Z******5
发帖数: 435 | 1 想做一个老鼠模型，该模型既可以实现knockout，也可以实现overexpression。
大致方案是这样：
5‘arm-loxp- 2 Exon - 3 Exon -loxp-4、5、6Exon mini gene-PA-TRE- targetted
gene cDNA-PA-3’arm
KO由loxP控制，OE由TRE控制。
老鼠做出来后，和组织特异性Cre小鼠杂交，可以实现组织特异性敲除；和组织特异性
rtTA小鼠杂交，可以实现组织特异性过表达。
现在担心的问题是TRE启动子如果不严格，做KO的时候，就没办法敲除干净。
=====================
而且还没有看到过有文献做这样的模型。 |
z****u
发帖数: 1007 | 2 tet on system是有leakage的。 相比下tet off要好得多。
不过现在有些公司有新一代的tet on system.去clonetech看看他们的系统。据公司报
告说比常规tet on system要更stringent.
而且leakage 的问题我个人感觉可以很复杂，依表达组织不同或不同发育期都会有不
同。 |
s******s
发帖数: 13035 | 3 当然有leaky. 所以会有各种升级版本的
【在 Z******5 的大作中提到】
: 想做一个老鼠模型，该模型既可以实现knockout，也可以实现overexpression。
: 大致方案是这样：
: 5‘arm-loxp- 2 Exon - 3 Exon -loxp-4、5、6Exon mini gene-PA-TRE- targetted
: gene cDNA-PA-3’arm
: KO由loxP控制，OE由TRE控制。
: 老鼠做出来后，和组织特异性Cre小鼠杂交，可以实现组织特异性敲除；和组织特异性
: rtTA小鼠杂交，可以实现组织特异性过表达。
: 现在担心的问题是TRE启动子如果不严格，做KO的时候，就没办法敲除干净。
: =====================
: 而且还没有看到过有文献做这样的模型。
|
s*****i
发帖数: 315 | 4 tet off要天天喂DOX，是不是太贵了？而且我听说tet-off leakage也不小，不知道有
没有文章介绍两个系统的比较
Clontech的 3G系统更加灵敏，他们的TRE sequence 和 Tet protein都有变化，3G的
Tet protein 可以识别原来的TRE sequence，但是反过来我没有试过。
感觉好像是3G的Tet protein对 DOX更敏感，3G的TRE会降低leakage
【在 z****u 的大作中提到】
: tet on system是有leakage的。 相比下tet off要好得多。
: 不过现在有些公司有新一代的tet on system.去clonetech看看他们的系统。据公司报
: 告说比常规tet on system要更stringent.
: 而且leakage 的问题我个人感觉可以很复杂，依表达组织不同或不同发育期都会有不
: 同。
|
