m******5
发帖数: 1383 | 1 最近实验室大量饲养ES cell，commercial Lif太烧钱了
想做过大肠杆菌表达的 |
b******y
发帖数: 627 | 2 Why not? Post-translational modification? or mis-folding? |
n***w
发帖数: 2405 | 3 of course.
paper都发了一堆了。。。。
不过我不是做ES方面的。。。 |
s********r
发帖数: 312 | 4 我们lab好像也是technician自己做的，回头帮你问问 |
m******5
发帖数: 1383 | 5 Thank you!!!
如果有plasmid最好了，能不能私下寄一点？
另外问问有没有特别的除内毒素的步骤
【在 s********r 的大作中提到】
: 我们lab好像也是technician自己做的，回头帮你问问
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z*t
发帖数: 863 | 6 有人用一种细胞叫chew LIF(不知道对不对)，会分泌LIF进入培养基。甚至你可以用养过MEF培
养基，或
者用mef。之前我们实验室也是买LIF但实在太费钱了。。。
【在 m******5 的大作中提到】
: 最近实验室大量饲养ES cell，commercial Lif太烧钱了
: 想做过大肠杆菌表达的
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m******5
发帖数: 1383 | 7 常规做法是MEF+LIF
MEF不光起到分泌LIF的作用还起到一个生长matrix的作用
养过MEF培
【在 z*t 的大作中提到】
: 有人用一种细胞叫chew LIF(不知道对不对)，会分泌LIF进入培养基。甚至你可以用养过MEF培
: 养基，或
: 者用mef。之前我们实验室也是买LIF但实在太费钱了。。。
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t***i
发帖数: 114 | 8 对，有的feeder cell （transformed MEF with stably expressed LIF）就可以分泌
LIF。
养过MEF培
【在 z*t 的大作中提到】
: 有人用一种细胞叫chew LIF(不知道对不对)，会分泌LIF进入培养基。甚至你可以用养过MEF培
: 养基，或
: 者用mef。之前我们实验室也是买LIF但实在太费钱了。。。
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i*****g
发帖数: 11893 | |
s*********t
发帖数: 600 | 10 用表达分泌LIF的细胞系做conditioned medium |
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m******5
发帖数: 1383 | 11 还是对大肠杆菌表达的最感兴趣……别的都太dirty，另外纯化的lif经常可以干别的，
比如在特定时期诱导分化之类
【在 s*********t 的大作中提到】
: 用表达分泌LIF的细胞系做conditioned medium
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v*******n
发帖数: 8995 | 12 我们隔壁实验室有一个在表达lif 的CHO
用他的condition media就行了。你可以看看atcc有没有卖
【在 m******5 的大作中提到】
: 最近实验室大量饲养ES cell，commercial Lif太烧钱了
: 想做过大肠杆菌表达的
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s********r
发帖数: 312 | 13 问了下 cos-7细胞，据他说293也行，转LIF质粒，然后用ES培养基养，24,48小时收
medium，做几个titration养ES试一试，确定下working concentration就行。 |
m******5
发帖数: 1383 | 14 方便寄一点质粒么？
【在 s********r 的大作中提到】
: 问了下 cos-7细胞，据他说293也行，转LIF质粒，然后用ES培养基养，24,48小时收
: medium，做几个titration养ES试一试，确定下working concentration就行。
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i*****g
发帖数: 11893 | 15 没那么麻烦，GST-lif expressed in e coli
然后纯化，然后thrombin切割
大概一次提个1mg 蛋白，随便用在mESC 细胞培养里面，没有问题的
我都做过N次的，简单的一壶， |
i*****g
发帖数: 11893 | |
m******5
发帖数: 1383 | 17 求share点plasmid.....
【在 i*****g 的大作中提到】
: 没那么麻烦，GST-lif expressed in e coli
: 然后纯化，然后thrombin切割
: 大概一次提个1mg 蛋白，随便用在mESC 细胞培养里面，没有问题的
: 我都做过N次的，简单的一壶，
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f****e
发帖数: 679 | 18 同求！
【在 m******5 的大作中提到】
: 求share点plasmid.....
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