C********4
发帖数: 308 | 1 传统的complex纯化，不应该是加了tag的蛋白，很strigent的条件(500 mM NaCl etc)
拉下来，在银染上看到带，才切下来去打，然后一系列实验，比如gel filtration，体
外重组蛋白重组这个complex等, 验证了，才敢说是complex吗。
现在很多文章所谓的纯化蛋白 complex，都是不需要看到清晰的条带，直接把elution
全部去打质谱（或者在切整个胶），看到三四十个蛋白，随便找几个自己想要的，就说
是interaction。
不知道哪个可信啊。 |
k******0
发帖数: 1073 | |
k******0
发帖数: 1073 | 3 蛋白质相互作用，有强弱之分。
如果鉴定protein complex， 正如您所说，用各种色谱或非变性电泳分离纯化到单峰或
单条带，不能再分离。protein complex是蛋白质作用较强而结构稳定的复合体。
很多蛋白，相互间有一定的作用，但没有稳定到形成复合体的程度。 |
e****s
发帖数: 1125 | 4 你所谓的传统方法只能检测非常强的相互作用。
蛋白作用的方式很不同，比如你用500 mM Nacl，那么弱的电荷作用就容易被破坏，而
疏水作用就会被增强，更容易被检测到。
关键是对照。不管相互作用强弱，阴性、阳性对照最重要。而且最好通过2种以上不同
的方法验证。
)
elution
【在 C********4 的大作中提到】
: 传统的complex纯化，不应该是加了tag的蛋白，很strigent的条件(500 mM NaCl etc)
: 拉下来，在银染上看到带，才切下来去打，然后一系列实验，比如gel filtration，体
: 外重组蛋白重组这个complex等, 验证了，才敢说是complex吗。
: 现在很多文章所谓的纯化蛋白 complex，都是不需要看到清晰的条带，直接把elution
: 全部去打质谱（或者在切整个胶），看到三四十个蛋白，随便找几个自己想要的，就说
: 是interaction。
: 不知道哪个可信啊。
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g***y
发帖数: 205 | 5 我就是这么干的，把elution全部打质谱
找在wt存在的，在deletion mutant缺失的蛋白的
不过后面又用其它方法验证了
)
elution
【在 C********4 的大作中提到】
: 传统的complex纯化，不应该是加了tag的蛋白，很strigent的条件(500 mM NaCl etc)
: 拉下来，在银染上看到带，才切下来去打，然后一系列实验，比如gel filtration，体
: 外重组蛋白重组这个complex等, 验证了，才敢说是complex吗。
: 现在很多文章所谓的纯化蛋白 complex，都是不需要看到清晰的条带，直接把elution
: 全部去打质谱（或者在切整个胶），看到三四十个蛋白，随便找几个自己想要的，就说
: 是interaction。
: 不知道哪个可信啊。
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u**********d
发帖数: 573 | 6 re
稳定的complex的鉴定很重要，一些动态的相互作用也很重要。至于文章上面的文字表
述，擦亮眼睛即可。
【在 e****s 的大作中提到】
: 你所谓的传统方法只能检测非常强的相互作用。
: 蛋白作用的方式很不同，比如你用500 mM Nacl，那么弱的电荷作用就容易被破坏，而
: 疏水作用就会被增强，更容易被检测到。
: 关键是对照。不管相互作用强弱，阴性、阳性对照最重要。而且最好通过2种以上不同
: 的方法验证。
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: elution
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