c*******r
发帖数: 440 | 1 借宝地请教：
表达纯化了的MBP融合蛋白，用Factor Xa 酶切后出现沉淀，上清几乎无目标蛋白，目
标蛋白的PI=10 （将来用于结晶）。
通过改变酶切buffer 的 PH，或添加 DDT, glycerol, 盐浓度，还是酶切后还是出现
沉淀。
请分析原因和解决方法，多谢！！！ |
g*****y
发帖数: 6325 | |
c*******r
发帖数: 440 | 3 对，蛋白本身可溶性不太好，少量才是可溶的才考虑用MBP融合蛋白表达，但酶切后目
标蛋白几乎全部沉淀，有什么方法可以减少沉淀呢？ 将来还想做晶体研究呢， 急
多谢 |
g*****y
发帖数: 6325 | 4 你的蛋白本身不好融，你做融合蛋白又切下，当然就又沉淀了。 我要是你根本就不会
浪费时间做融合蛋白。做了就不要
切。
【在 c*******r 的大作中提到】
: 对，蛋白本身可溶性不太好，少量才是可溶的才考虑用MBP融合蛋白表达，但酶切后目
: 标蛋白几乎全部沉淀，有什么方法可以减少沉淀呢？ 将来还想做晶体研究呢， 急
: 多谢
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g*****y
发帖数: 6325 | 5 这种情况我建议查文献，看到底是那个氨基酸影响融解性，在不影响结构的情况下 做
个该位点的mutation来增强蛋白溶解性。 |
