g*****n
发帖数: 241 | 1 我的目标蛋白在C-term加了两个tag，其中的myc-tag放在倒数第二个，最后一个tag有
45个氨基酸，有的人说myc-tag必须在两端才能被识别，请问我这种情况做WB的话能被
抗体识别吗（比如9E10）?
谢谢！ |
m******o
发帖数: 8504 | 2 “有的人说myc-tag必须在两端才能被识别”
这个有实验根据？
楼主可以亲自试一下，然后来给大家汇报以下 |
m******u
发帖数: 12400 | |
m******u
发帖数: 12400 | 4 只要能暴露在表面，为什么不能被抗体识别？融合蛋白放在头上（两端），蛋白本身能
折叠成自身结构，那么tag就很可能会被暴露在外表。但这也不是一定的，tag影响蛋白
折叠，融合蛋白不能自然折叠，没有活性，tag不能被抗体识别也有报道。
最后，tag放在目的蛋白内部的例子也有，而且还能保留蛋白自身活性。这种成功例子
不能保证你的蛋白能够成功。
我这里回答，是觉得你这个问题问得不对。 |
N***e
发帖数: 61 | 5 myc-tag放在中间可以被识别。
前提是你对你的蛋白质上的domain和功能有很好的了解。不要插在其中，myc-tag尽量
能够暴露在外。
放在两端也可能会破坏蛋白质功能，比如N端信号肽。又比如KASH protein，myc放在C
端一定不行。
最简单的是BLAST一下，看看那个地方不保守就放哪里。 |
g*****n
发帖数: 241 | |
j*****n
发帖数: 217 | 7 他是western，不存在表面不表面的问题，早都变性、暴露了
【在 m******u 的大作中提到】
: 只要能暴露在表面，为什么不能被抗体识别？融合蛋白放在头上（两端），蛋白本身能
: 折叠成自身结构，那么tag就很可能会被暴露在外表。但这也不是一定的，tag影响蛋白
: 折叠，融合蛋白不能自然折叠，没有活性，tag不能被抗体识别也有报道。
: 最后，tag放在目的蛋白内部的例子也有，而且还能保留蛋白自身活性。这种成功例子
: 不能保证你的蛋白能够成功。
: 我这里回答，是觉得你这个问题问得不对。
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