A***g
发帖数: 191 | 1 所在的实验室是一个烧钱的实验室，做几十个转录因子，实验套路大致就是qPCR和
western结合检测不同基因在不同human cell line中的表达，然后挑出表达合适的细胞
系去做siRNA和Chip-seq，目的呢，找出这些转录因子的binding site以及pathway什么
的。
我其实只是一国内小硕在这里做一小技术员，可是目前实验室没有post-doc，所以这些
实验基本上就着落在我和另一技术员身上，她负责做siRNA，其它的实验都我做。
照着protocol做实验当然没问题啊，遇到不懂的没人问就难办了。可是我成天闷头赶实
验，哪里有空看文献呢，所以就只好跟science脱节了。
做qPCR还好说（其实也有困难，另行发帖请教），我用的是GAPDH作为internal
control来计算相对表达量。可是做western时，我一开始选的是GAPDH做内对照，买的
是Sigma的抗体，做的还挺好的，因为这个GAPDH检测大小是36kd，正好跟我的目的蛋白
50-75kd能分开，我转一张膜，然后剪开就可以同时检测两个抗体。可是老板在我上周
汇报结果时说GAPDH主要在细胞质表达 |
s******r
发帖数: 2876 | 2 Histon H1 行不行？
所在的实验室是一个烧钱的实验室，做几十个转录因子，实验套路大致就是qPCR和
western结合检测不同基因在不同human cell line中的表达，然后挑出表达合适的细胞
系去做siRNA和Chip-seq，目的呢，找出这些转录因子的binding site以及pathway什么
的。
我其实只是一国内小硕在这里做一小技术员，可是目前实验室没有post-doc，所以这些
实验基本上就着落在我和另一技术员身上，她负责做siRNA，其它的实验都我做。
照着protocol做实验当然没问题啊，遇到不懂的没人问就难办了。可是我成天闷头赶实
验，哪里有空看文献呢，所以就只好跟science脱节了。
做qPCR还好说（其实也有困难，另行发帖请教），我用的是GAPDH作为internal
control来计算相对表达量。可是做western时，我一开始选的是GAPDH做内对照，买的
是Sigma的抗体，做的还挺好的，因为这个GAPDH检测大小是36kd，正好跟我的目的蛋白
50-75kd能分开，我转一张膜，然后剪开就可以同时检测两个抗体。可是老板在我上周
汇报结
【在 A***g 的大作中提到】
: 所在的实验室是一个烧钱的实验室，做几十个转录因子，实验套路大致就是qPCR和
: western结合检测不同基因在不同human cell line中的表达，然后挑出表达合适的细胞
: 系去做siRNA和Chip-seq，目的呢，找出这些转录因子的binding site以及pathway什么
: 的。
: 我其实只是一国内小硕在这里做一小技术员，可是目前实验室没有post-doc，所以这些
: 实验基本上就着落在我和另一技术员身上，她负责做siRNA，其它的实验都我做。
: 照着protocol做实验当然没问题啊，遇到不懂的没人问就难办了。可是我成天闷头赶实
: 验，哪里有空看文献呢，所以就只好跟science脱节了。
: 做qPCR还好说（其实也有困难，另行发帖请教），我用的是GAPDH作为internal
: control来计算相对表达量。可是做western时，我一开始选的是GAPDH做内对照，买的
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S***l
发帖数: 323 | 3 definitely histone protein |
a******g
发帖数: 129 | 4 try p89(TFIIH) antiboyd from santa cruz
【在 A***g 的大作中提到】
: 所在的实验室是一个烧钱的实验室，做几十个转录因子，实验套路大致就是qPCR和
: western结合检测不同基因在不同human cell line中的表达，然后挑出表达合适的细胞
: 系去做siRNA和Chip-seq，目的呢，找出这些转录因子的binding site以及pathway什么
: 的。
: 我其实只是一国内小硕在这里做一小技术员，可是目前实验室没有post-doc，所以这些
: 实验基本上就着落在我和另一技术员身上，她负责做siRNA，其它的实验都我做。
: 照着protocol做实验当然没问题啊，遇到不懂的没人问就难办了。可是我成天闷头赶实
: 验，哪里有空看文献呢，所以就只好跟science脱节了。
: 做qPCR还好说（其实也有困难，另行发帖请教），我用的是GAPDH作为internal
: control来计算相对表达量。可是做western时，我一开始选的是GAPDH做内对照，买的
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g********i
发帖数: 207 | 5 histone H3 is good. histone H1 is not good coz sometimes it is also located
in cytoplasm. |
c**********n
发帖数: 5 | |
A***g
发帖数: 191 | 7 Thank you for good suggestions! I will try to contact technical support of
SantaCruz and ActiveMotif, then ask my boss to dicide to choose which one! |
D******9
发帖数: 2665 | |
