c******r
发帖数: 3778 | 1 你说的对。Western因为加入了protein size的信息，而且能看见条带，可以用来定性
。但是不能用来定量。
ELISA依赖antibody的特异性，特别是对于最后的表达全部是数字，大大增加造假可能
。但是ELISA的antibody如果通过competitive证明特异性，是可以准确定量的。因此
ELISA可以精确定量。而western不论怎么做都是semi－quantitative的。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 2 对于动物测试，这种inconsistency 并不罕见，原因可能有很多种。
比方说，有可能那个miRNA在完整的大米里或者total RNA里和其他的RNA互相结合后成
为比较稳定的构型而能够减少被胃酸或者肠道的核酸酶破坏的可能性，所以灌进纯化的
miRNA效果反而不如不纯化的好。还有其他各种可能性，比方说也许那个miRNA的转运过
膜需要其他协同分子的作用。要解决这些可能性，也许需要一篇新的文章单独来研究这
个问题。
total |
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c******r
发帖数: 3778 | 3 是啊，他们研究的是miRNA，转基因转的事protein。都是帮民科乱搅和 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 4 ELISA和western 本质都是一样的
western的条带显色和ELISA的显色原理也基本类似
2个都不是精确定量的好办法，都严重收到检测（显色）方式的线性区间影响
说ELISA 比western精确前提太多， 第一要抗体特异性非常好，第二要有standard
curve， 用target protein来做梯度曲线； 而这个standard curve western blot也是
可以做的，只不过受限制于常规胶的孔数限制一般人也不错这一步
如果要钻牛角尖比较， western 比elisa可以做到更精确，而且可以区分
oligomerization以及non－specific binding |
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s******y
发帖数: 28562 | 5 我被你说得有点糊涂了，我觉得ELISA的最后的数值无非也就是用荧光或者可见光来测
量，在这个方面和western 的定量方法好像是一样的呀，那么它们两者有什么区别啊？
如果说ELISA能够多次重复，那么western也可以多次重复啊。抱歉问这么白痴的问题，
因为我只用过一两次ELISA，算不上行家。 |
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C**S
发帖数: 522 | 6 看班上讨论这么多，没有几个人是质疑其造假的，大多数是怀疑他们把假阳性结果发表
了。 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 7 恩，2个原理一样， 区别在于ELISA 可以同时做多个technical replicates＋
biological replicates， western 受胶限制，不能做那么多而已， 这个方面elisa
更精确一点
但是考虑到抗体的特异性，以及target protein可能的oligomerization，或者不同的
phosphorylation之类的情况，western 这个方面更好一点 |
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c******r
发帖数: 3778 | 9 well，western无法定量主要是最后的胶片很快就saturate了。导致通过film无法定量
。靠肉眼，即使扫描film也是无法准确定量的。
当然，现在有很多仪器，可以直接从membrane读signal，可以反复曝光，保证不过爆从
而定量。western也是越来越接近定量实验了。
但是即使如此，ELISA定量还是要比Western方便很多。
1。ELISA可以多样品重复，导致定量减少standard deviation，增加准确性。
2。ELISA可以跑标准曲线，可以保证samples在适当的线性范围里面，从而增加定量的
可信度。
3。Western的重复是多次重复，本身就引入额外的误差。而ELISA可以一次跑很多板子
，减少了多次重复的误差。
ELISA的主要问题就是ls你说的，非常依赖antibody的质量。但是ELISA的antibody质量
是可以检验的。对于一个非常颠覆性的实验，检测一下抗体质量，然后用ELISA定量，
还是值得的。毕竟，ELISA可以用来大批量检测样品。可以做成high throughput的模式
，广泛进行人体检测。这个本身就是western无法比... 阅读全帖 |
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c******r
发帖数: 3778 | 10 另外就是antibody很多时候不available。毕竟，Western是denature的，而ELISA多数
都没有专门的antigen denature步骤。所以有时候western antibody做不了ELISA。那
就没办法。即使semi－quantitative也比没有强啊。 |
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c******r
发帖数: 3778 | 12 跟转基因有屁关系？
你说说吃bt跟miRNA的关系？ |
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h*******o
发帖数: 4884 | 13 western也可以做native gel
这个方面 ELISA 没有什么优势
ELISA最大的优势还是在于孔多， 可以重复多，而且更容易加standard curve
这样1是可以高通量， 而且不同时间不同次数做出来的data更容易combine（还是因为
能够更容易放standard curve 进去）
至于显色方面，现在的萤光显色western的线性范围和ELISA没有什么区别了
ELISA的假阳性是比较高的， 所以如果不是对抗体有十足的把握，我宁愿做western，
出了问题也容易分析
这次去开SFN，倒是看到了一个gel free的western system， 类似于biorad的experion
的RNA系统，挺有意思，如果能把体系sample数量做大，倒是一个很好的选择，就是死
贵，lol |
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s******y
发帖数: 28562 | 14 你说的那个gel free的western system是指SIMON吧？ 死贵死贵，而且目前的model是
用HRP化学荧光来读数，所以一次只能用一个抗体，没有办法直接在同一个样品上跑内
参看loading,也没有办法同时看不同的蛋白。如果他们搞成多色的系统，我还可以勉强
考虑买一个。现在的状况我是根本不考虑。
experion |
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c******r
发帖数: 3778 | 15
这个不是优势劣势的问题，就是antibody availability的问题。有时候只有这个，另
外一个不work，那也没办法。
技术上是，但是Western荧光显色的设备不是每个lab都有，绝大多数publish的paper还
是一条黑线不是。如果有western的荧光设备，那在这个方面应该是跟ELISA区别不大了。
所以啊，如果是新的antibody需要做实验验证抗体的特异性。否则不可能用来做ELISA
，没法发表。
experion
其实我觉得western也不是不可以做high throughput，比如样品就不要弄条带了，直接
做个点儿就可以了。大点儿的胶跑个100个sample，那就跟ELISA接近了。要是搞成
capillary的就更带劲了，哈哈 |
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c******r
发帖数: 3778 | 16 二抗可以多色吧？
另外western还是太费功夫了。ELISA可以全自动，标准化，这个对high throughput的
screening还是非常有用的。
western有什么系统可以跑胶和transfer一步完成的不？那就省事多多了。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 17 这个已经有公司在搞了，因为我自己的实验室经常用WB, ProteinSimple 就曾经向我推
销过他们的SIMON。但是我最后还是买了一个特别简单的自动加buffer 的机器。主要是
他们的技术还不成熟，能做的事情太有限了。而且并不是严格的capillary而是柱子。 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 18 western blot有个类似的叫 dot blot， 其实就跟elisa 差不多，都是一团混的加进去
在我做的领域里面不少大牛实验室还在用这个
了。
ELISA |
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g*****n
发帖数: 250 | 19 "假阳性"是什么意思？发表的结果不是来自一次实验。对照组里没有，实验组里有，那
就可能是“真阳性”。重复了n次，都是这样，而且统计出显著差异，那怎么可能是假
阳性？科研基本的原则。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 20 biorad还是什么不是有个15分钟transfer的系统吗 |
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c******r
发帖数: 3778 | 21 恩，有个7分钟transfer系统。很好用。但是毕竟不是自动化的。得手动把胶拿出来，
装好，完了以后还得收拾。
要是能跑胶，转膜一步完成那多好。不过一时我也没想出来怎么实现这东西。 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 22 坑爹的， 7分钟transfer那个
不好用， 我们实验室有一个， transfer完了明显不均一， 下面的转的干干净净的，
上面的胶染出来那叫一个蓝啊
而且不容易赶气泡
还有那个15分钟跑胶的配套系统......
现在搞得是进退两难， 用了不放心，不用不甘心 |
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D*a
发帖数: 6830 | 25 大分子跟小分子本来也不能一样条件转吧。
我是听一个人说他们实验室买了这个挺好用的 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 27 差距太大了
《30kd的干干净净， 70kd的就一堆转不过来， 和普通的wet tank比差距明显，时间倒
是非常短 |
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m****n
发帖数: 1066 | 30 We had one and it's very expensive. |
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D*a
发帖数: 6830 | 33 如果真是很难做的技术，发不了protocol杂志，可以发JOVE啊
最近在学新东西，他们上面的东西还是挺不错的啊。 |
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k*****n
发帖数: 323 | 34 jove很坑爹。要交钱不说，要求还死多。我现在的实验室在投这玩意，老板都被折腾得
没脾气了。 |
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n**8
发帖数: 221 | 35 这是CR的原文摘要
Our previous studies have demonstrated that stable microRNAs (miRNAs) in
mammalian serum and plasma are actively secreted from tissues and cells and
can serve as a novel class of biomarkers for diseases, and act as signaling
molecules in intercellular communication. Here, we report the surprising
finding that exogenous plant miRNAs are present in the sera and tissues of
various animals and that these exogenous plant miRNAs are primarily acquired
orally, through food intake. MIR168a is ... 阅读全帖 |
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n**8
发帖数: 221 | 36 关于功能性的是这一句话:
Functional studies in vitro and in vivo demonstrated that MIR168a could
bind to the human/mouse low-density lipoprotein receptor adapter protein 1 (
LDLRAP1) mRNA, inhibit LDLRAP1 expression in liver, and consequently
decrease LDL removal from mouse plasma.
interpretation是 1.）植物miR168a能进动物。
2.）miR-168a（动物没有的）可以调控 动物的LDLRAP1表达。
我的理解，这篇文章的“indication”是 吃大米会影响LDLRAP1表达，吃米摄入的
miRNA“有可能” 参与了调控，尽管其contribution可能很小很小。 这也算是一个新
的concept吧。跟转基因安全好像没什么很强关联。 |
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g***a
发帖数: 337 | 38 你是说Kendal Hirschi实验室已经能重复出你们的结果了吗？我特指那个植物miRNA的
确能regulate人类mRNA的结果。我还是很信任Hirschi的。。。 |
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M*P
发帖数: 6456 | 40 没准孟山都的pipeline里有转microRNA的产品。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8 |
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I*M
发帖数: 937 | 41 对于1，这篇就是他们的reply吧，只是把英文翻译成中文了。。。
对于2，3，不明觉厉中。。。 |
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I*M
发帖数: 937 | 42 生物实验嘛，是怎么一回事儿，大家还不都心里清楚。。。 |
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s*****g
发帖数: 3693 | 43 那些新闻通稿难道是记者自己看paper找上门来的? |
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h**********a
发帖数: 72 | 44 嚷着你吃屎之前你没见过那个家伙先骂人的吗？你故意选择性失明？
在动物体内找到活性植物miRNA与亚洲人吃大米习惯是两码事 |
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h**********a
发帖数: 72 | 45 罗永浩说的好，现在的中国不存在清者自清，一个人再清白，别人天天向你身上泼粪，
总会有搞臭你的一天
如果有人天天骂你污蔑你，你会无动于衷？ |
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h**********a
发帖数: 72 | 46 你转基因吃多了吧，NBT有提民科？找出来让大家瞧瞧 |
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C**S
发帖数: 522 | 47 当年他的文章引起轰动，是因为他声称在动物体内能检测到植物miRNA，并且有功能。
这次回应里没再提什么功能的事。自己也觉得夸大其词了吧。 |
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h**********a
发帖数: 72 | 48 是吗？敢问可不可以找出人家“大搞新闻走媒体”的例子来？
貌似只要是对孟山都不利的都会变成“有很大争议”
争议最大的其实就是孟山都，那为什么孟山都可以有争议之前会走媒体？会大搞新闻？为
什么不等到没有争议的时候再卖转基因？ |
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x******g
发帖数: 289 | 49 你写过Reply？
Reply有篇幅限制，而且要对对方的问题一针见血应对，没那么多闲工夫旁征博引。
你通篇看看这篇NBT的Reply，多一句嫌多，少一句嫌少，步步为营，稳扎稳打。文风行
云流水。 |
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