w******e
发帖数: 1187 | 1 希望能量化检测到10e4/ml以下DNA。现在想到的只有RT PCR。如果不需要有sequence
specificity的话，还有什么其他办法吗？
多谢！ |
a***e
发帖数: 1010 | 2 add linker first, then RT-PCR |
w******e
发帖数: 1187 | 3 要测10e4以下的浓度，对negative要求太高了。。。
【在 a***e 的大作中提到】
: add linker first, then RT-PCR
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a***e
发帖数: 1010 | 4 add glycogen blue, precipitate |
w******e
发帖数: 1187 | 5 这个办法倒是可以试试。recovery rate不会因为DNA量少降低太多吧？
从没做过这么低的ethanol precipitation呵呵
多谢！
【在 a***e 的大作中提到】
: add glycogen blue, precipitate
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X***n
发帖数: 366 | 6 10e4/ml是什么意思？看不懂怎么帮你。
Invitrogen 的Qubit的 HS assay可不可以？
【在 w******e 的大作中提到】
: 希望能量化检测到10e4/ml以下DNA。现在想到的只有RT PCR。如果不需要有sequence
: specificity的话，还有什么其他办法吗？
: 多谢！
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c*********r
发帖数: 1312 | |
c*********r
发帖数: 1312 | 8 "In our experience, a typical histone modification ChIP performed on 500,000
cells yields ~1 ng of DNA. Thus, ChIP-seq analysis of 50,000 cells would
require the interrogation of ~100 pg of DNA."
Alon Goren et al. Chromatin profiling by directly sequencing small
quantities of immunoprecipitated DNA. Nature Methods. 2009. |
w******e
发帖数: 1187 | 9 就是10e4 copies of DNA/ml，1ml左右的volume。
多谢提供信息！
【在 X***n 的大作中提到】
: 10e4/ml是什么意思？看不懂怎么帮你。
: Invitrogen 的Qubit的 HS assay可不可以？
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w******e
发帖数: 1187 | 10 看了一下min concentration 10pg/ul太高了（我的sample不到10pg/ml呢-_-）。
thx anyway~
【在 X***n 的大作中提到】
: 10e4/ml是什么意思？看不懂怎么帮你。
: Invitrogen 的Qubit的 HS assay可不可以？
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s******y
发帖数: 28562 | 11 Depends on how small the amount is,
you can use either organic solvent HPLC or Mass Spec
I don't understand why you want to use RT-PCR? Can RT enzyme use DNA as
substrate?
Why don't you use a regular q-PCR?
【在 w******e 的大作中提到】
: 希望能量化检测到10e4/ml以下DNA。现在想到的只有RT PCR。如果不需要有sequence
: specificity的话，还有什么其他办法吗？
: 多谢！
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w******e
发帖数: 1187 | 12 by RT I mean real time-_- so q-PCR is a better word I guess?
【在 s******y 的大作中提到】
: Depends on how small the amount is,
: you can use either organic solvent HPLC or Mass Spec
: I don't understand why you want to use RT-PCR? Can RT enzyme use DNA as
: substrate?
: Why don't you use a regular q-PCR?
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s******y
发帖数: 28562 | 13 囧
【在 w******e 的大作中提到】
: by RT I mean real time-_- so q-PCR is a better word I guess?
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