C*******e
发帖数: 4348 | 1 学习了
另外用不用UV来粗测蛋白浓度只能说是每个实验室的习惯不同
不过我以后会用这个方法检测核酸污染
另外用紫外光吸收测浓度还是能差不少的
我今天刚遇到个例子
紫外测好了以后用Extinction coefficient算出来的
跟用BCA测出来的相差了一倍
所以我个人习惯还是不喜欢依赖紫外光吸收测浓度 |
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l******a
发帖数: 3339 | 2 detergent compatible BCA assay?不知道对于SDS浓度比较高的情况work不work。 |
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y********g
发帖数: 22 | 3 BCA assay can tolerate SDS<5% |
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s******y
发帖数: 28562 | 4 http://www.piercenet.com/browse.cfm?fldID=02020104
Substances compatible with the Thermo Scientific Coomassie Plus Protein
Assay. The following is a short list of compatible substances and their
concentrations that the BCA Protein Assay can tolerate. For a more complete
list please refer to the instruction booklet for the product or view our
Table of Compatible Substances for a comparison of substance compatibilities
among several different protein assay methods.
Substance Compatible Conc. ... 阅读全帖 |
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m*****u
发帖数: 15526 | 5 借这话题问一下，提核蛋白。提取液含高浓度盐和10%glycerol。用BCA法干扰很大，有
别的办法没有 |
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s*******b
发帖数: 1012 | 7 在自己做单抗中，想请教一下版上的大牛，拿到离心过后的hybridoma的supernatant（
没有purification），要如何测量里面IgG的含量？已经有了rabbit IgG whole
molecule可以用作standard。Bradford？BCA？ or some other methods？ Hybridoma
supernatant里的主要蛋白是不是就是分泌的IgG？多谢多谢 |
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Z******5
发帖数: 435 | 8 应该是质量。 不过感觉bradford不怎么好用，还不如用BCA，买个kit，也不贵，很方
便。 |
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m**********d
发帖数: 137 | 9 做了无数次western，时而还是会遇到这种恶心的问题，好不容易develop出来想看的蛋
白，可一看loading ctrl就傻了。我用BCA protein assay，感觉如果某个样品浓度低
些，按protein assay结果算出来，最后往往还是信号低
请问版上的前辈们，是否也遇到这样的问题，大家都怎么避免的 |
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A******y
发帖数: 2041 | 12 Are they the same loading? If your lysates don't have any protein left, of
course you won't have any actin band. Btw, don't assume every lab do BCA or
Bradford before western...
Actin
GAPDH, |
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C*******e
发帖数: 4348 | 13 请不要纠结蛋白B了可以么
就是我表达的蛋白B的结构也有了
SEC也是单峰
另外还有SAXS数据等等。。。。。。
现在要研究的是A
我们只知道A和B一定有相互作用
native species里in vivo有selfassembly的complex
不过种种原因没有办法从native source提纯研究
A直接做SEC显示是三聚体
不过别的实验数据倾向于应该不够compact的单体
A+B一混就沉淀，上清基本没有蛋白（BCA assay)
没有办法A+B过柱子
B。 |
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a*****i
发帖数: 1045 | 14 用的是human monocytes细胞，同量的蛋白，但是结果发现loading control,还有其
他一些unspecific band的intensity完全不一样，感觉蛋白质不等量。
用的是BCA 测量蛋白的浓度。
同实验室其他的人说是因为本身的细胞有很多死掉的，所以导致即使放入同量的蛋
白，最后WB之后还是发现蛋白量不一样。 |
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s******s
发帖数: 1584 | 15 挺正常的，我都是按BCA 走一遍ACTIN 或者GAPDH 再按loading control 再RUN 一遍 |
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j******9
发帖数: 128 | 16 First you detect you sample using BCA.
Then you need adjust your samples accoring to the concentration and run gel
for hybridizing actin.
Finally you adjust your samples again according the different density of
action.
That is all |
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A******y
发帖数: 2041 | 17 How do you normalize your loading? If you use protein concentrations, you
need to dilute some lysate in 2% SDS and do a BCA assay. It is likely your
loading variant is big. |
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C****c
发帖数: 1964 | 18 用重量需要每一步所有的sample都要很consistent。下次我再试试dilute到SDS在做BCA。
觉。 |
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w*******d
发帖数: 396 | 19 我试过下面的方法。材料是小鼠肝脏。供参考。
加PBS，匀浆（homogenize)，离心，裂掉RBC，加PBS，离心，用PBS洗一次，这时的上
清不再是浑浊的了，用RIPA buffer裂解细胞，离心，收集上清，BCA测蛋白浓度，
normalize. |
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A******y
发帖数: 2041 | 20 You can do a BCA or bradford assay to determine the protein concentration.
You can only estimate the area (I could be wrong on this). For blood it is
easier because you know the volume you harvested. |
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b*********2
发帖数: 35 | 21 1. 大家平时都用BCA来检测蛋白浓度吗？有什么准确的方法？
2。 除了beta-actin， GAPDH，还有什么house-keeping marker吗？
3。 对于ECM 蛋白检测，用什么内参呢？
谢谢了。 |
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r******k
发帖数: 446 | 22 我晕 这么讲究。。。 我有的时候用有phos-stop和 protease inhibitor的pbs洗，有
的时候就是用普通的ice cold pbs洗。 然后加lysis buffer，还超声。。。。。。。
。。 感觉要是有的还是有 要是没有怎么都没有。。。嘻嘻
而且楼主做磷酸化不用BCA定量吗？ 其实我觉得磷酸化没那么容易就去掉，不然大家干
嘛还要有lambada phosphotase去磷酸化做control呢 |
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V******t
发帖数: 444 | 23 用BCA？得稀释多少倍啊
2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
那么多SDS BME 会干扰啊。 |
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f*******d
发帖数: 92 | 24 还没有人提到Bca assay reduced sample compatible. |
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s**********a
发帖数: 92 | 25 谢谢大家的回复。
我们没有BCA library。可以用qiagen的kit从细胞中提取genomic DNA做模版么？
另外primer出了酶切位点之外还有其他要求么？扩出片段之后是直接酶切还是先连载体
如T载体再酶切。
有什么保真酶推荐么？
谢谢！ |
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w*****r
发帖数: 2061 | 27 BCA测测浓度？如果考马斯蓝条带差太多，就是公司浓度不准吧，看到不少paper用考马
斯蓝证明loading接近，不用house keeping |
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w*****r
发帖数: 2061 | 28 BCA测测浓度？如果考马斯蓝条带差太多，就是公司浓度不准吧，看到不少paper用考马
斯蓝证明loading接近，不用house keeping |
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v********a
发帖数: 646 | 29 把不同的蛋白样品定量后，load相同量的蛋白样品做Western Blotting，但是出来结果
，总是出现loading control 的量并不一致，有的多，有的少。非常苦恼。
请问：如何能作出loading control 一致的Western Blotting？
知道这个问题很low，但乡下人就是这么菜。恳请达人指教诀窍：怎样处理组织或者细
胞样品，从而使SDS-PAGE上样量一致？谢谢。
我的方法：
细胞或组织用RIPA裂解
超声3次，15s on/15s off
离心12000rpm，取上清
将上清做2x梯度稀释，然后用bca kit测定浓度
取相同量的蛋白跑page
转膜，wb |
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发帖数: 1 | 30 不同批次处理的样品不建议在同一块胶上比较。
把想要比较的样品重新处理，bca，再上样 wb. |
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l*****D
发帖数: 41 | 31 导师简介：
蒋先兴(Xianxing Jiang)，男，博士，教授，博士生导师。中组部第十一批“千人计划
”青年人才入选者，中山大学“百人计划二期”杰出青年引进人才。迄今为止，在SCI
刊物上已发表论文40余篇，其中作为第一作者及通信作者在Chem. Rev.，J. Am. Chem.
Soc.，Angew. Chem. Int. Ed.等国际知名刊物上发表论文24篇，到目前被SCI 引用
1200余次，最高单篇被引用162次。已申请国家发明专利5项，美国专利1项，已授权2项
。曾施维雅青年药物化学奖（2012 CPA-Servier Young Investigator Awards in
Medicinal Chemistry）；2014年获教育部自然科学一等奖（排名第二）；中科院奖学
金等。
科研方向：
1. 多肽及抗体药物化学生物学研究；
2. 抗体药物偶联体和生物大分子药物的化学修饰和活性研究
3. 蛋白质的特异性修饰和荧光标记及其在细胞显影中的应用
招聘内容: 常年欢迎有下列专业方向或研究背景的博士后，特聘正、副研究员和助理研
究员: 分子生物学，细胞生物学，生物化学，免疫... 阅读全帖 |
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r********o
发帖数: 1423 | 32 BCA的4500雷人名单昨天已经陆续到位了。正式职工20号通知，contractor这周通知。
组里一共八个人，包括我和leader在内，一共5个contractor（一个英国人，两个中国
人，两个印度人）。俺老汉现在在圣地亚哥，昨天下午动身走之前收到电话得知组里两
个印度contrctor（一位阿三大叔，一位阿三大伯）被雷了。
可怜那位阿三大叔，去年11月底刚从底特律过来，今年1月份刚刚把家搬到西雅图，女
儿还在生病住院就丢掉工作了。有时候现实就是如此残酷，sigh。。。 |
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r********o
发帖数: 1423 | 33 TNND波音又要裁人了，BCA上次5000还没搞完呢，现在又来第二波。
今天去了趟everett,连跑带干搞了14个小时，结果回来开波音的website一看就是坏消
息，真是不爽。
好像你们IDS这次没啥事。 |
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l***o
发帖数: 7937 | 34 I am a lead. We support both IDS and BCA B787. Hehe.. I will stay anyway... I joined Boeing only a year ago.
ATF or TF? Boeing is cutting the stuff and the funding.
Chinese I know here are already Tech Fellows. |
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g****t
发帖数: 31659 | 35 您太牛了.找工作的兄弟们,都给luobo发信问问建议吧......
I am a lead. We support both IDS and BCA B787. Hehe.. I will stay anyway...
I joined Boeing only a year ago.
ATF or TF? Boeing is cutting the stuff and the funding.
Chinese I know here are already Tech Fellows. |
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B*********n
发帖数: 35 | 36 我们做个游戏吧，美国人的逻辑很复杂，我们就举个现实的例子来彻底的搞清楚这个录
取过程。
假设有三家医院：A（招两人），B（招三人），C（招四人）
假设有10个面试者：123456789和10。
招生规则：
1，每个人按照自己的排列顺序录取，只有第一选择彻底没戏了，才开始第二选择，依
此类推。
2，每家医院严格的按照自己给面试者的顺序录取，只有前面的被录取到别家医院，后
面的才可以递补，直到招满为止。
首先，10个面试者排自己的医院顺序：
1：ABC 6：BAC
2：BAC 7：ACB
3：CBA 8：BCA
4：ABC 9：CAB
5：BAC 10: CBA
医院的招生数及排的面试者顺序：
A(2)：12，3456789，10
B(3)：123，974568，10
C(4)：1286，10，57943
第一轮录取：A要1,2，只有1是第一志愿，所以1 match A；B要1,2,3，1被要走，递补
后的顺序是239，只有2是第一志愿，所以2 match B; C要1,2,8,6,但是1,2都被要走了
，递补以后的四个人... 阅读全帖 |
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t***5
发帖数: 1057 | 37 10个面试者排自己的医院顺序：
1：ABC
2：BAC
3：CBA
4：ABC
5：BAC
6：BAC
7：ACB
8：BCA
9：CAB
10: CBA
医院的招生数及排的面试者顺序：
A(2)：12，3456789，10
B(3)：123，974568，10
C(4)：1286，10，57943
如果没算错的话计算机算法大概是如下情况。
假如计算机按照申请者1-10的顺序（结果与该顺序无关）检查每个人的第一，第二。。
。第N志愿：
1: A
2: B
3: C
4: A
5: B
6: B
7: C(第一志愿A被医院排在1，4之后，只能占第二志愿)
8: C(第一志愿B被医院排在2，5，6之后，只能占第二志愿)
9: C
10:C(第一志愿C被医院排在7,9，3之前，替代3所占位置)
第一轮的结果，只有3没有占到任何位置：
1: A
2: B
3:
4: A
5: B
6: B
7: C(第二志愿)
8: C(第二志愿)
9: C
10:C
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第二轮检查3的志愿（第一志愿C排在7，8，9，10之后，只能从第二志... 阅读全帖 |
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k****r
发帖数: 593 | 38 本人估计还有一年毕业，化工专业，主要是抗体蛋白质提纯方向。
•Specialized in protein purification process including chromatography
(AC, IEC, SEC, HIC), filtration (TFF, UF, DF, NF), precipitation, etc.
•Specialized in protein quantification including ELISA, SDS-PAGE,
Western blot, densitometry analysis, BCA, Bradford, enzymatic activity
analysis, UV-Vis.
•Specialized in aseptic techniques, media constituents and media
formulation strategies, microbial and animal cell culture.
•Hands-on experience on pr... 阅读全帖 |
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l*******l
发帖数: 248 | 39 怎么打印出一个string所有的排列组合？
for example
abc
acb
bac
bca
cab
cba |
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k***r
发帖数: 100 | 40 how accurate you want?
if it is not too accurate, you can try BCA kit. It is very fast and can
test many many samples at a time. Took about 1 hr, for about 100 samples.
if you want i can check the vendor for you.【 在 jdai ( 点 点) 的大作中提到: 】 |
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j**i
发帖数: 89 | 41
其实也不是要很准确,
主要是各个样品之间要有可比性,
BCA kit贵吗? |
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t***a
发帖数: 4 | 43 tr(ABC)=A_ij B_jk C_ki
=B_jk C_ki A_ij
=tr(BCA)
so tr(AA~PP~)
=tr(P~AA~P)
=tr(P~APP~A~P) |
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r****r
发帖数: 18 | 44 The following is nothing special, longing for a talented method!
Let b=[1 2 3 4 5 6 7 8 9]
suppose A=(14)(23),B=(25)(34),C=(58)(67),D=(69)(78),
then easy to check AC=CA; AD=DA; BD=DB.
thus,
G={I 1
A,B,C,D; 4
AB,BA,AC=AC,AD=DA,BC,CB,BD=DB,CD,DC; 9
ABC,ACB=CAB,BAC=BCA,CBA; ABD=ADB=DAB,BAD=BDA=DBA; ACD=CAD=CDA,ADC=DAC=DCA;
BCD,BDC=DBC,CBD=CDB,DCB; 12
ABCD, ABDC=ADBC=DABC, ACBD=CABD=ACDB=CADB=CDAB, ADCB=DACB=DCAB,
BCAD=BCDA=BACD, BDAC=BDCA=DBAC=DBCA=BADC, CBAD=CBDA=CDBA, DCBA. 8}
G: totoally |
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w***t
发帖数: 96 | 45 may be losted. anyway, too easy. Suppose there is such a solution.
For any point A, constuct unit equilateral triangle ABC and thereby BCA'.
A and A'are of the same color. Thus the circile with center A and radius
AA' is of a single color. All the chord of unit length on the circle is
of one color. Contradiction. So, htat is not possible. |
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e****t
发帖数: 766 | 46 why abc, but not "bca" ? "cab" ?.... |
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d******9
发帖数: 404 | 47 Easy!
Just use infile:
Infile Fileref dlm=", /"
then SAS will treat both of them as delimiters.
Usually, if u use dlm="abc" then SAS regard each letter or any combination
of the 3 letters, a aa bb cc acb bca etc...as a delimiter. However, if you
use dlmstr="abc", then SAS only uses the STRING---abc-- as a delimiter. |
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x**g
发帖数: 807 | 48 遇到一个存储空间的问题，诚心请教版上大牛们。问题是这样的，
我在64位的台式机上做一个Bootstraping，用Type=bca算置信区间。机器也是64位的，
Windows操作系统，4GB RAM。机器上装的R也是64位的，并且修改了设置。
memory.size(1000000000000)
谁知算到一半，得到一个warning message如下：
Error: cannot allocate memory block of size 2.3 Gb
请问，我该怎样做才可以把这个Error消除掉，继续运算得到结果呢？ |
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i******s
发帖数: 566 | 49 我企图将佛教哲学的核心----四见地，以日常的语言提供社会各行各业的人了解。如此
一来，我需要在词汇的选择上做艰难的决定。我想很重要的是要了解，至今对梵文及藏
文的佛法词汇，尚无真正终究共识的英文译法。在佛教不同的派别中，如上座部、禅宗
、密宗等，或甚至在藏传佛教各派中，都有不同的意义和拼音。一个好的例子是Zag
Bcas(音 Zagchey，攘卸)，在本书中我们译成“情绪”，如同在“一切情绪皆苦”之中
。这个词汇的选择令一些人认为太广泛而不以为然，他们认为并非所有一切情绪都是痛
苦。然
而，对另外一些人则认为这不够广泛而不以为然，因为Zagchey比较精确的翻译包含得
很广。
秋吉宁玛仁波切（Chokyi Nyima Rinpoche）在他所著作的书《无可摧毁的真理》（
Indistructable Truth）中所说，Zagchey一字直接的意义是“与掉落或移转有关”。
他又说：
有一次我请问了天津嘉珍库努仁波切（Kunu Rinpoche, Tendzin Gyaltsen）有关这个
以及其它佛教词汇的意义。他首先解释了“人”或Gangzag，这其中包含染污这个字里
的一个音节。 |
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m*********y
发帖数: 10616 | 50 这种大盘股可能有多个庄家，有可能相互厮杀，况且可以short，用庄家的观点比较难
以分析，我最近也没有研究他的基本面，只能就图论图，我也不会画那些乱七八糟的图
图，各位看官只能将就看了。
这支股票近一年作了一个大大地矩形，低位在14.2，高位在18.5， 今年4月14日突破矩
形，但是成交量没有明显放大，很快证明是假突破，既然是假突破，那就一发而不可收
拾，很快大跌，我想在假突破当日一定套了不少人。
现在的形势：会不会回撤14.2，如果到了，会不会突破，会不会是假突破，这些都有疑
问，我觉得如果实在想买，不如等大盘和BCA都稳定了再进不迟，这种矩形的股票方向
不确定，不是我喜欢的类型，好了。 |
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