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r****o
发帖数: 105
1
本文献给YL
(十九)MDA-BF-1的启示
凝集素层析实际操作起来很简单,跟过简单的Ni柱子一样。拿到洗脱
的蛋白之后,我们就着手开始测活,分析纯化的效率和倍数。胰岛素受体
不是酶,所以测活是利用胰岛素与受体的特异结合。具体的测活步骤非常
简单,就是把I-125标记的胰岛素和纯化的组分混合然后孵育一段时间。然
后加PEG(Poly ethylene Glycol ) 6000沉淀胰岛素受体,而游离的胰岛
素不会被沉淀下来。说到PEG沉淀,Dr.Lin讲了她自己闹的一个笑话。是
这样的,她实验室发现了一个蛋白质因子 MDA-BF-1。这个因子对Osteoblast
(成骨细胞)的增长有促进作用。然后呢,她就想把这个因子的受体给找
出来。首先一步呢,就是得有一个测活方法。所以她就比照insulin
receptor的测活方法而设计了一个方法, 其中连PEG沉淀都是一样的。
结果呢,这个测活试验完全失败了。问题出在PEG沉淀这一步。PEG作
为一种多元醇,可以想像为一种“分子海绵”,可以吸附水分子。这样样
品中蛋白的有效浓度实际变大了好多,容易出现聚集然后沉淀的现象
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