h**********r
发帖数: 671 | 1 需要在微生物中表达一个来自Mus musculus的基因，没钱合成。有什么办法又快又好的
拿到呢？提供可以买的网站也成。附近不认识做mouse genetics的。
包子酬谢。 |
i**********a
发帖数: 1402 | 2 查有谁用过这个基因的，发邮件要
【在 h**********r 的大作中提到】
: 需要在微生物中表达一个来自Mus musculus的基因，没钱合成。有什么办法又快又好的
: 拿到呢？提供可以买的网站也成。附近不认识做mouse genetics的。
: 包子酬谢。
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h**********r
发帖数: 671 | 3 多年前的paper.谁帮我PCR一下吧，有paper挂个群众作者。 |
O**********a
发帖数: 317 | |
j*****n
发帖数: 217 | |
s******s
发帖数: 13035 | 6 多数老鼠的cDNA应该能买到。记得以前有个某大学某center啥的，可以买
gateway的基因， 好像也就一百多一个，回来gateway一下，两个礼拜病毒就好了
【在 h**********r 的大作中提到】
: 需要在微生物中表达一个来自Mus musculus的基因，没钱合成。有什么办法又快又好的
: 拿到呢？提供可以买的网站也成。附近不认识做mouse genetics的。
: 包子酬谢。
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H****N
发帖数: 997 | |
s******y
发帖数: 28562 | 8 最简单的办法就是直接抽取culture mouse cell line的mRNA，然后跑一个逆转录反应
。但是相关试剂大概需要200美元的样子。
【在 h**********r 的大作中提到】
: 需要在微生物中表达一个来自Mus musculus的基因，没钱合成。有什么办法又快又好的
: 拿到呢？提供可以买的网站也成。附近不认识做mouse genetics的。
: 包子酬谢。
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h**********r
发帖数: 671 | 9 多谢大家！准备gblcok了，顺便把codon也优化下。有个问题，大家都在谁家合成的？
以前在IDT,刚刚看到GeneArt价格也不错。在IDT合成的时候，时不时的会有突变，而且
也不给测序报告，需要AT克隆然后自己测。当然genscript的不错，但是价格也高啊。 |
h**********r
发帖数: 671 | 10 Thermo的网站上说的：
the average error rate of gBlocks Gene Fragments was determined to
be 1 error per 1,329 bp；
the mean sequence error rate of GeneArt Strings DNA Fragments was 5x lower
than gBlocks Gene Fragments, with 1 error per 6,757 bp. |
j*****n
发帖数: 217 | 11 多挑几个克隆去测序
【在 h**********r 的大作中提到】
: 多谢大家！准备gblcok了，顺便把codon也优化下。有个问题，大家都在谁家合成的？
: 以前在IDT,刚刚看到GeneArt价格也不错。在IDT合成的时候，时不时的会有突变，而且
: 也不给测序报告，需要AT克隆然后自己测。当然genscript的不错，但是价格也高啊。
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C*******4
发帖数: 400 | 12 GBlock 2KB以下很少出错，除非GC rich或特殊原因，但是你可以自己改三码平衡GC和
AT的比例，否则公司不给你合成。好处是快，还可以随意加两头的酶切位点。推荐IDT
，他们网上有个预测/筛选的程序告诉你GC和其它参数是否不利于合成。2KB也不超过
200刀（折扣不同）。我组里已经用过上百个，同时送两个克隆测序基本都能拿到正确
的克隆。收到样一周左右，做多10天左右，完成克隆最多两周。最后要提醒你一下，老
鼠的基因在肠菌里表达最好做一下CODON优化，否则可能造成蛋白表达不高。网上好多
程序可以用，自己搜索一下。 |
h**********r
发帖数: 671 | 13 多谢分享经验！2kb很难拿到200刀的deal吧。可能是你们合成的多的原因。 |
