h****k
发帖数: 182 | 1 请问有什么好的方法或者实验可以检测membrane bound receptor 是monomer，dimer,
还是multimer？ |
w*****3
发帖数: 1582 | 2 cross-link, or native gel |
h****k
发帖数: 182 | 3 谢ls,cross-link的具体思路是怎样的? |
C*******e
发帖数: 4348 | 4 cross-linking就是可逆或不可逆的把peptide以共价键链接
具体可以参考pierce网站
http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=0203
它们还有免费的handbook可以下载或者索取
http://www.piercenet.com/Objects/View.cfm?Type=Page&ID=FE7F690D-58AE-4342-
AE85-BA94DCA642F8
不过cross-linking这个东西本身比较tricky
具体操作中可能遇到没有考虑过的问题
比如是同一肽链里的cross-link还是两条肽链之间的？
spacer长度多少才合适？
单一蛋白体系还算straight forward
如果体系里有大于两种以上的蛋白
情况可以变得相当复杂
所以在考虑cross-linking之前如果我是lz
我会先做native gel和SEC
这样对于oligomer status有个大概的了解
【在 h****k 的大作中提到】
: 谢ls,cross-link的具体思路是怎样的?
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h****k
发帖数: 182 | 5 谢谢ls。我会先选择native gel试试看。另外sec不可行因为蛋白量不够。还有cross
linking可能会把本来是monomer的link成dimer 或者multimer?? 感觉不对。 |
y******8
发帖数: 1764 | 6 内源的膜蛋白可能很难做。比较常见的是做FRET或者Co-IP，都是过量表达。 |
C*******e
发帖数: 4348 | 7 对，cross linking做的本身的意义就在于把两个东西（大多数时候是两个肽链，或者
是一个肽链一
个marker）用共价键相连，所以一条肽链内的cross linking其实是要避免的。在研究
两个肽链（可
以相同也可能不同）的相对空间位置的时候可以用cross linking提供一些有用的信息
。所以如果你
的蛋白本身是dimer，或者trimer，理论上说可以用cross linking的方式“固定”下来。
【在 h****k 的大作中提到】
: 谢谢ls。我会先选择native gel试试看。另外sec不可行因为蛋白量不够。还有cross
: linking可能会把本来是monomer的link成dimer 或者multimer?? 感觉不对。
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h****k
发帖数: 182 | 8 谢ls，如果蛋白本身是单体，使用crosslinking后会不会造成假象，检测结果为dimer
或者multimer??
另外co-IP的时候使用该receptor的抗体，如果是单体，该抗体会不会聚集这些
receptor,而成为dimer或者multimer?? |
S****r
发帖数: 982 | 9 Cysteine-trap is a regular approach to confirm dimer of membrane proteins.
dimer
No. SDS-PAGE, reducing or non-reducing environment, depending on the linkers
you chosen.
No, SDS-PAGE
【在 h****k 的大作中提到】
: 谢ls，如果蛋白本身是单体，使用crosslinking后会不会造成假象，检测结果为dimer
: 或者multimer??
: 另外co-IP的时候使用该receptor的抗体，如果是单体，该抗体会不会聚集这些
: receptor,而成为dimer或者multimer??
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m*********7
发帖数: 5207 | 10 Bingo! I like this answer.
【在 C*******e 的大作中提到】
: cross-linking就是可逆或不可逆的把peptide以共价键链接
: 具体可以参考pierce网站
: http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=0203
: 它们还有免费的handbook可以下载或者索取
: http://www.piercenet.com/Objects/View.cfm?Type=Page&ID=FE7F690D-58AE-4342-
: AE85-BA94DCA642F8
: 不过cross-linking这个东西本身比较tricky
: 具体操作中可能遇到没有考虑过的问题
: 比如是同一肽链里的cross-link还是两条肽链之间的？
: spacer长度多少才合适？
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