p*******n
发帖数: 93 | 1 最近开始做tumor-infiltrating Treg，可是实验室不是这个背景。看了一堆文献发现
这个领域没有解决的问题和争议挺多。有几个问题希望能够得到澄清(物种是小鼠)：
1. flow检测Treg，用CD4+ CD25+ CD127 low是不是就够了？不想用Foxp3因为将来会做
FACS
2. 区别nTreg和iTreg的最好方法是什么？neuropilin表达？如果用CD4+ CD25+ CD127
low Helios+行不行？
3. Treg体外扩增的话，是不是可以肯定这些细胞的phenotype会改变？
4. 有没有什么好的抗体或者kit推荐？用于分离或者扩增的。
多谢！！！ |
z*********8
发帖数: 1203 | 2 1.cd25是il-2 receptor,cd25 hi只能说明T cell activated 状态，不能用cd25来充当
foxp3 treg的surrogate marker。 treg也有foxp3＋和foxp3-
2. 我不是太懂treg，但是我感觉你用helios和用neuropilin的区别是前者你FACS时候
得用intracellular staining，后者是surface marker直接可以FACS。helios 和
neuropilin尤其是后者是前不久才发现的，能不能可靠得作为2者得区别还要经过时间
考验。
3. Treg本身要想阔增得话，我想il-2肯定需要，别的不知道，需要TGF-beta etc么？
不懂，不好意思啊！t cell subset有很多plasticity，各种subset identity未必那么
清楚的
4. 没有真正做过treg的试验，不知道。
以上都是上课时候学过的，不保证100％涵盖所有正确答案 |
t**l
发帖数: 109 | 3 1. 如果用foxp3，纯度和准确度会大大提高，一般做Treg的LAB都有foxp3 reporter
mouse.
3. phenotype可能会改变，看你的culture condition了，因为Treg 也可以表达T-bet
RORgT.phenotype肯定会变的。 |
t**l
发帖数: 109 | 4 如果你真的想做Treg这个圈子，foxp3 reporter mouse必须有，许多做cancer的人也开
始做免疫，而且发了一些paper说tumor cell express foxp3 too. 如果你不能在foxp3
reporter mouse的环境下做你的tumor model,你是不是用bead或者FACS surface
staining分离出来你tumor sample里面的Treg, 然后再做Foxp3 Intracellular stain
测纯度。
关键是不清楚你下部要做什么。 |
