m******5
发帖数: 1383 | 1 首批PCR鉴定出来的，事后southern blot鉴定出来不是的多么？ |
t***i
发帖数: 114 | 2 我身边有两例，还是比较多的吧。Southern 是最终的标准。
【在 m******5 的大作中提到】
: 首批PCR鉴定出来的，事后southern blot鉴定出来不是的多么？
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b****r
发帖数: 17995 | 3 看你如何定义PCR鉴定
如果是KOMP那样先用loxp引物和arm外的引物扩长片段PCR,然后用loxp引物测序，5，3
端都对，我很难想象会有几个假阳性
如果就是用vector内部引物扩个带，假阳性太多了 |
m******5
发帖数: 1383 | 4 我是用我引入的Neo resistant片断作正向 ，short arm 外找反向 |
s********r
发帖数: 312 | 5 肯定有这个情况，撇开PCR设计策略不说，有可能你的colony不纯，只有一部分是
targeted，PCR是阳性，southern就不一定了。因为你最后打进去的只是很少的细胞，
colony不纯就增大失败的概率了 |
m***o
发帖数: 272 | 6 实验室以前有个博后用PCR 得到大概6个阳性，用southern做发现全是假阳性。 |
m******5
发帖数: 1383 | 7 他PCR怎么设计的……
弱问一下，听着心虚
【在 m***o 的大作中提到】
: 实验室以前有个博后用PCR 得到大概6个阳性，用southern做发现全是假阳性。
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m***o
发帖数: 272 | 8 听实验室的一个老技术员说的，不清楚怎么设计的PCR.
我现在也在做southern，不想用同位素，所以也想用PCR，但是前面做这个课题的说好
像PCR不工作。我现在也没有想通怎么回事。 |
m******5
发帖数: 1383 | 9 感觉如果一端在中间是带进来的一端在短臂外不应该有那么多假阳性
【在 m***o 的大作中提到】
: 听实验室的一个老技术员说的，不清楚怎么设计的PCR.
: 我现在也在做southern，不想用同位素，所以也想用PCR，但是前面做这个课题的说好
: 像PCR不工作。我现在也没有想通怎么回事。
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s********r
发帖数: 312 | 10 southern可以用roche的digoxigenin-label kit做，效果还行 |
m******5
发帖数: 1383 | 11 invitrogen 那套 iblot转膜效果如何
另外，你们lable完测lable效率么？还是直接上
【在 s********r 的大作中提到】
: southern可以用roche的digoxigenin-label kit做，效果还行
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