s*******s
发帖数: 623 | 1 overlap PCR中间重叠区域长度请教
两个各3kb的片段
中间重叠21 bp的话
overlap PCR够了不够？
thanks! |
m******5
发帖数: 1383 | |
m***y
发帖数: 627 | |
l**********1
发帖数: 5204 | 4 the better is between 30-40 bp
if your A 3kp+12 bp(I) and B 3kp+12(II) bp might can not be read on the one side
by ABI auto sequencing,
if lost just this I +II 那就杯具喽
【在 s*******s 的大作中提到】
: overlap PCR中间重叠区域长度请教
: 两个各3kb的片段
: 中间重叠21 bp的话
: overlap PCR够了不够？
: thanks!
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s*******s
发帖数: 623 | 5 你看懂我的问题了吗？
side
【在 l**********1 的大作中提到】
: the better is between 30-40 bp
: if your A 3kp+12 bp(I) and B 3kp+12(II) bp might can not be read on the one side
: by ABI auto sequencing,
: if lost just this I +II 那就杯具喽
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l**********1
发帖数: 5204 | 6 是吗?
下一步不做啦
ensure efficient recombination in host cell
需要的吧?
please refer:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC155262/
Forty-base-pair overlaps are adequate to ensure efficient recombination in yeast (Hua et al. 1997;
Oldenberg et al. 1997). Hence, we considered it likely that 80-bp recombination linkers, with 40 bp of
vector overlap and 40 bp of fragment overlap, would be adequate to stimulate efficient fragment subcloning
【在 s*******s 的大作中提到】
: 你看懂我的问题了吗？
:
: side
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g***y
发帖数: 201 | 7 足够了。
我做三个片段连接，
size 500－800bp,
每两个overlap 13bp,
也做成了。
【在 s*******s 的大作中提到】
: overlap PCR中间重叠区域长度请教
: 两个各3kb的片段
: 中间重叠21 bp的话
: overlap PCR够了不够？
: thanks!
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l**********1
发帖数: 5204 | 8 LD
ABI read 3kp is harder than 0.9kp
especially at its side? the opposite side of sequencing PCR primer
position.
【在 g***y 的大作中提到】
: 足够了。
: 我做三个片段连接，
: size 500－800bp,
: 每两个overlap 13bp,
: 也做成了。
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x**2
发帖数: 255 | |
s*******s
发帖数: 623 | 10 有点错乱了～
【在 l**********1 的大作中提到】
: LD
: ABI read 3kp is harder than 0.9kp
: especially at its side? the opposite side of sequencing PCR primer
: position.
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w******n
发帖数: 767 | 11 具体情况不一样，试一下才知道，overlap区最好不要有错配。
【在 s*******s 的大作中提到】
: overlap PCR中间重叠区域长度请教
: 两个各3kb的片段
: 中间重叠21 bp的话
: overlap PCR够了不够？
: thanks!
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C***Y
发帖数: 61 | 12
I did some with 18-bp overlap, and most of them worked.
【在 s*******s 的大作中提到】
: overlap PCR中间重叠区域长度请教
: 两个各3kb的片段
: 中间重叠21 bp的话
: overlap PCR够了不够？
: thanks!
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z*******6
发帖数: 679 | |
l**********1
发帖数: 5204 | 14 EN if 15bp=5 amino acid residues that is the conservative amino acid
sequence between different species (i.e.
general fruit fly and house fly and Mediterranean fruit fly
then Overlap PCR 6kp next expression protein is which fly's protein?
【在 z*******6 的大作中提到】
: 用过最多15、6bp成功过...
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