r
发帖数: 103
47
Ocean NanoTech has an immediate opening for a full time Research Scientist
or part time Consultant to support our development of nanoparticle-based
tools and reagents.
Job Description:
The candidate will be a member of our development team.
1. Study surface chemistry of the particles for various applications and
provide suggestions to our Chemists for surface functionalization/
modification;
2. Conjugate nanoparticles and different biomolecules;
3. Develop nanoparticle-based assays.
Qualificati... 阅读全帖
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Ocean NanoTech has an immediate opening for a full time Research Scientist
or part time Consultant to support our development of nanoparticle-based
tools and reagents for biomedical applications.
Job Description:
The candidate will be a member of our development team.
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Sterilization (microbiology)
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Ocean NanoTech has an immediate opening for a full time Research Scientist
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