h**********r
发帖数: 671 | 1 问个弱智的问题，我想在agar平板上筛选，外源基因受IPTG诱导，请问有没有什么好方
法不用转到液体96孔板上就能诱导基因表达的呢？
多谢！ |
o*****r
发帖数: 156 | 2 这个很难吧？什么时候诱导呢？ 12h之后喷雾？
关键是就算诱导表达了，也不好检测吧。
不知到你有多少个克隆。
【在 h**********r 的大作中提到】
: 问个弱智的问题，我想在agar平板上筛选，外源基因受IPTG诱导，请问有没有什么好方
: 法不用转到液体96孔板上就能诱导基因表达的呢？
: 多谢！
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s*******e
发帖数: 1010 | 3 不能直接加到Agar里面吗？我做蓝白斑就是直接配平板的时候加IPTG的 |
h**********r
发帖数: 671 | 4 IPTG不能直接加到agar里，如果加的话阳性克隆会不长，这是鉴定阳性克隆（例如T7
promoter）的方法之一。
好像液体生长有一种类似于lactose诱导的混合培养基，等glucose用完之后自动诱导，
不记得了，不知道用到agar里可行不。挺麻烦的吧。
另外考虑用非诱的启动子。
我要做个directed evolution，有了一个比较好的筛选assay。看别人动不动就Liquid
Handling/Robotic Lab Automation，所以心里没底。故此一问，想先平板初筛一下。
没有这方面的经验，心里发毛。
谢谢！ |
s*******e
发帖数: 1010 | 5 F. William Studier有一篇“Protein Production by Auto-Induction in High-
Density Shaking Cultures”就是做的自动诱导，你可以借鉴一下看看能不能用到Agar
上面
Liquid
【在 h**********r 的大作中提到】
: IPTG不能直接加到agar里，如果加的话阳性克隆会不长，这是鉴定阳性克隆（例如T7
: promoter）的方法之一。
: 好像液体生长有一种类似于lactose诱导的混合培养基，等glucose用完之后自动诱导，
: 不记得了，不知道用到agar里可行不。挺麻烦的吧。
: 另外考虑用非诱的启动子。
: 我要做个directed evolution，有了一个比较好的筛选assay。看别人动不动就Liquid
: Handling/Robotic Lab Automation，所以心里没底。故此一问，想先平板初筛一下。
: 没有这方面的经验，心里发毛。
: 谢谢！
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h**********r
发帖数: 671 | |
