K*o
发帖数: 96 | 1 我正在做Lentivirus，但是在Packaging的时候总是遇到问题。我用的是CellBio Labs
公司的Plat-A细胞，他们公司介绍上说是Stably expressing packaging gene的293细
胞。
我的做法是：第一天把细胞种上。第二天早上细胞贴壁贴的很好，然后转染，我直接把
Fugene和DNA的mix加到Media里。第三天早上换新鲜的Media。问题是我每次
Transfection以后，第二天这些细胞都会漂起来。看上去那些细胞并没死，但是就黏在
一起然后漂在Media里。几次了都这样。转染3天后，我把所有的液体收集起来后离心，
然后用上清infect breast cancer cells，效果很差。我觉得应该是Transfection的问
题。版上有人碰过类此的问题么？这到底是怎么回事呀？为什么我的细胞总是转染后漂
起来呢？平常传代的时候它们看着都挺正常的。
有没有其他的办法？或者大家用什么细胞或Reagent做Lentivirus Packaging效果好的
，分享一下？ |
h****n
发帖数: 2552 | |
a****d
发帖数: 1919 | 3 coat plate with gelatin, that may help |
h****n
发帖数: 2552 | 4 polylysin 效果比这个好
【在 a****d 的大作中提到】
: coat plate with gelatin, that may help
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K*o
发帖数: 96 | 5 可我有时候没换，他们也浮起来了。这是不是很不正常？
你也是用293细胞么？我看到有些公司卖专门用来Packaging Lentivirus 的细胞，广告
上倒是写的不错，但也不知道到底好不好用。 |
K*o
发帖数: 96 | 6 我倒是试过Gelatin coating，但好像效果差别不大。明天我去试试PolyLysine，希望
能成 |
a*****n
发帖数: 2835 | 7 转染的时候细胞密度太大了
Labs
【在 K*o 的大作中提到】
: 我正在做Lentivirus，但是在Packaging的时候总是遇到问题。我用的是CellBio Labs
: 公司的Plat-A细胞，他们公司介绍上说是Stably expressing packaging gene的293细
: 胞。
: 我的做法是：第一天把细胞种上。第二天早上细胞贴壁贴的很好，然后转染，我直接把
: Fugene和DNA的mix加到Media里。第三天早上换新鲜的Media。问题是我每次
: Transfection以后，第二天这些细胞都会漂起来。看上去那些细胞并没死，但是就黏在
: 一起然后漂在Media里。几次了都这样。转染3天后，我把所有的液体收集起来后离心，
: 然后用上清infect breast cancer cells，效果很差。我觉得应该是Transfection的问
: 题。版上有人碰过类此的问题么？这到底是怎么回事呀？为什么我的细胞总是转染后漂
: 起来呢？平常传代的时候它们看着都挺正常的。
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s****a
发帖数: 1039 | 8 我没coat ATCC买的
第一次就怎么都要飘
写信骂了他们一顿 给我换了一批 长的就特别好 也不怎么飘
【在 K*o 的大作中提到】
: 我倒是试过Gelatin coating，但好像效果差别不大。明天我去试试PolyLysine，希望
: 能成
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b******k
发帖数: 1874 | 9 细胞密度可能太高了。293细胞很容易浮起。任何动作都要温柔。
我们用TRANSIT,转了以后1.5－2天后，直接收集media，每12小时一次（收旧的，换新的
），共3－4次。然后，离心。
Labs
【在 K*o 的大作中提到】
: 我正在做Lentivirus，但是在Packaging的时候总是遇到问题。我用的是CellBio Labs
: 公司的Plat-A细胞，他们公司介绍上说是Stably expressing packaging gene的293细
: 胞。
: 我的做法是：第一天把细胞种上。第二天早上细胞贴壁贴的很好，然后转染，我直接把
: Fugene和DNA的mix加到Media里。第三天早上换新鲜的Media。问题是我每次
: Transfection以后，第二天这些细胞都会漂起来。看上去那些细胞并没死，但是就黏在
: 一起然后漂在Media里。几次了都这样。转染3天后，我把所有的液体收集起来后离心，
: 然后用上清infect breast cancer cells，效果很差。我觉得应该是Transfection的问
: 题。版上有人碰过类此的问题么？这到底是怎么回事呀？为什么我的细胞总是转染后漂
: 起来呢？平常传代的时候它们看着都挺正常的。
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K*o
发帖数: 96 | 10 那10cm的盘，细胞密度大概种的时候该是多少比较合适呢？
你说的TransIT是指TransIT2010 还是TransIT－293？还是都一样？
每12个小时换液，细胞不会浮起来么？
不好意思，问的比较细，实在是被这个问题困扰了太久。 |
r****r
发帖数: 379 | 11 这个牛：）
【在 s****a 的大作中提到】
: 我没coat ATCC买的
: 第一次就怎么都要飘
: 写信骂了他们一顿 给我换了一批 长的就特别好 也不怎么飘
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