h********n
发帖数: 4079 | 1 几年前我在phd实验室做的mouse lung cancer cell line, 从transgenic mouse肺癌上
分出来的. 后来我把这个细胞从尾静脉注射到wt FVB老鼠(跟细胞来源的老鼠相同
strain), 可以长肺癌. 注射100万细胞in PBS.
现在他们用同样的细胞打同样的FVB老鼠, 大多数老鼠会立即出现"瘫倒"的症状, 但不
死; 几周以后没有肺癌. 下面一段是他们的描述:
5-10 seconds after the injection, mice would become paralyzed: they lost
their balance and lied on their sides, some with legs kicking. Most of them
won't die and will recover within a few hours. About one in ten mice will
die on the next day or two, and no one died within the first few hours after
injection
所以上周我向他们要来细胞, 这周自己打了几只老鼠, 没啥问题.
BTW, 以前我把细胞注射到尾静脉的时候, 会有大概5-10%老鼠当场死掉, 我觉得是有些
细胞成团了, 我猜这个应该算是正常的吧.
各位知道有什么可能的原因导致老鼠出现瘫倒的症状吗? 有什么原因会导致我和他们的
实验出现这么大的差异吗? |
s******y
发帖数: 28562 | 2 我没有从静脉打过，但是我从他们的描述来看应该就是造成了老鼠短暂中风了。
原因大概就是那么几个：
1。他们没有把癌细胞完全打散，造成很多细胞以小团的形式进入血管并堵塞一些
毛细血管，一方面造成老鼠中风，另外一方面吸引免疫细胞去杀那些团形的细胞群，
还有另外一方面就是癌细胞不贴血管壁，所以最后就造成没有metastasis。
2. 打进了小量气泡，这个也会导致老鼠中风，但是这个不能解释没有metastasis的情
况。
我会建议他们把癌细胞从皿上trpsinize 之后过一个40um strainer来滤掉成团的细胞。
them
after
【在 h********n 的大作中提到】
: 几年前我在phd实验室做的mouse lung cancer cell line, 从transgenic mouse肺癌上
: 分出来的. 后来我把这个细胞从尾静脉注射到wt FVB老鼠(跟细胞来源的老鼠相同
: strain), 可以长肺癌. 注射100万细胞in PBS.
: 现在他们用同样的细胞打同样的FVB老鼠, 大多数老鼠会立即出现"瘫倒"的症状, 但不
: 死; 几周以后没有肺癌. 下面一段是他们的描述:
: 5-10 seconds after the injection, mice would become paralyzed: they lost
: their balance and lied on their sides, some with legs kicking. Most of them
: won't die and will recover within a few hours. About one in ten mice will
: die on the next day or two, and no one died within the first few hours after
: injection
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h********n
发帖数: 4079 | 3 cell strainer我们也用. 主要的怪异之处是, 我做的时候没事, 他们做就不行. 而他们的方法是我建立的. 而且这些方法都是通常用的, 没什么特别的地方.
胞。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我没有从静脉打过，但是我从他们的描述来看应该就是造成了老鼠短暂中风了。
: 原因大概就是那么几个：
: 1。他们没有把癌细胞完全打散，造成很多细胞以小团的形式进入血管并堵塞一些
: 毛细血管，一方面造成老鼠中风，另外一方面吸引免疫细胞去杀那些团形的细胞群，
: 还有另外一方面就是癌细胞不贴血管壁，所以最后就造成没有metastasis。
: 2. 打进了小量气泡，这个也会导致老鼠中风，但是这个不能解释没有metastasis的情
: 况。
: 我会建议他们把癌细胞从皿上trpsinize 之后过一个40um strainer来滤掉成团的细胞。
:
: them
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s******y
发帖数: 28562 | 4 很正常啊，trpsinize 的结果取决于细胞的状态（比方说是否过于confluent) 以及手
法，
不同的人做出来的结果差很远。所以cell straining 在需要注射的场合里是必须的。
我们
做皮下注射的时候，在数细胞之前也一定会先过滤一下。
【在 h********n 的大作中提到】
: cell strainer我们也用. 主要的怪异之处是, 我做的时候没事, 他们做就不行. 而他们的方法是我建立的. 而且这些方法都是通常用的, 没什么特别的地方.
:
: 胞。
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h********n
发帖数: 4079 | 5 可是那些人做这个实验都是当年我一手教出来的, 完全follow我的方法......
【在 s******y 的大作中提到】
: 很正常啊，trpsinize 的结果取决于细胞的状态（比方说是否过于confluent) 以及手
: 法，
: 不同的人做出来的结果差很远。所以cell straining 在需要注射的场合里是必须的。
: 我们
: 做皮下注射的时候，在数细胞之前也一定会先过滤一下。
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D*a
发帖数: 6830 | |
C**S
发帖数: 522 | |
w***a
发帖数: 1053 | |
k****o
发帖数: 589 | 9 看样子是有小的细胞团块，让他们过两次strainer试试？ |
s******y
发帖数: 28562 | 10 啊？？？
能不能请教一下这个怎么操作的？
【在 w***a 的大作中提到】
: 我都是直接打肺，很容易就得肺癌了。
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i*****g
发帖数: 11893 | |
O******e
发帖数: 4845 | 12 同问。。。
难度大，而且死亡率是不是挺高的？
【在 s******y 的大作中提到】
: 啊？？？
: 能不能请教一下这个怎么操作的？
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d*p
发帖数: 534 | 13 Why do you use 1 million of cells? It might cause aggregation. I usually use
0.2 million B16 in 200ul PBS, never had this kind of problem. No mice dead
at all. All have tumor metastasis. |
h********n
发帖数: 4079 | 14 0.2 million太少, 那个细胞没有那么猛.
use
dead
【在 d*p 的大作中提到】
: Why do you use 1 million of cells? It might cause aggregation. I usually use
: 0.2 million B16 in 200ul PBS, never had this kind of problem. No mice dead
: at all. All have tumor metastasis.
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h********n
发帖数: 4079 | 15 说实话, 我自己做的时候一般不太需要strainer. 多vortex几下就好了.
【在 k****o 的大作中提到】
: 看样子是有小的细胞团块，让他们过两次strainer试试？
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O******e
发帖数: 4845 | 16 你们一般用孔径多少的？40um的是不是太小了？
【在 h********n 的大作中提到】
: 说实话, 我自己做的时候一般不太需要strainer. 多vortex几下就好了.
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h********n
发帖数: 4079 | 17 40 或者 70 都可以把. 40 不小.
【在 O******e 的大作中提到】
: 你们一般用孔径多少的？40um的是不是太小了？
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w***a
发帖数: 1053 | 18 好几天没来了，没回复
我早已经换了课题了，我得找找文章，找到了发在这里
，我记得是个日本人的文章
成功率很高，死亡率也不大，我目的是观察knock out老鼠肺癌metastasis能力的变化
【在 s******y 的大作中提到】
: 啊？？？
: 能不能请教一下这个怎么操作的？
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w***a
发帖数: 1053 | 19 Br J Cancer. 1999 Mar;79(7-8):1121-6.
Mediastinal lymph node metastasis model by orthotopic intrapulmonary
implantation of Lewis lung carcinoma cells in mice.
Doki Y, Murakami K, Yamaura T, Sugiyama S, Misaki T, Saiki I.
还有一篇，没找到，方法和这个一样的
them
after
【在 h********n 的大作中提到】
: 几年前我在phd实验室做的mouse lung cancer cell line, 从transgenic mouse肺癌上
: 分出来的. 后来我把这个细胞从尾静脉注射到wt FVB老鼠(跟细胞来源的老鼠相同
: strain), 可以长肺癌. 注射100万细胞in PBS.
: 现在他们用同样的细胞打同样的FVB老鼠, 大多数老鼠会立即出现"瘫倒"的症状, 但不
: 死; 几周以后没有肺癌. 下面一段是他们的描述:
: 5-10 seconds after the injection, mice would become paralyzed: they lost
: their balance and lied on their sides, some with legs kicking. Most of them
: won't die and will recover within a few hours. About one in ten mice will
: die on the next day or two, and no one died within the first few hours after
: injection
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h********n
发帖数: 4079 | 20 谢谢
【在 w***a 的大作中提到】
: Br J Cancer. 1999 Mar;79(7-8):1121-6.
: Mediastinal lymph node metastasis model by orthotopic intrapulmonary
: implantation of Lewis lung carcinoma cells in mice.
: Doki Y, Murakami K, Yamaura T, Sugiyama S, Misaki T, Saiki I.
: 还有一篇，没找到，方法和这个一样的
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: them
: after
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