从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（十九） - Biology版

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Biology版 - 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（十九）

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r****o
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本文献给YL
（十九）MDA-BF-1的启示
凝集素层析实际操作起来很简单，跟过简单的Ni柱子一样。拿到洗脱
的蛋白之后，我们就着手开始测活，分析纯化的效率和倍数。胰岛素受体
不是酶，所以测活是利用胰岛素与受体的特异结合。具体的测活步骤非常
简单，就是把I-125标记的胰岛素和纯化的组分混合然后孵育一段时间。然
后加PEG（Poly ethylene Glycol ) 6000沉淀胰岛素受体，而游离的胰岛
素不会被沉淀下来。说到PEG沉淀，Dr.Lin讲了她自己闹的一个笑话。是
这样的，她实验室发现了一个蛋白质因子 MDA-BF-1。这个因子对Osteoblast
（成骨细胞）的增长有促进作用。然后呢，她就想把这个因子的受体给找
出来。首先一步呢，就是得有一个测活方法。所以她就比照insulin
receptor的测活方法而设计了一个方法, 其中连PEG沉淀都是一样的。
结果呢，这个测活试验完全失败了。问题出在PEG沉淀这一步。PEG作
为一种多元醇，可以想像为一种“分子海绵”，可以吸附水分子。这样样
品中蛋白的有效浓度实际变大了好多，容易出现聚集然后沉淀的现象

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