背景：我们前期发现gene A在肿瘤发生发展过程中会异常定位到细胞核中，但是具体入
核机制现在还没搞清楚。目前重点还在研究gene A入核后的功能及该功能的机制。
现在想做一个乳腺组织特异的gene A诱导入核的小鼠模型。初步设想是用ER融合gene A
， 通过4-OHT诱导入核，然后观察表型。
我们用的是ER的288-599AAs的，其中G525R做了突变，具体参考文献是 A modified
oestrogen receptor ligand-binding domain as an improved switch for the
regulation of heterologous proteins （http://nar.oxfordjournals.org/content/23/10/1686.short)。
问题是：1.我们是否要单独做一个不包含gene A，该ER片段的对照小鼠？ 虽然该文献
报到ER288-599(G525)是no TAF-2 transactivation activity， 但是毕竟ER是一个和
乳腺癌密切相关的分子，而且我们用了将近整个ER的一半的片段，这个ER片段诱导入核
后是否与乳腺癌表型相关，似乎也不太清楚。但是做这个对照，成本确实太高了。
2. 为了保证在非诱导情况下该基因不入核，我们还需要再改片段上加出核序列（
NES），
加几个NES比较好？ 少了怕控制出核效果不好；多了又怕影响诱导入核的效果。
T****u 发帖数: 424
2
太复杂了，不太好控制。
首先你提到的改造如NES什么的，都要cell line先test。到小鼠上就更复杂了。
我的建议就是用TO/A inducible 小鼠，A做成constitutive入核的。
cross with rtTA or tissue specific rtTA.
or 直接KI consitutitive 入核的A mutant，看小鼠表型。
A
【在 Z******5 的大作中提到】 : 背景：我们前期发现gene A在肿瘤发生发展过程中会异常定位到细胞核中，但是具体入 : 核机制现在还没搞清楚。目前重点还在研究gene A入核后的功能及该功能的机制。 : 现在想做一个乳腺组织特异的gene A诱导入核的小鼠模型。初步设想是用ER融合gene A : ， 通过4-OHT诱导入核，然后观察表型。 : 我们用的是ER的288-599AAs的，其中G525R做了突变，具体参考文献是 A modified : oestrogen receptor ligand-binding domain as an improved switch for the : regulation of heterologous proteins （http://nar.oxfordjournals.org/content/23/10/1686.short)。 : 问题是：1.我们是否要单独做一个不包含gene A，该ER片段的对照小鼠？ 虽然该文献 : 报到ER288-599(G525)是no TAF-2 transactivation activity， 但是毕竟ER是一个和 : 乳腺癌密切相关的分子，而且我们用了将近整个ER的一半的片段，这个ER片段诱导入核
