逆转录病毒过表达目的蛋白强度问题求教 - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 逆转录病毒过表达目的蛋白强度问题求教

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话题: gfp话题: 逆转录话题: cd4话题: 强度话题: 病毒

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d***s 发帖数: 1062	1 小弟正用逆转录病毒在小鼠CD4 T细胞中过表达目的蛋白。病毒质粒是MCSV骨架，目的基因和GFP之间有IRES连着。对照组CD4 T细胞GFP阳性率有70%。实验组CD4 T细胞GFP 阳性率只有40%，而且GFP的强度也比对照组要弱很多。看了几篇文章转的是同样的基因，同样也是逆转录病毒但是不同质粒，他们的结果就非常好，实验组GFP的强度和对照组的差不多。抱歉描述的有点乱了。我的问题是有什么办法能增加我的实验组T细胞GFP的强度，也就是增加目的蛋白的表达量吗？先谢谢大家了。
l***g 发帖数: 19	2 没用过这个载体的病毒质粒，不是很清楚。为啥目的基因和GFP之间要有IRES连着，GFP 不能和目的基因直接融合吗？一般IRES和筛选基因连着比较有用吧。如果你的GFP阳性率偏低并且表达量不高的话，可以试着病毒感染后再挑选单克隆细胞，挑那种表达量高的。
d***s 发帖数: 1062	3 GFP 非常感谢你的建议。关于ires，很多文章上都是这么做的。我用逆转录病毒主要是为了瞬时过表达，也就3-5天。【在 l***g 的大作中提到】 : 没用过这个载体的病毒质粒，不是很清楚。为啥目的基因和GFP之间要有IRES连着，GFP : 不能和目的基因直接融合吗？一般IRES和筛选基因连着比较有用吧。如果你的GFP阳性 : 率偏低并且表达量不高的话，可以试着病毒感染后再挑选单克隆细胞，挑那种表达量高 : 的。

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