m********r
发帖数: 124 | 1 我们是做生化的，体外纯化蛋白，做相互作用（fluorescence，ITC，pulldown），
顺便做点结晶和核磁，mapping作用位点。我第三年下了。
Rotation 的时候做一个真核信号通路蛋白的A domain（这也是老板postdoc做的
domain），是个很好纯化的蛋白，做的还行，有个coauthor的paper（师兄一作，4分左
右，话说我觉得实验室就这个水平了）。
加入实验室之前，另外一个rotation的学生做B和C蛋白，是原核的信号通路。当时
我感觉我加入实验室是不就做这个了。结果老板让我先做D和E， 顺便做原来的真核蛋
白的F domain，理由是应用的技术是一样的，要charaterize的蛋白性质也是相同的。
这是实情。这个时候有个小的grant, 关于蛋白BCDE的。结果我第二年冬天发现F
domain太大，不好做。而D和E表达起来比较困难，不可溶。加上B和C合作者有genetics
的data，所以就做了点这个。之后回国，春天回来做助教，上课考qualify，几乎春季
没做实验。完了之后，发现D和E 已经被马普的两个组发了。人家一个做遗传，而当时
我们的合作者不做这条通路的遗传；一个做生化，其实他也没表达出来，但是人家找了
个好做的homolog，同源性高，去做了。我老板说这个人做了一辈子这个东西，我们比
不过他，放弃吧。
而这时，我的合作者和老板去开了个会。会后合作者又想了课题，需要我们的还是
我们开始那一套，相互作用和结构。就是蛋白G和domain H吧。结果我上个暑假就做这
个了。老板的意思是我有点数据好帮合作者申钱。结果H不折叠。我直到冬天读了很多
paper，才发现这个domain拿出来单独就是unstructured。这也就是为什么人家拿嗜热
菌种的H 做了结构发了cell。老板说，在实验室的条件下确实没好办法，因为这个
domain紧挨着跨膜区，加上前面变成膜蛋白或者放在脂质体这个老板还是没信心做的。
因此当时就说做嗜热菌，然后突变或者chimera成e.coli的，再结合人家的遗传学数据
发paper。
所以我就继续做的B和C。B没问题，就是C 纯化的不好，要快，不然降解。做了一次
实验，老板说不够convincing.这个属于NMR的问题，slow exchange的binding 确实很
难 独立证明。因此我就去做另一个assay。最近也不知道怎么了，实验老是出问题，主
要实验室问题比较多，本科生buffer配错了一次，FPLC又坏了一次，唉，搁浅了有两周
了。
今天老板突然说发现我不够兴奋。然后说不愿用别的钱支持我做现在的。而BCDE的
funding今年六月到期。DE他已经不让做了，他发现我BC也没做出来，所以担心renewal
不上了。这时他让我考虑回过头去做A，说了一大堆鼓励我的，我会做比新生做的快。
我说那嗜热菌的H呢？因为我觉得从纯化蛋白方面这H和A是相同的，要做的随后实验也
差不多。老板突然说，它还是嗜热菌的，你做出来很难发的，因为生理上都是e.coli或
者别的杆菌。其实我现在想想，主要是师兄要走，然后三月底有新的学生加入实验室，
所以他让我决定是否接手师兄剩下的。
唉，我这一路艰辛啊，我发现老板是个很保守的人，很多东西感兴趣，他都要试试
，然后做不下去他就迅速转移了。当年在国内的老板心比天高，什么都觉得自己能做出
来，当时不是很认同，没想到走到另一个极端了，老板过于保守了。大家说我是换还是
不换？不换我的感觉是，BC做high risk的课题，嗜热菌的H做low risk的。但是问题也
很多，首先原核的老板懂得不多，而且B和C现在看来合作者是一作，但这应该是篇大的
，合作者吹牛是PNAS级别的，我觉得至少不会太差，因为C在别的菌里发现的同源物很
少。我计划换的话我就摊牌，再也不换了，直接换够了，先在师兄走之前接手A，但是
我想偷偷做B和C的结构方面的（这方面可以不管合作者的遗传数据，我是一作）当然做
不出来就算了。嗜热菌的H就只能扔了。大家给点建议啊。 |
M*****n
发帖数: 16729 | |
y***i
发帖数: 11639 | 3 好好读读文章，想一想哪个project work可能性大。什么实验是critical
experiment，能告诉你该不该往下走，然后尽快把critical experiment 做了。慢慢悠
悠一点不着急的话不行，不然过两年就发现自己在泥潭里了。
genetics
【在 m********r 的大作中提到】
: 我们是做生化的，体外纯化蛋白，做相互作用（fluorescence，ITC，pulldown），
: 顺便做点结晶和核磁，mapping作用位点。我第三年下了。
: Rotation 的时候做一个真核信号通路蛋白的A domain（这也是老板postdoc做的
: domain），是个很好纯化的蛋白，做的还行，有个coauthor的paper（师兄一作，4分左
: 右，话说我觉得实验室就这个水平了）。
: 加入实验室之前，另外一个rotation的学生做B和C蛋白，是原核的信号通路。当时
: 我感觉我加入实验室是不就做这个了。结果老板让我先做D和E， 顺便做原来的真核蛋
: 白的F domain，理由是应用的技术是一样的，要charaterize的蛋白性质也是相同的。
: 这是实情。这个时候有个小的grant, 关于蛋白BCDE的。结果我第二年冬天发现F
: domain太大，不好做。而D和E表达起来比较困难，不可溶。加上B和C合作者有genetics
|
e****s
发帖数: 1125 | 4 和我做的很类似啊。
感觉下来A是比较Safe的课题，接手你师兄的做应该不错。BC等有了Promising的结果再
和老板说。话都别说死，同时做呗。算不上建议，这种情况只有自己心里最清楚。
genetics
【在 m********r 的大作中提到】
: 我们是做生化的，体外纯化蛋白，做相互作用（fluorescence，ITC，pulldown），
: 顺便做点结晶和核磁，mapping作用位点。我第三年下了。
: Rotation 的时候做一个真核信号通路蛋白的A domain（这也是老板postdoc做的
: domain），是个很好纯化的蛋白，做的还行，有个coauthor的paper（师兄一作，4分左
: 右，话说我觉得实验室就这个水平了）。
: 加入实验室之前，另外一个rotation的学生做B和C蛋白，是原核的信号通路。当时
: 我感觉我加入实验室是不就做这个了。结果老板让我先做D和E， 顺便做原来的真核蛋
: 白的F domain，理由是应用的技术是一样的，要charaterize的蛋白性质也是相同的。
: 这是实情。这个时候有个小的grant, 关于蛋白BCDE的。结果我第二年冬天发现F
: domain太大，不好做。而D和E表达起来比较困难，不可溶。加上B和C合作者有genetics
|
m********r
发帖数: 124 | 5 基本同意，明天就跟老板这么谈。。。
【在 e****s 的大作中提到】
: 和我做的很类似啊。
: 感觉下来A是比较Safe的课题，接手你师兄的做应该不错。BC等有了Promising的结果再
: 和老板说。话都别说死，同时做呗。算不上建议，这种情况只有自己心里最清楚。
:
: genetics
|
