m*******r
发帖数: 202 | 1 老板让作一个用新的单克隆抗体治疗带肿瘤裸鼠的报告。以前没有做过这方面的工作，
这段时间读了很多文献，学习了很多东西，发现做这方面还是很有意思的，比我以前做
的基础的东西有意义多了。
现在热情很大，但不明白的问题也很多。向大家请教一个问题：在这种用新单克隆抗体
治疗带瘤裸鼠中最常见的问题是什么？
小妹先谢过了。 |
c*z
发帖数: 157 | 2 你是分子生物学的课题组还是药理药剂的？
如果前者的话，在细胞层面做好了，delivery搞不定就僵在那里了
不过可能后续工作老板都会找collaborator给你们做 |
m*******r
发帖数: 202 | 3 非常感谢你的回复！！！我是学分子生物学的。
我就是打算将在BALB/c小鼠制备的单克隆抗体再腹腔注射到带肿瘤的BALB/c裸鼠中，观
察该抗体是否有抑制肿瘤生长的作用。老板让我写一下在这种实验过程中可能会遇到的
问题，以及可能的其他选择方案。有些象他写grant中的potential pitfalls and
alternatives。
对我一个在这个领域的新手来说，实在不知道在这种实验过程中可能会遇到什么问题以
及可能的选择方案。请多多指教。再次感谢。
【在 c*z 的大作中提到】
: 你是分子生物学的课题组还是药理药剂的？
: 如果前者的话，在细胞层面做好了，delivery搞不定就僵在那里了
: 不过可能后续工作老板都会找collaborator给你们做
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s****9
发帖数: 932 | 4 你至少应该简单介绍一下你的抗原，cytokine，receptor？这个receptor是activation
receptor？如果是，那么receptor有没有redundency？你的antibody是agonist还是
antagonist？
没有这些info，怎么能够预测pitfall？
【在 m*******r 的大作中提到】
: 非常感谢你的回复！！！我是学分子生物学的。
: 我就是打算将在BALB/c小鼠制备的单克隆抗体再腹腔注射到带肿瘤的BALB/c裸鼠中，观
: 察该抗体是否有抑制肿瘤生长的作用。老板让我写一下在这种实验过程中可能会遇到的
: 问题，以及可能的其他选择方案。有些象他写grant中的potential pitfalls and
: alternatives。
: 对我一个在这个领域的新手来说，实在不知道在这种实验过程中可能会遇到什么问题以
: 及可能的选择方案。请多多指教。再次感谢。
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m*******r
发帖数: 202 | 5 好的。谢谢您的提醒。
我用的抗原是一个新克隆鉴定的肿瘤高表达蛋白，功能实验证明它的表达可以显著地促
进肿瘤的生长。免疫组化和荧光标记实验显示它定位在细胞膜上，并且有胞外区。是不
是受体我们还没有实验证明。是否redundency我们也不清楚。我们希望制备的单克隆抗
体是抑制阻断这个肿瘤高表达蛋白的功能的，以此达到抑制肿瘤生长的目的。
谢谢!!!
activation
【在 s****9 的大作中提到】
: 你至少应该简单介绍一下你的抗原，cytokine，receptor？这个receptor是activation
: receptor？如果是，那么receptor有没有redundency？你的antibody是agonist还是
: antagonist？
: 没有这些info，怎么能够预测pitfall？
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s****9
发帖数: 932 | 6 谢谢你的包子，看在包子的面子上，多说几句。
如果让提问题，可以提很多，
首先，做单抗的抗原是不是N Terminal，或者细胞外的部分。如果不是，抗体识别的
epitope很可能不是细胞外的部分。如果我做这个实验，首先就是把单抗结合上颜色（
eg. Alex488），用FACS染一下，看看能不能特异结合细胞外的抗原。
如果这个抗体识别的是细胞内的抗原。经典的免疫学认为，抗体不能够neutralize细胞
内的东西（当然，前年有篇PNAS说可以）。
如果可以识别胞外抗原，而且抗原是肿瘤特异的，那么很有意思。首先，应该看一下，
这个抗体对于抗原的结合能不能影响蛋白的功能。比如，overexpress 这个抗原之后，
加抗体，in vitro culture对肿瘤细胞的生长有没有影响。如果有，可以猜想它是一个
受体，抗体甚至有可能是个agonist。这样的话，这个project会变的很有意思。如果是
negative result，说明也推翻不了太多问题。
接下来，你当然可以直接打tumor（最好是overexpression的tumor把window放大）到
BALB/c上，然后打抗体看有没有效果。如果有，你接着需要打BALB/c Scid mice看是不
是immune cell介导的Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity。或者直接的
影响蛋白在肿瘤上的功能，进而影响tumor growth。
如果没有effect，也不用紧张，你可以连上颜色后，看看抗体能不能被内吞，如果可以
，你可以把抗体接合上toxin，做in vivo treatment。也可以修饰一下Fc，看看能不能
enhance ADCC进而使得抗体有效果。
总结一下，首先应该看看能不能结合胞外蛋白，如果不行，意义不大。如果可以结合细
胞外的蛋白，蛋白是肿瘤（或者某些肿瘤）特异的，且是一个新抗体，我觉得很有意思
，有很多可以做的东西。发了文章之后，去公司也会比较容易。
【在 m*******r 的大作中提到】
: 好的。谢谢您的提醒。
: 我用的抗原是一个新克隆鉴定的肿瘤高表达蛋白，功能实验证明它的表达可以显著地促
: 进肿瘤的生长。免疫组化和荧光标记实验显示它定位在细胞膜上，并且有胞外区。是不
: 是受体我们还没有实验证明。是否redundency我们也不清楚。我们希望制备的单克隆抗
: 体是抑制阻断这个肿瘤高表达蛋白的功能的，以此达到抑制肿瘤生长的目的。
: 谢谢!!!
:
: activation
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l**********1
发帖数: 5204 | 7 Move On LZ
this kind of topic never get NDA or FDA approved
it is just waste time and Fundings.
from that 一个新的单克隆抗体治疗带肿瘤裸鼠的问题
if you did not used multi novel 单/poly 克隆抗体治疗带one type 肿瘤裸鼠
pls refer:
发信人: luminb (Gooder), 信区: Biology
标 题: Re: 大家说说Cancer cell metabolism吧，这个越来越火啊！
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jan 6 22:48:08 2013, 美东)
我已经发现有个规律了。大牛发些东西，打脸的常常是药厂。为啥，大牛做的药厂纷纷
跟风啊，然后一看，NND不是这么回事。很多情况下，大家也就算了，有的就会跳出头
，发个打脸的文章。呵呵。
http://www.mitbbs.com/article_t1/Biology/31748337_0_3.html
or
and
M2 isoform of pyruvate kinase is dispensable for tumor maintenance and
growth.
HTTP: //www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23267074
【在 m*******r 的大作中提到】
: 好的。谢谢您的提醒。
: 我用的抗原是一个新克隆鉴定的肿瘤高表达蛋白，功能实验证明它的表达可以显著地促
: 进肿瘤的生长。免疫组化和荧光标记实验显示它定位在细胞膜上，并且有胞外区。是不
: 是受体我们还没有实验证明。是否redundency我们也不清楚。我们希望制备的单克隆抗
: 体是抑制阻断这个肿瘤高表达蛋白的功能的，以此达到抑制肿瘤生长的目的。
: 谢谢!!!
:
: activation
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m*******r
发帖数: 202 | 8 受教了！非常感谢！
【在 s****9 的大作中提到】
: 谢谢你的包子，看在包子的面子上，多说几句。
: 如果让提问题，可以提很多，
: 首先，做单抗的抗原是不是N Terminal，或者细胞外的部分。如果不是，抗体识别的
: epitope很可能不是细胞外的部分。如果我做这个实验，首先就是把单抗结合上颜色（
: eg. Alex488），用FACS染一下，看看能不能特异结合细胞外的抗原。
: 如果这个抗体识别的是细胞内的抗原。经典的免疫学认为，抗体不能够neutralize细胞
: 内的东西（当然，前年有篇PNAS说可以）。
: 如果可以识别胞外抗原，而且抗原是肿瘤特异的，那么很有意思。首先，应该看一下，
: 这个抗体对于抗原的结合能不能影响蛋白的功能。比如，overexpress 这个抗原之后，
: 加抗体，in vitro culture对肿瘤细胞的生长有没有影响。如果有，可以猜想它是一个
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m*******r
发帖数: 202 | 9 谢谢您！对您跟踪最新科研前沿的能力甚为佩服！
【在 l**********1 的大作中提到】
: Move On LZ
: this kind of topic never get NDA or FDA approved
: it is just waste time and Fundings.
: from that 一个新的单克隆抗体治疗带肿瘤裸鼠的问题
: if you did not used multi novel 单/poly 克隆抗体治疗带one type 肿瘤裸鼠
: pls refer:
: 发信人: luminb (Gooder), 信区: Biology
: 标 题: Re: 大家说说Cancer cell metabolism吧，这个越来越火啊！
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jan 6 22:48:08 2013, 美东)
: 我已经发现有个规律了。大牛发些东西，打脸的常常是药厂。为啥，大牛做的药厂纷纷
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c*z
发帖数: 157 | 10 lz也不要太绝望，你的课题和 HER2受体的herceptine 是一个路子
你的mAb已经拿到了么？如果还没有的话，你都不知道这个mAb是否binding在
functional region....
拿therapeutic antibody不像养做western的抗体这么简单，只要specific binding就
可以，你这个不是夹住蛋白身上任何部分就可以交差的。。。任重而道远啊
你加了这个蛋白细胞长的开心，不等于block了它就可以抑制细胞生长，其他通路或许
可以取代它，直接跳过这个蛋白让细胞生长
你的蛋白是受体还是配体倒是问题不大，block哪个都行
还有谢谢lz包子
【在 m*******r 的大作中提到】
: 谢谢您！对您跟踪最新科研前沿的能力甚为佩服！
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l**********1
发帖数: 5204 | 11 不谢 都考古未名买买提 Bio 版的最近旧贴 得到的启发 没那些帖 俺就是一个Cre
mice 科盲
比如
楼主可以 结合楼下的跟贴
和以下的贴主 交流下 ERT2-Cre Mice genotyping Tips...
发信人: supersunday (Linda), 信区: Biology
标 题: ERT2怎么genotyping?
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jan 15 18:54:44 2013, 美东)
我们最近引进了两种Cre小鼠，一种是持续表达的，一种是诱导的(ERT2-Cre)。请问
ERT2怎么genotyping?怎么设计primer？我找了plasmid,是pCAG-ERT2CreERT2，没有找
到ERT2 site。
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31772553.html
【在 m*******r 的大作中提到】
: 谢谢您！对您跟踪最新科研前沿的能力甚为佩服！
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l**********1
发帖数: 5204 | 12 Conti:
plus
多去参CSHLab 的有关年会 至少要了解年度的忽悠的新窍门 (+ +) or at least (+
-) 以防止旧 tips 已经失效喽 (- -)
pls refer,
Cancer Biology & Therapeutics
April 23 - 27, 2013
Abstract Deadline: February 8, 2013
Organizers:
ignored
HTTP: //meetings.cshl.edu/meetings/2013/tumbio13.shtml
【在 m*******r 的大作中提到】
: 谢谢您！对您跟踪最新科研前沿的能力甚为佩服！
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