p**i
发帖数: 3525 | 1 准备胶回收做抗体，动不动就over-load，可是做抗体需要好几 mg。。。
不知该怎么办? |
s******y
发帖数: 28562 | 2 Use curtain gel.
(only has two lanes, a small one for marker, and a huge one for about 500ul
loading space)
【在 p**i 的大作中提到】
: 准备胶回收做抗体，动不动就over-load，可是做抗体需要好几 mg。。。
: 不知该怎么办?
|
p**i
发帖数: 3525 | 3 谢谢，推荐个产品吧，能自己配吗?
500ul
【在 s******y 的大作中提到】
: Use curtain gel.
: (only has two lanes, a small one for marker, and a huge one for about 500ul
: loading space)
|
l***C
发帖数: 334 | 4 跑厚胶，多跑几块胶
【在 p**i 的大作中提到】
: 准备胶回收做抗体，动不动就over-load，可是做抗体需要好几 mg。。。
: 不知该怎么办?
|
p**i
发帖数: 3525 | 5 多厚?
thanks
【在 l***C 的大作中提到】
: 跑厚胶，多跑几块胶
|
s******y
发帖数: 28562 | 6 Yes, you can make it yourself as long as you have the right comb.
You should ask your labmate for that kind of comb, or you can order from
precast gel.
For example:
http://www3.bio-rad.com/pages/LSG/PGpop_OrderReadyGel_HCI.html
161-1138 Ready Gel Tris-HCl Gel, 12% resolving gel, 4% stacking gel,
prep well, 450 µl, 8.6 x 6.8 cm (W x L)
http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Protein-Expression-and-Analysis/Protein-Gel-Electrophoresis/1D-Electrophores
【在 p**i 的大作中提到】
: 谢谢，推荐个产品吧，能自己配吗?
:
: 500ul
|
l***C
发帖数: 334 | 7 4mm,5mm
【在 p**i 的大作中提到】
: 多厚?
: thanks
|
b******n
发帖数: 4225 | 8 咱们一般都是用很薄的那种tape把各个胶孔都连起来
连成一整块
【在 l***C 的大作中提到】
: 4mm,5mm
|
p**i
发帖数: 3525 | 9 没有这样的comb，我们这里多数实验室都用很fancy的技术，没有太多生化的东西。
那个更好点? Bio-Rad还是invitrogen?
Many thanks!!!
【在 s******y 的大作中提到】
: Yes, you can make it yourself as long as you have the right comb.
: You should ask your labmate for that kind of comb, or you can order from
: precast gel.
: For example:
: http://www3.bio-rad.com/pages/LSG/PGpop_OrderReadyGel_HCI.html
: 161-1138 Ready Gel Tris-HCl Gel, 12% resolving gel, 4% stacking gel,
: prep well, 450 µl, 8.6 x 6.8 cm (W x L)
: http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Protein-Expression-and-Analysis/Protein-Gel-Electrophoresis/1D-Electrophores
|
p**i
发帖数: 3525 | 10 配和使用这样的"砖头"得有特殊设备吧?
【在 l***C 的大作中提到】
: 4mm,5mm
|
|
|
p**i
发帖数: 3525 | 11 我上次没用comb，直接上样，效果很不好。
【在 b******n 的大作中提到】
: 咱们一般都是用很薄的那种tape把各个胶孔都连起来
: 连成一整块
|
l***C
发帖数: 334 | 12 就是厚点的spacer和comb，其他都一样
【在 p**i 的大作中提到】
: 配和使用这样的"砖头"得有特殊设备吧?
|
p**i
发帖数: 3525 | 13 哪有这么厚的spacer和comb，不是开玩笑吧。
【在 l***C 的大作中提到】
: 就是厚点的spacer和comb，其他都一样
|
s******y
发帖数: 28562 | 14 In vitrogen is better, but their gel may not fit your cassette.
If your running assembly was ordered from Bio-rad, then you should stick to
Bio-rad's gel.
【在 p**i 的大作中提到】
: 没有这样的comb，我们这里多数实验室都用很fancy的技术，没有太多生化的东西。
: 那个更好点? Bio-Rad还是invitrogen?
: Many thanks!!!
|
p**i
发帖数: 3525 | 15 en
to
【在 s******y 的大作中提到】
: In vitrogen is better, but their gel may not fit your cassette.
: If your running assembly was ordered from Bio-rad, then you should stick to
: Bio-rad's gel.
|
b******n
发帖数: 4225 | 16 要用comb，我是说用tape将几个梳齿连起来
如果还不明白我说的你就直接买好了
这张图里面有你想要的那种comb，仔细看
http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?ts=1&cmd=BRCatgProductDetail&vertical=LSR&catID=5cf78e19-7ed5-4373-a988-3e62456a488e
如果你们实验室有bio-rad的mini灌胶系统，应该也有这种comb的
翻一翻以前的盒子
【在 p**i 的大作中提到】
: 我上次没用comb，直接上样，效果很不好。
|
p**i
发帖数: 3525 | 17 谢谢，不用comb为何不行呢?
嘿，好象真找到一个。还是不明白用不用comb会有什么大的不同。
【在 b******n 的大作中提到】
: 要用comb，我是说用tape将几个梳齿连起来
: 如果还不明白我说的你就直接买好了
: 这张图里面有你想要的那种comb，仔细看
: http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?ts=1&cmd=BRCatgProductDetail&vertical=LSR&catID=5cf78e19-7ed5-4373-a988-3e62456a488e
: 如果你们实验室有bio-rad的mini灌胶系统，应该也有这种comb的
: 翻一翻以前的盒子
|
b******n
发帖数: 4225 | 18 当然不用comb理论上也是可行的
有高手说曾经雕刻信用卡做comb
但是我相信那是不得已而为之
【在 p**i 的大作中提到】
: 谢谢，不用comb为何不行呢?
: 嘿，好象真找到一个。还是不明白用不用comb会有什么大的不同。
|
a***a
发帖数: 40617 | 19 现在用的都是第三代了吧，以前最早的都是自己用塑料板刻的
【在 b******n 的大作中提到】
: 当然不用comb理论上也是可行的
: 有高手说曾经雕刻信用卡做comb
: 但是我相信那是不得已而为之
|
z*****k
发帖数: 86 | 20 我们以前也是胶回收作抗体
就不用梳子
倒一层浓缩胶上面直接点样
【在 p**i 的大作中提到】
: 准备胶回收做抗体，动不动就over-load，可是做抗体需要好几 mg。。。
: 不知该怎么办?
|
|
|
p**i
发帖数: 3525 | 21 但是我试的效果非常不好，跑得乱七八糟的。只上几个ul的时候很漂亮的。不知是什么
原因。
你这样做出来的 (胶回收) 抗体效果比之in solution如何?
【在 z*****k 的大作中提到】
: 我们以前也是胶回收作抗体
: 就不用梳子
: 倒一层浓缩胶上面直接点样
|
s******y
发帖数: 28562 | 22 你在seperation gel 之上有stacking gel 么？
如果没有的话当然会跑的乱七八糟了
【在 p**i 的大作中提到】
: 但是我试的效果非常不好，跑得乱七八糟的。只上几个ul的时候很漂亮的。不知是什么
: 原因。
: 你这样做出来的 (胶回收) 抗体效果比之in solution如何?
|
p**i
发帖数: 3525 | 23 当然有啊
【在 s******y 的大作中提到】
: 你在seperation gel 之上有stacking gel 么？
: 如果没有的话当然会跑的乱七八糟了
|
T**********t
发帖数: 1604 | 24 那就是因为overload了。
制备的话，要用大胶，厚胶，bio-rad的mini gel是用来分析样品用的，用于制备的话
，是鸡刀杀牛。
你看看实验室有没有跑大胶的电泳槽。一般如果实验室以前有做过核酸合成和纯化的话
，都会有大的电泳槽的。
【在 p**i 的大作中提到】
: 但是我试的效果非常不好，跑得乱七八糟的。只上几个ul的时候很漂亮的。不知是什么
: 原因。
: 你这样做出来的 (胶回收) 抗体效果比之in solution如何?
|
s******s
发帖数: 13035 | 25 biorad小胶15孔1mm梳子, 大概每孔50ug. 如果孔都连上, 大概能上1mg.
如果你蛋白只有30%, 又要个2mg打抗体的话, 只能去找大胶. 一般做分子
的有点年头的实验室都有, 只是藏起来不用而已.
【在 p**i 的大作中提到】
: 准备胶回收做抗体，动不动就over-load，可是做抗体需要好几 mg。。。
: 不知该怎么办?
|
