l*****e
发帖数: 3500 | 1 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
，按理说这个应该很好染。 |
n***w
发帖数: 2405 | |
w*********1
发帖数: 27 | |
v***a
发帖数: 1242 | 4 用这个染actin千万不能用methanol一类的，推荐PFA
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
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q******g
发帖数: 3858 | 5 methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了 |
l*****e
发帖数: 3500 | 6 一起共染的抗体没问题，试了几次，共染的和单独染的都没看到actin，哎哎。其它部
分都没问题。
至于PFA和methanol好像各个protocol都有推荐。。。。。。。。
【在 n***w 的大作中提到】
: 你还染其他的了吗？
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c*********r
发帖数: 1312 | 7 Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
用methonal fix。 |
s**2
发帖数: 1287 | 8 YES!
Nor can use ethanol to dehydrate.
【在 c*********r 的大作中提到】
: Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
: 用methonal fix。
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l*****e
发帖数: 3500 | 9 好吧，因为问过别人，他们用的是methanol。
我下次试试PFA
【在 s**2 的大作中提到】
: YES!
: Nor can use ethanol to dehydrate.
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c*****u
发帖数: 357 | 10 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题， |
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l*****e
发帖数: 3500 | 11 我重新订了一管，应该是试了两管。。。。。。。。。。。
【在 c*****u 的大作中提到】
: 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
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n***w
发帖数: 2405 | 12 我也觉得20分钟methanol有点长。我一般都是1-5分钟。
【在 q******g 的大作中提到】
: methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
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b**********8
发帖数: 349 | 13 而且染Phalloidin之前不能用triton打孔，否则非特异染色会很重， |
l*****e
发帖数: 3500 | 14 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
，按理说这个应该很好染。 |
n***w
发帖数: 2405 | |
w*********1
发帖数: 27 | |
v***a
发帖数: 1242 | 17 用这个染actin千万不能用methanol一类的，推荐PFA
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
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q******g
发帖数: 3858 | 18 methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了 |
l*****e
发帖数: 3500 | 19 一起共染的抗体没问题，试了几次，共染的和单独染的都没看到actin，哎哎。其它部
分都没问题。
至于PFA和methanol好像各个protocol都有推荐。。。。。。。。
【在 n***w 的大作中提到】
: 你还染其他的了吗？
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c*********r
发帖数: 1312 | 20 Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
用methonal fix。 |
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s**2
发帖数: 1287 | 21 YES!
Nor can use ethanol to dehydrate.
【在 c*********r 的大作中提到】
: Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
: 用methonal fix。
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l*****e
发帖数: 3500 | 22 好吧，因为问过别人，他们用的是methanol。
我下次试试PFA
【在 s**2 的大作中提到】
: YES!
: Nor can use ethanol to dehydrate.
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c*****u
发帖数: 357 | 23 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题， |
l*****e
发帖数: 3500 | 24 我重新订了一管，应该是试了两管。。。。。。。。。。。
【在 c*****u 的大作中提到】
: 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题，
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n***w
发帖数: 2405 | 25 我也觉得20分钟methanol有点长。我一般都是1-5分钟。
【在 q******g 的大作中提到】
: methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了
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b**********8
发帖数: 349 | 26 而且染Phalloidin之前不能用triton打孔，否则非特异染色会很重， |
l*****e
发帖数: 3500 | 27 问题出在了用blocking buffer稀释phalloidin。
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
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w*******s
发帖数: 10 | 28 4% PFA +0.25%triton 37degree 12min, 然后pbs洗3次，如果有background，用NaBh4
quench 个7-10分钟 室温，然后pbs在洗3次。加上phalloidin overnight，搞定。 |
s*****i
发帖数: 315 | 29 RE
NaBh4
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.6
【在 w*******s 的大作中提到】
: 4% PFA +0.25%triton 37degree 12min, 然后pbs洗3次，如果有background，用NaBh4
: quench 个7-10分钟 室温，然后pbs在洗3次。加上phalloidin overnight，搞定。
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f**l
发帖数: 22 | 30 一定不能用 methanol
PFA 5min RT is long enough although longer fixation does not hurt
triton
【在 l*****e 的大作中提到】
: 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
: 的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
: ，按理说这个应该很好染。
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