我是张辰宇的学生，说说最近的事 - Biology版

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Biology版 - 我是张辰宇的学生，说说最近的事

相关主题
● 反对中医药的和支持转基因的悲剧了：植物microRNA可以通过食物摄取方式进入人体,通过调控人体内靶基因表达方式影响生理功能	● miRNA
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● Plant RNAs Found in Mammals The-Scientists Highlights	● circulating microRNA检测cancer
● It's indeed published in CR: miRNA168a found in mammals	● 犹记当年NBT的另一场互打脸文~好玩
● 南京大学重大发现揭露了转基因惊人秘密 (转载)	● [合集] miRNA target 一个很疑惑的问题
● 【打人，还是找抽？】：孟山都 vs. 张辰宇(ZZ)	● 推荐预测的microRNA target的网站软件
● paper thanks	● 希望大家能帮我一起分析一下这两个offer，感激
● “诺贝尔医学和生理学奖评审委员会”请张辰宇做报告	● 请教一下研究microRNA相关的一些问题，多谢

相关话题的讨论汇总
话题: mirna话题: elisa话题: western话题: 文章话题: 实验室

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(共1页)

v********9
发帖数: 129

代朋友发帖，全文如下：
我叫陈熹，是张辰宇的学生。昨天有朋友告诉我，说你老板火了，在MITBBS被人“打脸
”了，让我去看一下。我心想，又是NBT这事，挺无语的，不过去看看国外的中国留学
生怎么看这个事情也好。看完我就郁闷了，我们课题组的文章怎么就是“垃圾”了，张
辰宇怎么就是“joker”了？其实以往对于这些事情我都是缄默的，搞科研的数据说话
，所以一直以来也在坚持做着这个领域，希望做出更多的东西来，弄明白一些问题，但
是心血被贬得一文不值，不吐不快。你说外洗地也好，说我是打手也好，我无所谓，我
就是想说说心里真实的想法。
1. 首先，我想澄清，我们的工作不是“垃圾”，张辰宇也不是“joker”。我们实验室
从2004年开始做miRNA，当时规模很小，就我一个人做，平台也刚开始建立，进展较慢
。但经过三年时间，miRNA的检测技术和功能研究我们基本都能做了，一个机缘巧合，
我们发现血清中普遍含有miRNA，从此我们从细胞内miRNA跳到了细胞外miRNA，并确立
了以研究细胞外miRNA为实验室的主要方向，期间的主要发现是：发现血清中有循环
miRNA；发现经由microvesicle/exosome分泌的miRNA是有功能的，能起到细胞间通讯交
流的作用；发现回流到细胞核的miRNA可以调控pri-miRNA；发现线粒体有miRNA；最后
就是最近的，发现哺乳动物体内有植物miRNA。从2008开始，我们陆续发表了四五十篇
关于miRNA的文章，按Google Scholar计算有14篇单篇引用超过50，1篇超过1000（见文
末）。列出这些，是想说明我们的东西也是一步步做出来的，除了最后一个发现，其它
的都被领域内证明并接受，包括Medicinal research reviews、Trends in cell
biology、Trends in biological science都邀请我们撰写综述。我想说这些东西怎么
就是“垃圾”了，张辰宇怎么就是“joker”了？OK有人会说我们没有CNS，我们也不是
不想发，CNS都投过，即便审稿人要求的都做了，还是被拒。国内发CNS本来就难，做创
新就更难，miRNA领域的大佬我们一个都不认识，没人支持我们，我们也就是坚持做着
而已。另外，做热门领域的压力不做不知道的，比如2008年初我们就作出循环miRNA的
文章了，投Nature的过程中，血浆里有循环miRNA的文章在PNAS上发了，所以马上转
Cell Res；比如miRNA调控miRNA的文章，Science也审了，但根据意见，估计半年多才
能完成，当时感觉就是不能等了，所以马上换杂志发了，后来果然没多久Nature上出了
一篇。做这种热门的东西的压迫感，我是深有体会的，就是时间不等人，你在CNS折腾
的过程中，没准别人就把你踢出去了，所以理想很丰满，现实很骨感。
2. 我们的研究中，唯一有争议的就是哺乳动物体内有植物miRNA的研究，就这个问题我
想好好说说。这个发现很颠覆，引起巨大争议也不奇怪，我们现在有一大部分工作是继
续在这个方面深入的做，搞清楚很多未知的关键问题。有网友提出我们这个工作别人跟
进缓慢，重复的工作出不来，negative的结果却有几篇。我觉得这个问题是个好问题，
科学的问题就科学的讨论，数据说话，我对MITBBS一些网友就事论事的态度是很赞赏的
，比如有网友问为什么体外转染miRNA上升上万倍，效果却和体内上升几倍相当的问题
，请看最近的文章（Thomson et al., Plos One 2013）就清楚了，这些我们文章中看
似矛盾的东西，其实是我们发文章时认知水平不够，无法清晰说明造成的，这就需要做
下去，很多困惑就能明了了。但对于那些跳上来就把我们贬得一文不值的网友的态度就
挺无语的，我感受到的除了“歧视”，别无他。回到这个问题的讨论，我觉得难重复是
正常的，本来植物miRNA在动物体内的检测就是很困难的，我们也是经历了两年的
trouble shooting，才获得了一些心得体会，才能总结出一些实验方法，使得实验做得
稍微顺利一些。全世界像我们实验室这样专门做细胞外miRNA的实验室应该不多，像我
们这样做过那么多次细胞外miRNA测量的也不多，我们也是最近才渐渐摸清了一些门道
，这中间的很多问题（比如量低等）都是非常困扰人的，原来不做这个的实验室或经验
不足的实验室，进入这个领域初期肯定是negative结果，如果不能坚持，浅尝辄止，那
就很难做下去。我们在贝勒医学院有一位合作者，对我们这个东西很感兴趣，但是就是
做不出来，我们今年派了一个博后去他们实验室做了一个月，和他们的博后一起
trouble shooting，在他们实验室做出了一些positive的数据。我想说这才是做事的态
度，在网上嚷嚷，把我们一棍子打死，这是做科研的态度吗？此外，大家若是能心平气
和一些，给我们一些时间，很多后续的东西就会出来。这两年我们在这个方向上做了不
少工作，有两篇文章已经完成要开始投稿了，都是证明植物miRNA进入人体有功能的，
后续还有一些，都是能说明一些问题的。其实在我们实验室，检测动物体内的植物
miRNA很多学生都做得出来，不同小组的不同方向也交叉证明了，多种技术如RT-PCR、
sequencing、Northern等也都能测到，我们一直以来就是相信一个理，坚持做，用数据
说话。
3. 我为什么反感NBT上孟山都这篇“打脸”文。这篇Reply是我写的初稿。我大概是4月
份收到这篇文章的第一版，当时读完的感觉就是哭笑不得、懒得吐槽。当时NBT的编辑
说这篇文章是potential accept，我心想文章硬伤那么多，随便挑几条回复一下也就完
了，这要是也能接收就奇了怪了。当时提出的主要问题是：（1）植物miRNA测序方法有
问题。使用米直接测序，植物miRNA仅能测到一千多个reads每一百万个reads。做过植
物miRNA测序的都知道，植物miRNA至少能测到十万个以上的reads吧，至少我们每次做
都是这样，并且单一个MIR156就不止这个读数了呀。连纯植物中miRNA都测不好，指望
其能测好动物体内的植物miRNA，测到就奇怪了！（2）miRNA的PCR就放个相对定量的
bar图在那，完全无法评价。循环miRNA的文章我也审过很多了，最烦的就是放个bar图
在那，关于miRNA检测的raw CT data、背景值、检测的可信范围等等的信息完全没有，
这你让人怎么评价数据的好坏，何况后面的统计分析还是完全基于这个变化值的，这种
文章看到就头大。所以我当时就提出，要把PCR数据完整的呈现，就像霍普金斯大学“
打我们脸”的文章一样，把原始数据放出来看，那么才能从中分析出东西。另外关于
PCR的内参，更是无力吐槽，这内参跟没有一样，我不禁怀疑作者是做这个领域的吗？
（3）其它还有一些明摆着的问题，比如说检测LDLRAP1用的是Elisa，既然是重复我们
的工作，那检测LDLRAP1为啥不能用和我们一样的技术Western？他们给出的理由竟然是
Western技术不精确，Elisa比Western更准确，这让我们这些搞分子生物学天天做
Western的情何以堪啊！这些问题我当时都懒得写了，心想NBT这么高级别的杂志，不会
收这么多问题的文章吧，就没引起重视。但事情的发展完全出乎意料！9月份，收到NBT
的信，说原作者根据我们的意见修改了文章，并且接收了，你们再改改Reply同期发表
吧。我和我的小伙伴都惊呆了，搞没搞错！OK，兵来将挡水来土掩，看看他们补了什么
吧！我心想测序至少重做了吧，看完再一次震惊了，我们提的问题全部被无视了，敢情
我辛辛苦苦写的Reply是个屁啊！不过作者确实也补充了一些实验的，但是就是这个补
充实验，居然更有问题。比如，为了说明他们的测序是可以从动物体内检测到植物
miRNA，他们直接往小鼠肝脏RNA中加入了1%的米的RNA，然后用此混合样品测序。先且
不说植物RNA远远达不到肝总RNA的1%，即使这次测序仍不能有效检测植物miRNA，而最
关键的混合样品中植物miRNA的含量，又含含糊糊的用相对量展示，数据放出来有什么
见不得人的吗，如何让我信服？我恨相对值！不过，故事发展到此也算正常，科研界一
来一回的文章也挺多的，很正常，这样才有助于澄清一些问题，其实也是有助于整个领
域的。至此我对孟山都没什么意见，最多就是觉得他们实验技术不够扎实，仅此而已。
但是11月文章出来，同期配发的Editorial彻底把我恶心到了！NBT你这干的什么事，从
头至尾你也没说要发这么个东西，OK这是你的自由我管不着，但是在一个科学问题没搞
清楚之前就站队，打压另一方，这算什么？还有我想问Nature和那位自称审我们文章的
cDNA网友，当时我们投文章时你们用很严的标准审我们，我们认了，毕竟是top
journal；但这一篇问题多多的文章，你们怎么就让过了，既然能审top journal的文章
说明对这个领域是懂行的啊，那孟山都文章的漏洞看不出来吗？搞的这两套标准让我无
论如何不能信服！另外若诚如cDNA网友所述您是NBT审稿人，您居然使用影响力使NBT将
倾向于不发表的文章发表了，原因是文章对转基因论战有意义（原文是“因为是
Negative result, editor对发表不是很积极。我再三强调了此打脸文对转基因论战的
意义后才接受的”），这种做法也太不符合审稿人的专业了。我们和孟山都的文章都不
是说转基因的事，您作为审稿人应该就文章论事，您却引申了文章的意义，还以此影响
编辑部，不得不说审稿过程是带着倾向性和有色眼镜的，有失公允。
4. 我为什么不反感RNA biology上霍普金斯大学的“打脸”文。其实对“打脸”这个词
我很反感，打脸意味着什么？别人做的是对的，我们做的是错的，所以被狠狠打脸了。
在一个科学问题没搞清楚之前，这种预先判断的高姿态本不是我们科研人员该有的，不
过这个词够生动，我继续沿用。这篇文章其实是我审的，但是我仍然支持它发表，为什
么？因为作者是本着科研的态度，从头到尾一五一十的做着研究和展示数据，所以虽然
是对我们不利的结果，我毫无理由拒绝其发表。但是数据真实不意味着就是对的，做不
出预期的结果也不意味着我们不对。我们觉得霍普金斯大学这篇文章很好，思路很正确
，于是我们就重复了（不过国内人比猴子便宜，所以我们是自己喝的果汁抽的血做的实
验呵呵），结果却大相径庭，数据不仅支撑我们的理论，还有一些独特的新发现。我们
能做出positive的结果极有可能和我们的一些经验和窍门有关。很抱歉我暂时只能说个
大概，文章已成文正要投稿，也许不久就能刊出，大家再来评判。
MITBBS上一些网友喊打喊杀，说我们是学术骗子，呼吁国内终止对我们的资助，大有除
我们而后快之势，我不知道你们的依据是什么？我一介土鳖，从未出过国，英语极差，
一看到老外就哑巴，对国外的留学生是很崇敬的，要学习的很多。但这次上MITBBS上一
看，不免失望，中国人的陋习体现无遗，甚至比国内更甚。请你们不要想当然，在网上
口诛笔伐，我们的钱没有用在吃喝旅游之上，全部用在实验上都未必够；实验室至今没
申请过奖；张辰宇也不是天天外面跑的人，相反是一个喜欢呆实验室的人。最后说一句
，国内上MITBBS还要翻墙，我擦！
南京大学陈熹
x****[email protected]
附表：2008年以来张辰宇课题组单篇引用超过50的论文
1. Characterization of microRNAs in serum: a novel class of biomarkers for
diagnosis of cancer and other diseases. Cell Res. 引用：1230
2. Secreted monocytic miR-150 enhances targeted endothelial cell migration.
Mol Cell. 引用：242
3. A five-microRNA signature identified from genome-wide serum microRNA
expression profiling serves as a fingerprint for gastric cancer diagnosis.
Eur J Cancer. 引用：131
4. Serum microRNA profiles serve as novel biomarkers for HBV infection and
diagnosis of HBV-positive hepatocarcinoma. Cancer Res. 引用：129
5. Exogenous plant MIR168a specifically targets mammalian LDLRAP1: evidence
of cross-kingdom regulation by microRNA. Cell Res. 引用：150
6. Expression profile of microRNAs in serum: a fingerprint for esophageal
squamous cell carcinoma. Clin Chem. 引用：98
7. Circulating MicroRNAs: a novel class of biomarkers to diagnose and
monitor human cancers. Medicinal research reviews. 引用：111
8. Identification and characterization of novel amphioxus microRNAs by
Solexa sequencing. Genome Biol. 引用：69
9. Identification of ten serum microRNAs from a genome-wide serum microRNA
expression profile as novel noninvasive biomarkers for nonsmall cell lung
cancer diagnosis. Int J Cancer. 引用：72
10. Differential expression of microRNAs in mouse liver under aberrant
energy metabolic status. J Lipid Res. 引用：60
11. Serum microRNA expression profile as a biomarker in the diagnosis and
prognosis of pancreatic cancer. Clin Chem. 引用：59
12. Secreted microRNAs: a new form of intercellular communication. Trends in
cell biology. 引用：62
13. Serum MicroRNA signatures identified in a genome-wide serum MicroRNA
expression profiling predict survival of non–small-cell lung cancer. J Clin
Oncol. 引用：330
14. Role of miR-143 targeting KRAS in colorectal tumorigenesis. 引用：208

n**********u
发帖数: 77

美国大地现在都还是沉沉入睡的时刻，悠闲的中国周日下午也很少人有机会翻墙看看有
关学术争议的回复。没想到我在香港尽然能够第一个回复。不清楚这个方面的研究，
上下文也不清楚，但是楼主对待科学的态度还是很认真的，至少从国内申请奖项的态度
上楼主的实验室还是保守的。这种前沿问题还没有完全明晰之前，还是保守低调一些为
好，数据和实践是最好的评审，楼主一直用这样一个态度去做会成功的。我只有做过
qpcr，针对gDNA的，raw CT data和背景值这些放上去有用吗，单纯的数据摆上去我想
也很少有人关心吧，我也可能没有这方面的经验而看不懂（对照的就是背景值吗？
under detection 不就行了）。检测的可信范围这个我想实验组的量比内参的高的话，
应该就可行了吧。

M********r
发帖数: 142

很有道理啊，说得很诚恳很有逻辑很有论据。
不管你信不信，我反正信了。
版上不少人不是针对他们的文章、数据说话，而是一上来就说张一贯不行、一看就不靠
谱，直接搞人身攻击，让人反感。

f******g
发帖数: 1003

不要被论坛上一些流言所左右，在网络混了几年了吧，应该了解网络的一些特性，1%的
人不同意，在网络上看就相当于10%不同意，10%不同意，在网络上看就好像所有人都对
你有意见。
心态平和些，你重要的是和NBT较量，让你的数据在别人那里能够重复出来。

l****m
发帖数: 751

有理有据有节。
赞一个！！！

d**j
发帖数: 240

告诉你同学，不要在意这个版上某些人，尤其是一些名ID。
他们准是以为自己、自己的小团体，自己的偶像（即压制国内生命科学的新学霸）是对
的。

【在 v********9 的大作中提到】

: 代朋友发帖，全文如下：
: 我叫陈熹，是张辰宇的学生。昨天有朋友告诉我，说你老板火了，在MITBBS被人“打脸
: ”了，让我去看一下。我心想，又是NBT这事，挺无语的，不过去看看国外的中国留学
: 生怎么看这个事情也好。看完我就郁闷了，我们课题组的文章怎么就是“垃圾”了，张
: 辰宇怎么就是“joker”了？其实以往对于这些事情我都是缄默的，搞科研的数据说话
: ，所以一直以来也在坚持做着这个领域，希望做出更多的东西来，弄明白一些问题，但
: 是心血被贬得一文不值，不吐不快。你说外洗地也好，说我是打手也好，我无所谓，我
: 就是想说说心里真实的想法。
: 1. 首先，我想澄清，我们的工作不是“垃圾”，张辰宇也不是“joker”。我们实验室
: 从2004年开始做miRNA，当时规模很小，就我一个人做，平台也刚开始建立，进展较慢

d**j
发帖数: 240

对比一下以前这个版内比较热门的话题，这些的ID表现。
劝你同学不要和他们一般见识

l*******i
发帖数: 153

读完这个帖子，个人倾向于相信它，但是有一个问题：
作者通篇说她们有“特别”的经验，是在动物体内检测到植物miRNA的关键所在；你们
贝勒医学院的合作者在你们的博后帮助下，也得到了一些positive结果（是这个博后做
出来的，还是合作者做的？）。你们相关的文章也发了几篇，那么这个“特别”的经验
现在能否公开（比如以nature protocol的形式）？这样的话，别的实验室才能在与你
们相同的条件下，重复你们的实验。
现在我有一个怀疑--仅仅是一个没有恶意的怀疑--你们的结果如果主要基于你们的测植
物miRNA的“特别”的经验的话，有没有可能意味着这不是普遍的，甚至只是技术和实
验技巧造成的bias？当然，也有相反的可能，那就是你们发现了现有相关技术的缺陷，
并纠正了它，从而使得原来被忽略的东西现出“真身”来。不管怎么说，现在对你们最
重要的一点就是，让独立的第三方（非合作者），在与你们相同的技术条件下，重复你
们的实验。

【在 v********9 的大作中提到】

h**********a
发帖数: 72

顶，我看到的是科研人员的基本良知，这和版里的一些人渣孟山都的打手来说真是一个
天上，一个地下

d********0
发帖数: 534

我个人认为，作者所说的“特别”的经验非常有可能只是一些小细节问题，而不是发明
了什么新的方法或者对现有科技方法比如rt-pcr等做了大的修改等等
举几个例子：
1 有些蛋白容易被降解，我们实验室看别人发过的文章，重复反复去做，很难得到理想
效果，后来有位从外实验转来的phd，在提蛋白全程都穿着厚厚的衣服在cold room里
做（夏天也带着羽绒服，不然长时间在cold room冻坏了），得到的结果就相对比较清
晰，这些小技巧却能改变大问题
2 记得以前看过一个故事，是讲某篇cell上的大文章怎么出来的，这个实验室偶然开展
研究精液里如何限制艾滋病的传播的，当时那个实验室老板号召全体男生贡献精液，可
是大家撸了半天之后，做的实验结果很不理想，这使得全实验室的人都很灰心，至到两
年后，一位博士后在冰箱里看到了冻存的精液，又忍不住想试一下，他这次做的时候因
为冻存的缘故，所以实验之前特意多晃了几下，再做实验，结果就一下出来了，还被发
表在了cell上，这个故
事花絮很有趣，我当时看到的时候还专门去找过这篇论文，试想只是晃几下，结果差别
就如
此的大，这些的步骤怎么写到论文里？只有靠个人经验了
以上，其实只是艰苦的实验工作中的一些经验，一些小的细节，你要说把这些细节发到
nature protocol上，那只怕成笑话了，就是发在论文里的，只怕也只是一些通常的
protocol，像我，实验做的多了，经验总结的多了，对南大的这篇文章就深有体会啊

【在 l*******i 的大作中提到】

: 读完这个帖子，个人倾向于相信它，但是有一个问题：
: 作者通篇说她们有“特别”的经验，是在动物体内检测到植物miRNA的关键所在；你们
: 贝勒医学院的合作者在你们的博后帮助下，也得到了一些positive结果（是这个博后做
: 出来的，还是合作者做的？）。你们相关的文章也发了几篇，那么这个“特别”的经验
: 现在能否公开（比如以nature protocol的形式）？这样的话，别的实验室才能在与你
: 们相同的条件下，重复你们的实验。
: 现在我有一个怀疑--仅仅是一个没有恶意的怀疑--你们的结果如果主要基于你们的测植
: 物miRNA的“特别”的经验的话，有没有可能意味着这不是普遍的，甚至只是技术和实
: 验技巧造成的bias？当然，也有相反的可能，那就是你们发现了现有相关技术的缺陷，
: 并纠正了它，从而使得原来被忽略的东西现出“真身”来。不管怎么说，现在对你们最

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● paper thanks	● miRNA 过表达问题
● “诺贝尔医学和生理学奖评审委员会”请张辰宇做报告	● circulating microRNA检测cancer
进入Biology版参与讨论

x******g
发帖数: 289

客观地讲，网上支持张的人比持负面态度的人多。
这是比较欣慰的。

【在 v********9 的大作中提到】

x******g
发帖数: 289

人家论文引用单篇超千次（短短几年，虽然发表在三流期刊），总引用超万次（而且只
是他们课题组这个特定方向的论文，在短短几年内），你认为大家都是没重复出来就随
便引用的？
楼主的意思是，只是有些人重复不出来，言外之意是很多人还是重复出来了。

【在 l*******i 的大作中提到】

l*******i
发帖数: 153

circulating miRNA这个基本没争议，张的文章引用率高的文章也主要是一块。
现在有争议的是“在动物体内测到有功能的植物miRNA”，注意，是有“功能”的。这
个发现是最具颠覆性的，到目前为止，也只有张辰宇实验室报道的是positive结果，而
其他几个实验室（包括孟山都）则全是negative。MITBBS上的争议也在这一方面。
就上面当事人的回应，并没有讲清楚为什么别人重复不出来，而他们则可以做出来。因
此，我建议他们可以把实验技术细节发表出来，写成像nature protocols的那样，或者
在某个合适的媒介完全公开，让反对者去重复。
另外，就作者指出的“没有qPCR raw CT values”的问题，在他们的Cell Res文章中，
他们同样也仅是show的“relative level”，没有raw CT values(除了内参U6)。核心
问题扔没有理清：动物体内的植物miRNA测不到的原因，到底是不存在，还是测序方法
有问题？如果是后者，关键问题是什么，能否详细说明一下？

【在 x******g 的大作中提到】

: 人家论文引用单篇超千次（短短几年，虽然发表在三流期刊），总引用超万次（而且只
: 是他们课题组这个特定方向的论文，在短短几年内），你认为大家都是没重复出来就随
: 便引用的？
: 楼主的意思是，只是有些人重复不出来，言外之意是很多人还是重复出来了。

m****n
发帖数: 1066

你说的很对。
1. Western blot 是semi-quantitative,定量不可靠。Elisa定量就可靠多了。很多实
验室不用elisa,一是价格贵，二是没有合适的试剂盒。
2. stem-loop PCR 应该没什么神秘的技巧。John Hopkins的文章比较可靠.在南京大学
回复John Hopkins的文章提到，南大有的miRNA的Ct能到30以下。不知道这篇文章什么
时候发出来。
3.miRNA要有功能，需要在组织细胞中达到一定的数量。南大的文章中检测到的血清
miRNA数量很低，不足以在体内施加影响。
4. 现在看来deep sequencing比较可靠。不知道为什么两家测序结果差这么多。

【在 l*******i 的大作中提到】

: circulating miRNA这个基本没争议，张的文章引用率高的文章也主要是一块。
: 现在有争议的是“在动物体内测到有功能的植物miRNA”，注意，是有“功能”的。这
: 个发现是最具颠覆性的，到目前为止，也只有张辰宇实验室报道的是positive结果，而
: 其他几个实验室（包括孟山都）则全是negative。MITBBS上的争议也在这一方面。
: 就上面当事人的回应，并没有讲清楚为什么别人重复不出来，而他们则可以做出来。因
: 此，我建议他们可以把实验技术细节发表出来，写成像nature protocols的那样，或者
: 在某个合适的媒介完全公开，让反对者去重复。
: 另外，就作者指出的“没有qPCR raw CT values”的问题，在他们的Cell Res文章中，
: 他们同样也仅是show的“relative level”，没有raw CT values(除了内参U6)。核心
: 问题扔没有理清：动物体内的植物miRNA测不到的原因，到底是不存在，还是测序方法

M********r
发帖数: 142

ELISA肯定比WB精确啊，不懂lz怎么会这样辩解。
会不会血清中的miRNA是循环的，从肠吸收，经过血运输到target 组织，然后target组
织通过某种机制（受体？）富集。
所以再测测target组织的植物miRNA
lz解释说孟山都NBT文章测序之前没有氧化miRNA去掉修饰，植物miRNA都得这么测。有
没有做植物的，说说是这样吗？

【在 m****n 的大作中提到】

: 你说的很对。
: 1. Western blot 是semi-quantitative,定量不可靠。Elisa定量就可靠多了。很多实
: 验室不用elisa,一是价格贵，二是没有合适的试剂盒。
: 2. stem-loop PCR 应该没什么神秘的技巧。John Hopkins的文章比较可靠.在南京大学
: 回复John Hopkins的文章提到，南大有的miRNA的Ct能到30以下。不知道这篇文章什么
: 时候发出来。
: 3.miRNA要有功能，需要在组织细胞中达到一定的数量。南大的文章中检测到的血清
: miRNA数量很低，不足以在体内施加影响。
: 4. 现在看来deep sequencing比较可靠。不知道为什么两家测序结果差这么多。

c********b
发帖数: 363

作者还翻墙来看了，呵呵。这里的评论，不用太当计较的。
其实热门领域里面有激烈交锋很正常，只是那篇Cell Res后面的Corrigendum给人感觉
很不好，让人觉得是乱搞。
这个领域是很新的，植物里面90年代初就发现细胞间的RNA运输，动物里面晚一
些，但是最近很热NIH有专门的call for proposal。如果能坚持下去，踏实严谨，这个
领域还是很能出重要发现的。

【在 v********9 的大作中提到】

h******1
发帖数: 384

我觉得说Joke的多是指那些无脑乱吹捧的记者和ID们吧？又是要得诺将，又是诺将委员
会啥的。过度吹捧，很容易引人反感。实验的问题有争议，很正常。热点领域，过个
3-5年，很容易被科学界证实或证伪。

l***d
发帖数: 1798

第二个故事
有具体的八卦吗？

【在 d********0 的大作中提到】

: 我个人认为，作者所说的“特别”的经验非常有可能只是一些小细节问题，而不是发明
: 了什么新的方法或者对现有科技方法比如rt-pcr等做了大的修改等等
: 举几个例子：
: 1 有些蛋白容易被降解，我们实验室看别人发过的文章，重复反复去做，很难得到理想
: 效果，后来有位从外实验转来的phd，在提蛋白全程都穿着厚厚的衣服在cold room里
: 做（夏天也带着羽绒服，不然长时间在cold room冻坏了），得到的结果就相对比较清
: 晰，这些小技巧却能改变大问题
: 2 记得以前看过一个故事，是讲某篇cell上的大文章怎么出来的，这个实验室偶然开展
: 研究精液里如何限制艾滋病的传播的，当时那个实验室老板号召全体男生贡献精液，可
: 是大家撸了半天之后，做的实验结果很不理想，这使得全实验室的人都很灰心，至到两

M*P
发帖数: 6456

deep sequencing 不可靠，small rna sequencing 结果里95%以上是非microRNA。除非
你富集microRNA.

★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8

【在 m****n 的大作中提到】

m****n
发帖数: 1066

那看来还没有可靠的方法。
这样的话，先建立好的定量方法吧。

【在 M*P 的大作中提到】

: deep sequencing 不可靠，small rna sequencing 结果里95%以上是非microRNA。除非
: 你富集microRNA.
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8

相关主题
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● [合集] miRNA target 一个很疑惑的问题	● 请教一下研究microRNA相关的一些问题，多谢
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进入Biology版参与讨论

s******y
发帖数: 17729

re
测过的都知道

【在 M*P 的大作中提到】

: deep sequencing 不可靠，small rna sequencing 结果里95%以上是非microRNA。除非
: 你富集microRNA.
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8

w********h
发帖数: 12367

清者自清，学术界有自我纠正的功能，任何错误都逃不过大浪淘沙。
所以没有必要辩解，能吸引人去反驳也是成功的第一步，
最怕发在顶级杂志上却没有任何声响。

【在 v********9 的大作中提到】

d*****t
发帖数: 7903

这个回复很有力

【在 M********r 的大作中提到】

: 很有道理啊，说得很诚恳很有逻辑很有论据。
: 不管你信不信，我反正信了。
: 版上不少人不是针对他们的文章、数据说话，而是一上来就说张一贯不行、一看就不靠
: 谱，直接搞人身攻击，让人反感。

h***e
发帖数: 20195

帖子很诚恳，内容很有科学素养

【在 v********9 的大作中提到】

d*****y
发帖数: 1058

zan

【在 v********9 的大作中提到】

e*****i
发帖数: 149

我一直相信食物对人体的具体影响。
美国人也相信。
但一到转基因问题上，就有利益纠葛了。
我支持严谨做科研的。孟山都就是尼玛利益集团！！

【在 d**j 的大作中提到】

: 告诉你同学，不要在意这个版上某些人，尤其是一些名ID。
: 他们准是以为自己、自己的小团体，自己的偶像（即压制国内生命科学的新学霸）是对
: 的。

x*2
发帖数: 714

这个文章俺一直在关注, 顺便说点看法。
如果某个非凡的实验结果只有某实验室能做得出来, 大家其实都心知肚明是怎么回事。
楼主去年原文的硬伤一大堆, 怎么不说。
楼主的原文, 颠覆了两大行业的观点: 制药和转基因农业。绿色和平如获至宝, 上窜下
跳, 楼主难道又聋又哑? 还装着不知道为什么Monsanto要发这篇文章?
另外, 楼主从头到尾一副受委屈的小媳妇样, 甚至说自己英文很差, 可是你的NBT的
reply英文水平很高嘛!

c*********t
发帖数: 340

同是南大人，顶师兄这篇有理有据有节的文章。相比之下有些人的科学素养还是让人汗
颜啊
师兄为人也从同学那里耳闻过，继续加油。这样的citation很多‘打脸’的人能做到吗？
校训说嚼得菜根，做得大事。不要管别人怎么说了，踏踏实实做science~
有争议是好事，所谓越辩越明。科学不是打脸不打脸，只是大家都尽可能公正地
generate数据分析数据得出结论，正反control都做足，idea丢出去大家一起讨论
follow up，对了皆大欢喜，错了也无伤，万事有概率，那个小概率的0.05不是不可能
发生。动不动没证据就‘肯定’，不是做科学的态度。

d********0
发帖数: 534

请问楼主去年论文原文硬伤一堆这一说，你是从哪听来？还是自己看了原文，请指出
硬伤在哪？如何？

【在 x*2 的大作中提到】

: 这个文章俺一直在关注, 顺便说点看法。
: 如果某个非凡的实验结果只有某实验室能做得出来, 大家其实都心知肚明是怎么回事。
: 楼主去年原文的硬伤一大堆, 怎么不说。
: 楼主的原文, 颠覆了两大行业的观点: 制药和转基因农业。绿色和平如获至宝, 上窜下
: 跳, 楼主难道又聋又哑? 还装着不知道为什么Monsanto要发这篇文章?
: 另外, 楼主从头到尾一副受委屈的小媳妇样, 甚至说自己英文很差, 可是你的NBT的
: reply英文水平很高嘛!

b*******t
发帖数: 25

我们做过富集microRNA，结果还是很大false-positive. 原因是：富集过程中很多条件
难以控制，造成偏差……我们基本放弃了那个课题。谁有成熟的方法吗？期待交流。

【在 s******y 的大作中提到】

: re
: 测过的都知道

相关主题
● miRNA QRT-PCR 的 internal control 大家一般用什么？	● nature biotechology 你还要不要脸了！！！迟到的讨论！
● miRNA作为突触信号分子	● Plant RNAs Found in Mammals The-Scientists Highlights
● 反对中医药的和支持转基因的悲剧了：植物microRNA可以通过食物摄取方式进入人体,通过调控人体内靶基因表达方式影响生理功能	● It's indeed published in CR: miRNA168a found in mammals
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g*****n
发帖数: 250

张辰宇的和打脸的文章争的就是测得到测不到米饭miRNA的问题，也就是个量上的问题。
张辰宇有两个实验，看上去有点意思。
一个是给老鼠喂米饭，另一个是灌合成的MIR168a。米饭含 MIR168a 2.5 fmole/g。灌
合成的MIR168a的量是300 pmole (高过米饭近十万倍）。3个小时后测血清里MIR168a的
浓度，都是 4.5 fM。(Figure 2)

S*******r
发帖数: 530

不是做miRNA的，但是看到这篇讨论很有意思。陈熹的论述很陈恳，用做science的态度
说话，很有说服力，跟帖也很有启发性。
1. 讨论是好事，打脸可能不好受，但是能提供新的idea，比如JHK的打脸文让楼主实验
室有新的发现，楼主不肯说是什么，只有等paper出来以后再说。
2. 更多人质疑，能刺激楼主的实验室更加严谨的开展后续试验，得到更加可靠的结果
。比如前面针对western和elisa的讨论，如果楼主在自己实验室用elisa也能做出同样
的结果，就可以很happy的把脸给打回去了。不过很多人重复不出来，这本身就说明有
问题。随机，对照，重复都要有，楼主自己做得再好，不如让别人能repeat。
3. 现在science发展快，一两年的功夫，证实或证伪就会有结果，希望楼主结论正确，
到时候能出个review，并把引起的一系列争论都包括进去，让大家了解完整的story—
———这肯定是科学史上很出彩的一章。
4. MIT上的人学历水平偏高，WS程度也偏高。未名很WS，看帖须谨慎！

s******y
发帖数: 17729

我能邪恶的猜测这个是由于测序本身出现问题，或者更邪恶一点，人为的倾向性误差么
2.5fmol和300pmol差了多少数量级了

题。

【在 g*****n 的大作中提到】

: 张辰宇的和打脸的文章争的就是测得到测不到米饭miRNA的问题，也就是个量上的问题。
: 张辰宇有两个实验，看上去有点意思。
: 一个是给老鼠喂米饭，另一个是灌合成的MIR168a。米饭含 MIR168a 2.5 fmole/g。灌
: 合成的MIR168a的量是300 pmole (高过米饭近十万倍）。3个小时后测血清里MIR168a的
: 浓度，都是 4.5 fM。(Figure 2)

s*****g
发帖数: 3693

早日帮助别的实验室重复你们的结果。
你们实验室再多的人能做，发再多的文章也不说明问题。

【在 v********9 的大作中提到】

I****p
发帖数: 101

非常赞同！
一直不明白作者一直强调方法的特殊性。其实，没必要保密了，尤其在有很大争议、又
有极大影响的这一阶段。大可在南大实验室网页挂出或在一般性杂志上发表分析方法的
关键之处。这样以便他人重复，同时也积几点名声。越多人验证，对他们越有利。
见过国内几百万经费的项目申请，连基因的编码都不写，生怕评审人泄露，可能大环境
吧。
一位老师上课讲过一个十几年前的故事：某人发了Science，但是他们就是不让别人用
他们自己实验室的抗体（你知道有时给了别人，别人会竞争过自己，所以不给抗体也很
常见）。最终，他们实验室的抗体有问题，主要结论失去了数据支撑，只好撤稿。可惜
的是，同样的结论三年之后被别的实验室用真正有效的抗体验证了。
记得现任中科院院长曾经报道过DNA三螺旋结构，也曾经被人（有名的分子遗传教授）
讥笑过，但是，多年之后也被旁人观察到。当然，问题是：这样的结构到底有没有生物
意义？没有跟进。
我个人倾向于：总有一些miRNAme会被检测到，但是，他们能充分起到作用吗？这也是
很多人很想知道的。但愿这方面有独立的重复验证。

【在 s*****g 的大作中提到】

: 早日帮助别的实验室重复你们的结果。
: 你们实验室再多的人能做，发再多的文章也不说明问题。

c*****u
发帖数: 357

继续关注中... 小实验室本来就难发CNS不管你做的再优秀, 不过引用数那么多,真是让
人赞叹! 像你们这样的实验室现在估计越来越少了, 这真是个有意思的领域啊.

j******1
发帖数: 1315

别太自信：引用高真不能说明问题。现在有几千万的经费在哪里，也就意味几百号人都
以此为生，就算是都没重复出来，这些小组里的博士要毕业出几十篇文章不稀奇。

L*****s
发帖数: 24744

为什么国内的edu电邮也要把姓放后面呢?

q******g
发帖数: 3858

为啥ELISA比western精确？
即使最好的抗体，也有非特异性结合。用western可以找到正确的蛋白条带。但用ELISA
，是定量所有的蛋白。谁知道是什么啊？

【在 M********r 的大作中提到】

: ELISA肯定比WB精确啊，不懂lz怎么会这样辩解。
: 会不会血清中的miRNA是循环的，从肠吸收，经过血运输到target 组织，然后target组
: 织通过某种机制（受体？）富集。
: 所以再测测target组织的植物miRNA
: lz解释说孟山都NBT文章测序之前没有氧化miRNA去掉修饰，植物miRNA都得这么测。有
: 没有做植物的，说说是这样吗？

l******u
发帖数: 936

最烦别人说 Western/ELISA 可以定量，说SILAC我还表示赞同。

相关主题
● It's indeed published in CR: miRNA168a found in mammals	● paper thanks
● 南京大学重大发现揭露了转基因惊人秘密 (转载)	● “诺贝尔医学和生理学奖评审委员会”请张辰宇做报告
● 【打人，还是找抽？】：孟山都 vs. 张辰宇(ZZ)	● miRNA
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M*P
发帖数: 6456

you need to find a good bioinformatics person to use some machine learning
on the data to get the true positives.

【在 b*******t 的大作中提到】

: 我们做过富集microRNA，结果还是很大false-positive. 原因是：富集过程中很多条件
: 难以控制，造成偏差……我们基本放弃了那个课题。谁有成熟的方法吗？期待交流。

s******y
发帖数: 28562

你说得非常对。
western 对于差别比较大的样品（超过50%）在反复重复几次的情况下，是可以做到比
较精确的，但是ELISA的缺点就如你所说的那样，过于依赖抗体的特异性，所以根本没
有办法做到特别精确。

ELISA

【在 q******g 的大作中提到】

: 为啥ELISA比western精确？
: 即使最好的抗体，也有非特异性结合。用western可以找到正确的蛋白条带。但用ELISA
: ，是定量所有的蛋白。谁知道是什么啊？

r******g
发帖数: 600

讨论科学就抱着讨论科学的态度来发帖，不要一副mean的样子上来就贬低别人的成果！
想想我们自己的科研，哪个科研里没经历过这些东西！

a*******a
发帖数: 4233

问一个问题，你们做体外合成同位素标记的miRNA示踪实验了么

【在 v********9 的大作中提到】

s******y
发帖数: 28562

这个有另外一个可能性就是肠道细胞转运miRNA的载体的效率成为了瓶颈，不管你放多
少都只能进入那么一点。
另外，这个也侧面的说明了他们的实验数据没有造假，否则不会报道那么难看的貌似不
能自圆其说的数据。

题。

【在 g*****n 的大作中提到】

s******y
发帖数: 28562

我觉得你们被卷入转基因的争议里其实挺无辜的。你们的实验本质上和转基因无关。

【在 v********9 的大作中提到】

b****r
发帖数: 17995

elisa怎么会比western可靠
elisa用于定量比较多，主要原因是便宜快速，基本原理基本一致，都是抗原抗体结合
的特异性，但因而
没有片段大小的信息，elisa假阳性比western多多了

【在 m****n 的大作中提到】

s*******e
发帖数: 1389

1，陈熹，为何你不是通讯作者，却出来说这么多？张辰宇同意你所说的吗？
（我喜欢这样的讨论，只是有些担忧.)
"Xi Chen, Ke Zen & Chen-Yu Zhang
Xi Chen, Ke Zen and Chen-Yu Zhang are at
the Jiangsu Engineering Research Center for
MicroRNA Biology and Biotechnology, State Key
Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology,
School of Life Sciences, Nanjing University,
Nanjing, Jiangsu, China.
e-mail: c*****[email protected] or k**[email protected]"
2,我对miRNA测序，PCR一点都不感兴趣。无所谓。你说有窍门也好。他说他测得对也好
，无所谓。对我来说。
但是我对LDL levels很感兴趣。这是容易做，没有什么争议的。（我甚至对LDLRAP1
的表达量也持无所谓的态度。）
关键是他们有这么一句话：“
Even so, this
increase in LDL occurred in the absence of any
apparent osa-miR168a uptake, and a similar
increase in plasma LDL was not observed after
feeding mice with a nutritionally balanced
chow containing ~40% rice and osa-miR168a
levels of 54 fmol/g (about 22× higher than
reported by Zhang et al.9; Fig. 1a).”
他们的实验证明，如果喂老鼠含有40%大米的食物，osa-miR168a的含量已经很高了。但
是对LDL level不但没有升高，反而有所降低。
我对你们的反驳感兴趣也在这一点。想看看你们怎么说。你们是这么说的：
“We contend
that more experiments are needed before
the authors can exclude the contribution
of MIR168. For example, some essential
negative (mixing rice with MIR168 antisense
oligonucleotide) or positive (mixing chow
with mature MIR168) control should be
considered in performing such experiments.”
别人没有在证明你是对的，而是在证明你是错的。你说的实验对于证明你说的理论可能
是必要的。但是对我来说，40%的大米对LDL level没有作用，证明你们是错的。就足够
了。
如果你们正面回复。比如说你们也喂了40%的大米，LDL也升高了。他们做错了。我会更
倾向于你们说的是对的。
3，虽说我对LDLRAP1的量不感兴趣。但是如果你们在回复时把他们的试剂盒买来。
“LDLRAP1 protein levels were evaluated in mouse liver using a commercial
mouse LDLRAP1 ELISA kit (USCN Life Sciences; Wuhan, China). ”
拿已知sample做个western，再用这个试剂盒做个定量。看究竟是你们争论的样品问题
还是检测手段问题。那么你们的回复会更有说服力。

【在 v********9 的大作中提到】

x******g
发帖数: 289

这个要攒。
又见胖头鱼。

【在 s******y 的大作中提到】

: 这个有另外一个可能性就是肠道细胞转运miRNA的载体的效率成为了瓶颈，不管你放多
: 少都只能进入那么一点。
: 另外，这个也侧面的说明了他们的实验数据没有造假，否则不会报道那么难看的貌似不
: 能自圆其说的数据。
:
: 题。

g*****n
发帖数: 250

“瓶颈”效应的解释好像不通。第一，没有实验显示瓶颈现象。地二，灌提纯的total
RNA，3小时后血清内的MIR168a可达到 7 fM （Figure 2D)。看来，多吃还是可以多得
。

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● 犹记当年NBT的另一场互打脸文~好玩	● 希望大家能帮我一起分析一下这两个offer，感激
进入Biology版参与讨论

c******r
发帖数: 3778

你说的对。Western因为加入了protein size的信息，而且能看见条带，可以用来定性
。但是不能用来定量。
ELISA依赖antibody的特异性，特别是对于最后的表达全部是数字，大大增加造假可能
。但是ELISA的antibody如果通过competitive证明特异性，是可以准确定量的。因此
ELISA可以精确定量。而western不论怎么做都是semi－quantitative的。

【在 s******y 的大作中提到】

: 你说得非常对。
: western 对于差别比较大的样品（超过50%）在反复重复几次的情况下，是可以做到比
: 较精确的，但是ELISA的缺点就如你所说的那样，过于依赖抗体的特异性，所以根本没
: 有办法做到特别精确。
:
: ELISA

s******y
发帖数: 28562

对于动物测试，这种inconsistency 并不罕见，原因可能有很多种。
比方说，有可能那个miRNA在完整的大米里或者total RNA里和其他的RNA互相结合后成
为比较稳定的构型而能够减少被胃酸或者肠道的核酸酶破坏的可能性，所以灌进纯化的
miRNA效果反而不如不纯化的好。还有其他各种可能性，比方说也许那个miRNA的转运过
膜需要其他协同分子的作用。要解决这些可能性，也许需要一篇新的文章单独来研究这
个问题。

total

【在 g*****n 的大作中提到】

: “瓶颈”效应的解释好像不通。第一，没有实验显示瓶颈现象。地二，灌提纯的total
: RNA，3小时后血清内的MIR168a可达到 7 fM （Figure 2D)。看来，多吃还是可以多得
: 。

c******r
发帖数: 3778

是啊，他们研究的是miRNA，转基因转的事protein。都是帮民科乱搅和

【在 s******y 的大作中提到】

: 我觉得你们被卷入转基因的争议里其实挺无辜的。你们的实验本质上和转基因无关。

h*******o
发帖数: 4884

ELISA和western 本质都是一样的
western的条带显色和ELISA的显色原理也基本类似
2个都不是精确定量的好办法，都严重收到检测（显色）方式的线性区间影响
说ELISA 比western精确前提太多，第一要抗体特异性非常好，第二要有standard
curve，用target protein来做梯度曲线；而这个standard curve western blot也是
可以做的，只不过受限制于常规胶的孔数限制一般人也不错这一步
如果要钻牛角尖比较， western 比elisa可以做到更精确，而且可以区分
oligomerization以及non－specific binding

【在 c******r 的大作中提到】

: 你说的对。Western因为加入了protein size的信息，而且能看见条带，可以用来定性
: 。但是不能用来定量。
: ELISA依赖antibody的特异性，特别是对于最后的表达全部是数字，大大增加造假可能
: 。但是ELISA的antibody如果通过competitive证明特异性，是可以准确定量的。因此
: ELISA可以精确定量。而western不论怎么做都是semi－quantitative的。

s******y
发帖数: 28562

我被你说得有点糊涂了，我觉得ELISA的最后的数值无非也就是用荧光或者可见光来测
量，在这个方面和western 的定量方法好像是一样的呀，那么它们两者有什么区别啊？
如果说ELISA能够多次重复，那么western也可以多次重复啊。抱歉问这么白痴的问题，
因为我只用过一两次ELISA，算不上行家。

【在 c******r 的大作中提到】

C**S
发帖数: 522

看班上讨论这么多，没有几个人是质疑其造假的，大多数是怀疑他们把假阳性结果发表
了。

【在 s******y 的大作中提到】

h*******o
发帖数: 4884

恩，2个原理一样，区别在于ELISA 可以同时做多个technical replicates＋
biological replicates， western 受胶限制，不能做那么多而已，这个方面elisa
更精确一点
但是考虑到抗体的特异性，以及target protein可能的oligomerization，或者不同的
phosphorylation之类的情况，western 这个方面更好一点

【在 s******y 的大作中提到】

: 我被你说得有点糊涂了，我觉得ELISA的最后的数值无非也就是用荧光或者可见光来测
: 量，在这个方面和western 的定量方法好像是一样的呀，那么它们两者有什么区别啊？
: 如果说ELISA能够多次重复，那么western也可以多次重复啊。抱歉问这么白痴的问题，
: 因为我只用过一两次ELISA，算不上行家。

s******y
发帖数: 28562

明白了，谢谢。

【在 h*******o 的大作中提到】

: 恩，2个原理一样，区别在于ELISA 可以同时做多个technical replicates＋
: biological replicates， western 受胶限制，不能做那么多而已，这个方面elisa
: 更精确一点
: 但是考虑到抗体的特异性，以及target protein可能的oligomerization，或者不同的
: phosphorylation之类的情况，western 这个方面更好一点

c******r
发帖数: 3778

well，western无法定量主要是最后的胶片很快就saturate了。导致通过film无法定量
。靠肉眼，即使扫描film也是无法准确定量的。
当然，现在有很多仪器，可以直接从membrane读signal，可以反复曝光，保证不过爆从
而定量。western也是越来越接近定量实验了。
但是即使如此，ELISA定量还是要比Western方便很多。
1。ELISA可以多样品重复，导致定量减少standard deviation，增加准确性。
2。ELISA可以跑标准曲线，可以保证samples在适当的线性范围里面，从而增加定量的
可信度。
3。Western的重复是多次重复，本身就引入额外的误差。而ELISA可以一次跑很多板子
，减少了多次重复的误差。
ELISA的主要问题就是ls你说的，非常依赖antibody的质量。但是ELISA的antibody质量
是可以检验的。对于一个非常颠覆性的实验，检测一下抗体质量，然后用ELISA定量，
还是值得的。毕竟，ELISA可以用来大批量检测样品。可以做成high throughput的模式
，广泛进行人体检测。这个本身就是western无法比拟的优势。

【在 s******y 的大作中提到】

c******r
发帖数: 3778

另外就是antibody很多时候不available。毕竟，Western是denature的，而ELISA多数
都没有专门的antigen denature步骤。所以有时候western antibody做不了ELISA。那
就没办法。即使semi－quantitative也比没有强啊。

【在 s******y 的大作中提到】

: 明白了，谢谢。

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进入Biology版参与讨论

s******y
发帖数: 28562

唔，明白了。

【在 c******r 的大作中提到】

: well，western无法定量主要是最后的胶片很快就saturate了。导致通过film无法定量
: 。靠肉眼，即使扫描film也是无法准确定量的。
: 当然，现在有很多仪器，可以直接从membrane读signal，可以反复曝光，保证不过爆从
: 而定量。western也是越来越接近定量实验了。
: 但是即使如此，ELISA定量还是要比Western方便很多。
: 1。ELISA可以多样品重复，导致定量减少standard deviation，增加准确性。
: 2。ELISA可以跑标准曲线，可以保证samples在适当的线性范围里面，从而增加定量的
: 可信度。
: 3。Western的重复是多次重复，本身就引入额外的误差。而ELISA可以一次跑很多板子
: ，减少了多次重复的误差。

h**********a
发帖数: 72

你搞清楚，是孟山都先发文章攻击张的研究的，孟山都自己倒贴上来把转基因与循环
miRNA牵扯在一起，结果现在发现甩不掉了

【在 c******r 的大作中提到】

: 是啊，他们研究的是miRNA，转基因转的事protein。都是帮民科乱搅和

c******r
发帖数: 3778

跟转基因有屁关系？
你说说吃bt跟miRNA的关系？

【在 h**********a 的大作中提到】

: 你搞清楚，是孟山都先发文章攻击张的研究的，孟山都自己倒贴上来把转基因与循环
: miRNA牵扯在一起，结果现在发现甩不掉了

h*******o
发帖数: 4884

western也可以做native gel
这个方面 ELISA 没有什么优势
ELISA最大的优势还是在于孔多，可以重复多，而且更容易加standard curve
这样1是可以高通量，而且不同时间不同次数做出来的data更容易combine（还是因为
能够更容易放standard curve 进去）
至于显色方面，现在的萤光显色western的线性范围和ELISA没有什么区别了
ELISA的假阳性是比较高的，所以如果不是对抗体有十足的把握，我宁愿做western，
出了问题也容易分析
这次去开SFN，倒是看到了一个gel free的western system，类似于biorad的experion
的RNA系统，挺有意思，如果能把体系sample数量做大，倒是一个很好的选择，就是死
贵，lol

【在 c******r 的大作中提到】

: 另外就是antibody很多时候不available。毕竟，Western是denature的，而ELISA多数
: 都没有专门的antigen denature步骤。所以有时候western antibody做不了ELISA。那
: 就没办法。即使semi－quantitative也比没有强啊。

C**S
发帖数: 522

qRT-PCR定量的可靠性呢呢？张的文章里面用了很多这样得来的数据。

s******y
发帖数: 28562

你说的那个gel free的western system是指SIMON吧？死贵死贵，而且目前的model是
用HRP化学荧光来读数，所以一次只能用一个抗体，没有办法直接在同一个样品上跑内
参看loading,也没有办法同时看不同的蛋白。如果他们搞成多色的系统，我还可以勉强
考虑买一个。现在的状况我是根本不考虑。

experion

【在 h*******o 的大作中提到】

: western也可以做native gel
: 这个方面 ELISA 没有什么优势
: ELISA最大的优势还是在于孔多，可以重复多，而且更容易加standard curve
: 这样1是可以高通量，而且不同时间不同次数做出来的data更容易combine（还是因为
: 能够更容易放standard curve 进去）
: 至于显色方面，现在的萤光显色western的线性范围和ELISA没有什么区别了
: ELISA的假阳性是比较高的，所以如果不是对抗体有十足的把握，我宁愿做western，
: 出了问题也容易分析
: 这次去开SFN，倒是看到了一个gel free的western system，类似于biorad的experion
: 的RNA系统，挺有意思，如果能把体系sample数量做大，倒是一个很好的选择，就是死

c******r
发帖数: 3778

这个不是优势劣势的问题，就是antibody availability的问题。有时候只有这个，另
外一个不work，那也没办法。
技术上是，但是Western荧光显色的设备不是每个lab都有，绝大多数publish的paper还
是一条黑线不是。如果有western的荧光设备，那在这个方面应该是跟ELISA区别不大了。
所以啊，如果是新的antibody需要做实验验证抗体的特异性。否则不可能用来做ELISA
，没法发表。
experion
其实我觉得western也不是不可以做high throughput，比如样品就不要弄条带了，直接
做个点儿就可以了。大点儿的胶跑个100个sample，那就跟ELISA接近了。要是搞成
capillary的就更带劲了，哈哈

【在 h*******o 的大作中提到】

c******r
发帖数: 3778

二抗可以多色吧？
另外western还是太费功夫了。ELISA可以全自动，标准化，这个对high throughput的
screening还是非常有用的。
western有什么系统可以跑胶和transfer一步完成的不？那就省事多多了。

【在 s******y 的大作中提到】

: 你说的那个gel free的western system是指SIMON吧？死贵死贵，而且目前的model是
: 用HRP化学荧光来读数，所以一次只能用一个抗体，没有办法直接在同一个样品上跑内
: 参看loading,也没有办法同时看不同的蛋白。如果他们搞成多色的系统，我还可以勉强
: 考虑买一个。现在的状况我是根本不考虑。
:
: experion

s******y
发帖数: 28562

这个已经有公司在搞了，因为我自己的实验室经常用WB, ProteinSimple 就曾经向我推
销过他们的SIMON。但是我最后还是买了一个特别简单的自动加buffer 的机器。主要是
他们的技术还不成熟，能做的事情太有限了。而且并不是严格的capillary而是柱子。

【在 c******r 的大作中提到】

: 二抗可以多色吧？
: 另外western还是太费功夫了。ELISA可以全自动，标准化，这个对high throughput的
: screening还是非常有用的。
: western有什么系统可以跑胶和transfer一步完成的不？那就省事多多了。

h*******o
发帖数: 4884

western blot有个类似的叫 dot blot，其实就跟elisa 差不多，都是一团混的加进去
在我做的领域里面不少大牛实验室还在用这个

了。
ELISA

【在 c******r 的大作中提到】

相关主题
● nature biotechology 你还要不要脸了！！！迟到的讨论！	● 南京大学重大发现揭露了转基因惊人秘密 (转载)
● Plant RNAs Found in Mammals The-Scientists Highlights	● 【打人，还是找抽？】：孟山都 vs. 张辰宇(ZZ)
● It's indeed published in CR: miRNA168a found in mammals	● paper thanks
进入Biology版参与讨论

s******y
发帖数: 28562

你们两说的其实不矛盾。他说的是孟山都主动去攻击张的文章，不是张主动去攻击孟山
都，这个确实也是事实。

【在 c******r 的大作中提到】

: 跟转基因有屁关系？
: 你说说吃bt跟miRNA的关系？

c******r
发帖数: 3778

那个NBT上说，是一帮民科看见张的文章就集体gc了，拿来反转，所以孟山都才攻击张
的。
这事儿大概起头就是这帮民科搅浑水。
其实张的文章好不好，对不对，跟tmd转基因有屁关系。分明是害了张。孟山都也是吃
饱了，去管这种闲事。当出头鸟肯定被人扁。活该。

【在 s******y 的大作中提到】

: 你们两说的其实不矛盾。他说的是孟山都主动去攻击张的文章，不是张主动去攻击孟山
: 都，这个确实也是事实。

g*****n
发帖数: 250

"假阳性"是什么意思？发表的结果不是来自一次实验。对照组里没有，实验组里有，那
就可能是“真阳性”。重复了n次，都是这样，而且统计出显著差异，那怎么可能是假
阳性？科研基本的原则。

【在 C**S 的大作中提到】

: 看班上讨论这么多，没有几个人是质疑其造假的，大多数是怀疑他们把假阳性结果发表
: 了。

D*a
发帖数: 6830

biorad还是什么不是有个15分钟transfer的系统吗

【在 c******r 的大作中提到】

c******r
发帖数: 3778

恩，有个7分钟transfer系统。很好用。但是毕竟不是自动化的。得手动把胶拿出来，
装好，完了以后还得收拾。
要是能跑胶，转膜一步完成那多好。不过一时我也没想出来怎么实现这东西。

【在 D*a 的大作中提到】

: biorad还是什么不是有个15分钟transfer的系统吗

h*******o
发帖数: 4884

坑爹的， 7分钟transfer那个
不好用，我们实验室有一个， transfer完了明显不均一，下面的转的干干净净的，
上面的胶染出来那叫一个蓝啊
而且不容易赶气泡
还有那个15分钟跑胶的配套系统......
现在搞得是进退两难，用了不放心，不用不甘心

【在 D*a 的大作中提到】

: biorad还是什么不是有个15分钟transfer的系统吗

m****n
发帖数: 1066

http://www.proteinsimple.com/simple_western_overview.html
automatic western blotting.

【在 c******r 的大作中提到】

: 恩，有个7分钟transfer系统。很好用。但是毕竟不是自动化的。得手动把胶拿出来，
: 装好，完了以后还得收拾。
: 要是能跑胶，转膜一步完成那多好。不过一时我也没想出来怎么实现这东西。

C*******e
发帖数: 4348

强贴留名
lz态度很诚恳
这样的帖子里讨论也很长知识
希望能够尽快看到张实验室的新文章
作为南大校友希望你们能顺利！

s******y
发帖数: 17729

qRT-PCR数据就更扯淡了，通常情况下需要辅以其他data加以佐证
我不明白的是，既然张的文章遭到如此大的质疑，或者说他认为他的方向如此有潜质
为啥不用同位素示踪，人工合成miRNA喂耗子，人家都重复不出来，自己为啥不换个角度
重复。不比他苍白无力的辩驳要好得多
做过miRNA的人都明白，那个测序其实就是很扯淡的东西
还有做miRNA的文章，随便一篇跟风灌水的引用过百正常的很，用引用来说，就更无敌了
以后他还可以吹发过NBT呢

【在 C**S 的大作中提到】

: qRT-PCR定量的可靠性呢呢？张的文章里面用了很多这样得来的数据。

D*a
发帖数: 6830

哇这个fancy 好用吗

【在 m****n 的大作中提到】

: http://www.proteinsimple.com/simple_western_overview.html
: automatic western blotting.

相关主题
● “诺贝尔医学和生理学奖评审委员会”请张辰宇做报告	● circulating microRNA检测cancer
● miRNA	● 犹记当年NBT的另一场互打脸文~好玩
● miRNA 过表达问题	● [合集] miRNA target 一个很疑惑的问题
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D*a
发帖数: 6830

大分子跟小分子本来也不能一样条件转吧。
我是听一个人说他们实验室买了这个挺好用的

【在 h*******o 的大作中提到】

: 坑爹的， 7分钟transfer那个
: 不好用，我们实验室有一个， transfer完了明显不均一，下面的转的干干净净的，
: 上面的胶染出来那叫一个蓝啊
: 而且不容易赶气泡
: 还有那个15分钟跑胶的配套系统......
: 现在搞得是进退两难，用了不放心，不用不甘心

c******r
发帖数: 3778

好用，不过太贵，艳阳天mm说的

【在 D*a 的大作中提到】

: 哇这个fancy 好用吗

h*******o
发帖数: 4884

差距太大了
《30kd的干干净净， 70kd的就一堆转不过来，和普通的wet tank比差距明显，时间倒
是非常短

【在 D*a 的大作中提到】

: 大分子跟小分子本来也不能一样条件转吧。
: 我是听一个人说他们实验室买了这个挺好用的

c******r
发帖数: 3778

不知道能不能放冰上多转几次？快了是不行啊

【在 h*******o 的大作中提到】

: 差距太大了
: 《30kd的干干净净， 70kd的就一堆转不过来，和普通的wet tank比差距明显，时间倒
: 是非常短

C**S
发帖数: 522

用gradient gel效果挺好。

【在 h*******o 的大作中提到】

: 差距太大了
: 《30kd的干干净净， 70kd的就一堆转不过来，和普通的wet tank比差距明显，时间倒
: 是非常短

m****n
发帖数: 1066

We had one and it's very expensive.

【在 c******r 的大作中提到】

: 好用，不过太贵，艳阳天mm说的

y***i
发帖数: 11639

呃。。。艳阳天同学是标准男PI一头。。。。

【在 c******r 的大作中提到】

: 好用，不过太贵，艳阳天mm说的

c******r
发帖数: 3778

...really？？？

【在 y***i 的大作中提到】

: 呃。。。艳阳天同学是标准男PI一头。。。。

X*******8
发帖数: 3895

我还是支持张辰宇的。另外，我不认为那个自称cDNA的人审过张的文章，他也许只是见
过有人审稿，来吹牛的。

k*****n
发帖数: 323

你可以选择挺张，别人也可以选择不信张；转基因亦同理。没必要给别人戴帽子或者嚷
嚷着你吃屎什么的。
循环系统miRNA是个很有意思的发现，有可能有功能或者作为疾病诊断的新标记。但我
对大米miRNA能调节LDL持极端保留态度。一是证据不足；二是在所谓的大米逆袭的论点
上，过度诠释。早先亚洲人吃大米的时候寿命还不到能够在进化上对大米这个miRNA形
成选择压力。

【在 h**********a 的大作中提到】

: 你搞清楚，是孟山都先发文章攻击张的研究的，孟山都自己倒贴上来把转基因与循环
: miRNA牵扯在一起，结果现在发现甩不掉了

相关主题
● 推荐预测的microRNA target的网站软件	● 问个MicroRNA的问题
● 希望大家能帮我一起分析一下这两个offer，感激	● miRNA QRT-PCR 的 internal control 大家一般用什么？
● 请教一下研究microRNA相关的一些问题，多谢	● miRNA作为突触信号分子
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D*a
发帖数: 6830

如果真是很难做的技术，发不了protocol杂志，可以发JOVE啊
最近在学新东西，他们上面的东西还是挺不错的啊。

k*****n
发帖数: 323

jove很坑爹。要交钱不说，要求还死多。我现在的实验室在投这玩意，老板都被折腾得
没脾气了。

【在 D*a 的大作中提到】

: 如果真是很难做的技术，发不了protocol杂志，可以发JOVE啊
: 最近在学新东西，他们上面的东西还是挺不错的啊。

n**8
发帖数: 221

这是CR的原文摘要
Our previous studies have demonstrated that stable microRNAs (miRNAs) in
mammalian serum and plasma are actively secreted from tissues and cells and
can serve as a novel class of biomarkers for diseases, and act as signaling
molecules in intercellular communication. Here, we report the surprising
finding that exogenous plant miRNAs are present in the sera and tissues of
various animals and that these exogenous plant miRNAs are primarily acquired
orally, through food intake. MIR168a is abundant in rice and is one of the
most highly enriched exogenous plant miRNAs in the sera of Chinese subjects.
Functional studies in vitro and in vivo demonstrated that MIR168a could
bind to the human/mouse low-density lipoprotein receptor adapter protein 1 (
LDLRAP1) mRNA, inhibit LDLRAP1 expression in liver, and consequently
decrease LDL removal from mouse plasma. These findings demonstrate that
exogenous plant miRNAs in food can regulate the expression of target genes
in mammals.

n**8
发帖数: 221

关于功能性的是这一句话:
Functional studies in vitro and in vivo demonstrated that MIR168a could
bind to the human/mouse low-density lipoprotein receptor adapter protein 1 (
LDLRAP1) mRNA, inhibit LDLRAP1 expression in liver, and consequently
decrease LDL removal from mouse plasma.
interpretation是 1.）植物miR168a能进动物。
2.）miR-168a（动物没有的）可以调控动物的LDLRAP1表达。
我的理解，这篇文章的“indication”是吃大米会影响LDLRAP1表达，吃米摄入的
miRNA“有可能” 参与了调控，尽管其contribution可能很小很小。这也算是一个新
的concept吧。跟转基因安全好像没什么很强关联。

e******t
发帖数: 3289

这种平和有理有据的交流，还是支持

I*M
发帖数: 937

呃，这两个人我都认识。。。张晨与不是做糖尿病的类？我只记得有一次听seminar，
他问了一个很弱智的问题。。。

g***a
发帖数: 337

你是说Kendal Hirschi实验室已经能重复出你们的结果了吗？我特指那个植物miRNA的
确能regulate人类mRNA的结果。我还是很信任Hirschi的。。。

【在 v********9 的大作中提到】

I*M
发帖数: 937

哦，对了，陈熹是位好同志，我挺你！

s*****g
发帖数: 3693

再补一句，你的实验室既然享受了当时文章发表之后轰轰烈烈的媒体吹嘘，就应该耐得
住有人做出反结果之后的流言诽语。
那个张辰宇在诺贝尔奖委员会的报告，可有任何英文的报道？

【在 v********9 的大作中提到】

M*P
发帖数: 6456

100

没准孟山都的pipeline里有转microRNA的产品。

★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8

【在 s******y 的大作中提到】

: 我觉得你们被卷入转基因的争议里其实挺无辜的。你们的实验本质上和转基因无关。

相关主题
● 反对中医药的和支持转基因的悲剧了：植物microRNA可以通过食物摄取方式进入人体,通过调控人体内靶基因表达方式影响生理功能	● It's indeed published in CR: miRNA168a found in mammals
● nature biotechology 你还要不要脸了！！！迟到的讨论！	● 南京大学重大发现揭露了转基因惊人秘密 (转载)
● Plant RNAs Found in Mammals The-Scientists Highlights	● 【打人，还是找抽？】：孟山都 vs. 张辰宇(ZZ)
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I*M
发帖数: 937

101

对于1，这篇就是他们的reply吧，只是把英文翻译成中文了。。。
对于2，3，不明觉厉中。。。

【在 s*******e 的大作中提到】

: 1，陈熹，为何你不是通讯作者，却出来说这么多？张辰宇同意你所说的吗？
: （我喜欢这样的讨论，只是有些担忧.)
: "Xi Chen, Ke Zen & Chen-Yu Zhang
: Xi Chen, Ke Zen and Chen-Yu Zhang are at
: the Jiangsu Engineering Research Center for
: MicroRNA Biology and Biotechnology, State Key
: Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology,
: School of Life Sciences, Nanjing University,
: Nanjing, Jiangsu, China.
: e-mail: c*****[email protected] or k**[email protected]"

I*M
发帖数: 937

102

生物实验嘛，是怎么一回事儿，大家还不都心里清楚。。。

【在 s*****g 的大作中提到】

: 再补一句，你的实验室既然享受了当时文章发表之后轰轰烈烈的媒体吹嘘，就应该耐得
: 住有人做出反结果之后的流言诽语。
: 那个张辰宇在诺贝尔奖委员会的报告，可有任何英文的报道？

n**8
发帖数: 221

103

就事论事吧.
好像没有证据表明张的实验室很享受轰轰烈烈的媒体吹嘘吧。
毕竟不是娱乐圈。

【在 s*****g 的大作中提到】

s*****g
发帖数: 3693

104

那些新闻通稿难道是记者自己看paper找上门来的?

【在 n**8 的大作中提到】

: 就事论事吧.
: 好像没有证据表明张的实验室很享受轰轰烈烈的媒体吹嘘吧。
: 毕竟不是娱乐圈。

h**********a
发帖数: 72

105

嚷着你吃屎之前你没见过那个家伙先骂人的吗？你故意选择性失明？
在动物体内找到活性植物miRNA与亚洲人吃大米习惯是两码事

【在 k*****n 的大作中提到】

: 你可以选择挺张，别人也可以选择不信张；转基因亦同理。没必要给别人戴帽子或者嚷
: 嚷着你吃屎什么的。
: 循环系统miRNA是个很有意思的发现，有可能有功能或者作为疾病诊断的新标记。但我
: 对大米miRNA能调节LDL持极端保留态度。一是证据不足；二是在所谓的大米逆袭的论点
: 上，过度诠释。早先亚洲人吃大米的时候寿命还不到能够在进化上对大米这个miRNA形
: 成选择压力。

h**********a
发帖数: 72

106

罗永浩说的好，现在的中国不存在清者自清，一个人再清白，别人天天向你身上泼粪，
总会有搞臭你的一天
如果有人天天骂你污蔑你，你会无动于衷？

【在 s*****g 的大作中提到】

h**********a
发帖数: 72

107

你转基因吃多了吧，NBT有提民科？找出来让大家瞧瞧

【在 c******r 的大作中提到】

: 那个NBT上说，是一帮民科看见张的文章就集体gc了，拿来反转，所以孟山都才攻击张
: 的。
: 这事儿大概起头就是这帮民科搅浑水。
: 其实张的文章好不好，对不对，跟tmd转基因有屁关系。分明是害了张。孟山都也是吃
: 饱了，去管这种闲事。当出头鸟肯定被人扁。活该。

s*****g
发帖数: 3693

108

在工作还存在很大争议的时候就选择大搞新闻走媒体，那么现在几个实验室无法重复只
有使用他们实验室的独门绝技才能得出的结果，就别怪大众bounce back.
国内论坛吹捧张教授诺贝尔奖级别工作的一搜一大把，不少还是南大校友。也没见谁去
谦虚一下。一个海外中国人论坛有人骂两句，竟然专门翻墙过来澄清。

【在 h**********a 的大作中提到】

: 罗永浩说的好，现在的中国不存在清者自清，一个人再清白，别人天天向你身上泼粪，
: 总会有搞臭你的一天
: 如果有人天天骂你污蔑你，你会无动于衷？

C**S
发帖数: 522

109

当年他的文章引起轰动，是因为他声称在动物体内能检测到植物miRNA，并且有功能。
这次回应里没再提什么功能的事。自己也觉得夸大其词了吧。

h**********a
发帖数: 72

110

是吗？敢问可不可以找出人家“大搞新闻走媒体”的例子来？
貌似只要是对孟山都不利的都会变成“有很大争议”
争议最大的其实就是孟山都，那为什么孟山都可以有争议之前会走媒体？会大搞新闻？为
什么不等到没有争议的时候再卖转基因？

【在 s*****g 的大作中提到】

: 在工作还存在很大争议的时候就选择大搞新闻走媒体，那么现在几个实验室无法重复只
: 有使用他们实验室的独门绝技才能得出的结果，就别怪大众bounce back.
: 国内论坛吹捧张教授诺贝尔奖级别工作的一搜一大把，不少还是南大校友。也没见谁去
: 谦虚一下。一个海外中国人论坛有人骂两句，竟然专门翻墙过来澄清。

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● paper thanks	● miRNA 过表达问题
● “诺贝尔医学和生理学奖评审委员会”请张辰宇做报告	● circulating microRNA检测cancer
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x******g
发帖数: 289

111

你写过Reply？
Reply有篇幅限制，而且要对对方的问题一针见血应对，没那么多闲工夫旁征博引。
你通篇看看这篇NBT的Reply，多一句嫌多，少一句嫌少，步步为营，稳扎稳打。文风行
云流水。

【在 C**S 的大作中提到】

: 当年他的文章引起轰动，是因为他声称在动物体内能检测到植物miRNA，并且有功能。
: 这次回应里没再提什么功能的事。自己也觉得夸大其词了吧。

q*******8
发帖数: 768

112

是的，我看到那几个回复也很无语

ELISA

【在 q******g 的大作中提到】

: 为啥ELISA比western精确？
: 即使最好的抗体，也有非特异性结合。用western可以找到正确的蛋白条带。但用ELISA
: ，是定量所有的蛋白。谁知道是什么啊？

h**********a
发帖数: 72

113

收孟山都钱在这里做水军的还真不少

s*****g
发帖数: 3693

114

所以有很多人骂孟山都阿
同理，有人骂张辰宇不是很正常么

？为

【在 h**********a 的大作中提到】

: 是吗？敢问可不可以找出人家“大搞新闻走媒体”的例子来？
: 貌似只要是对孟山都不利的都会变成“有很大争议”
: 争议最大的其实就是孟山都，那为什么孟山都可以有争议之前会走媒体？会大搞新闻？为
: 什么不等到没有争议的时候再卖转基因？

C**S
发帖数: 522

115

有一点可笑的是，在他的NBT回应中，还要拉一个f1000网站上的评论来给自己背书。

【在 x******g 的大作中提到】

: 你写过Reply？
: Reply有篇幅限制，而且要对对方的问题一针见血应对，没那么多闲工夫旁征博引。
: 你通篇看看这篇NBT的Reply，多一句嫌多，少一句嫌少，步步为营，稳扎稳打。文风行
: 云流水。

h**********a
发帖数: 72

116

骂张的人全是因为转基因，换句话说全是替孟山都说话，再说白了就是利益所在，就像
你说的，人家什么大搞新闻宣传，请问能找出证据来吗？我到现在看到的也就是科技导
报发表一篇报道，科技导报报道科技新闻，还有什么好奇怪的

【在 s*****g 的大作中提到】

: 所以有很多人骂孟山都阿
: 同理，有人骂张辰宇不是很正常么
:
: ？为

s*****g
发帖数: 3693

117

你要是胡搅蛮缠就没什么好讨论的。我随便google一下2011年的新闻. 还不说无数媒体
的转载和南方周末的采访
张辰宇：我们并不在乎是否在CNS上发文
http://www.ebiotrade.com/newsf/2011-9/2011921134641159.htm
研究发现：植物遗传物质跨界调控人类基因
http://scitech.people.com.cn/h/2011/0930/c227887-3698156573.htm
研究发现稻米中微小RNA能操控宿主基因
http://www.chinanews.com/jk/2011/09-21/3342638.shtml

【在 h**********a 的大作中提到】

: 骂张的人全是因为转基因，换句话说全是替孟山都说话，再说白了就是利益所在，就像
: 你说的，人家什么大搞新闻宣传，请问能找出证据来吗？我到现在看到的也就是科技导
: 报发表一篇报道，科技导报报道科技新闻，还有什么好奇怪的

h**********a
发帖数: 72

118

胡搅蛮缠的是你，你给的链接全部是生物科技类新闻，请问，这类新闻不报道研究进展
报道什么？
孟山都争议那么大，你怎么不去找找？

【在 s*****g 的大作中提到】

: 你要是胡搅蛮缠就没什么好讨论的。我随便google一下2011年的新闻. 还不说无数媒体
: 的转载和南方周末的采访
: 张辰宇：我们并不在乎是否在CNS上发文
: http://www.ebiotrade.com/newsf/2011-9/2011921134641159.htm
: 研究发现：植物遗传物质跨界调控人类基因
: http://scitech.people.com.cn/h/2011/0930/c227887-3698156573.htm
: 研究发现稻米中微小RNA能操控宿主基因
: http://www.chinanews.com/jk/2011/09-21/3342638.shtml

a*******a
发帖数: 4233

119

invitrogen的那个iblot很好用，转400k蛋白只要7分钟，不过死贵。
传统湿转上至400k下至14k最多2小时毫无压力
所以我觉得在实验室规模上没有理由上这么fancy的机器

【在 D*a 的大作中提到】

: 哇这个fancy 好用吗

z********8
发帖数: 818

120

你以为张是当代苏轼啊。

【在 x******g 的大作中提到】

相关主题
● 犹记当年NBT的另一场互打脸文~好玩	● 希望大家能帮我一起分析一下这两个offer，感激
● [合集] miRNA target 一个很疑惑的问题	● 请教一下研究microRNA相关的一些问题，多谢
● 推荐预测的microRNA target的网站软件	● 问个MicroRNA的问题
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z********8
发帖数: 818

121

总引用超万次是怎么计算的？
“楼主的意思是，只是有些人重复不出来，言外之意是很多人还是重复出来了。”
有很多publication支持吗？

【在 x******g 的大作中提到】

c********b
发帖数: 363

122

请问有试过这个用来做northern blots吗？
在考虑当中。
谢谢

【在 c******r 的大作中提到】

c******r
发帖数: 3778

123

还真不知道。不过，第一可以打电话问客服。第二可以做一下试试看。

【在 c********b 的大作中提到】

: 请问有试过这个用来做northern blots吗？
: 在考虑当中。
: 谢谢

l**********1
发帖数: 5204

124

Alternatively, you can try
i) Proteomics Array,
last month One paper,
http://www.nature.com/nmeth/journal/v10/n11/full/nmeth.2707.htm
ii)
RPPA Protein mluti antibody Array system,
http://rppa2013.com/program.html

iii)
Master Antibody Microarray
for quantitive Western Blotting,
http://www.nature.com/marketplace/2013/10/microarrays-2/
ps:
Relevant R package manual book link,
HTTP double dot//cran.r-project.org/web/packages/RPPanalyzer/vignettes/
RPPanalyzer.pdf

【在 D*a 的大作中提到】

: 哇这个fancy 好用吗

L*****y
发帖数: 234

125

你这就是属于欲加之罪何患无辞了。看来还是屁股坐的方向问题。。。。

【在 C**S 的大作中提到】

: 有一点可笑的是，在他的NBT回应中，还要拉一个f1000网站上的评论来给自己背书。

c*********r
发帖数: 181

126

看到这么精彩的讨论，还是受教了，学到很多东西。

c*********r
发帖数: 181

127

求教一下艳阳天，你买的那个机器是啥东西？能告诉我品牌和型号吗？

m******5
发帖数: 1383

128

你说的生物实验是指什么？大家心里不清楚

【在 I*M 的大作中提到】

: 生物实验嘛，是怎么一回事儿，大家还不都心里清楚。。。

f**********r
发帖数: 18251

129

据我所知，一开始骂张的部分ID就是南大生科院毕业的

【在 s*****g 的大作中提到】

I******i
发帖数: 203

130

聽過張院長的報告,幽默睿智,我映像中的張院長還是聽不錯的

相关主题
● miRNA QRT-PCR 的 internal control 大家一般用什么？	● nature biotechology 你还要不要脸了！！！迟到的讨论！
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进入Biology版参与讨论

w********2
发帖数: 632

131

不一定，elisa的抗体特异性很重要，不是一定比western blot分辨率更高。

【在 M********r 的大作中提到】

S****8
发帖数: 1

132

你打我经理的电话，我给你一个审判。。。

【在 v********9 的大作中提到】

w********2
发帖数: 632

133

这个思路很好。

角度

【在 s******y 的大作中提到】

: qRT-PCR数据就更扯淡了，通常情况下需要辅以其他data加以佐证
: 我不明白的是，既然张的文章遭到如此大的质疑，或者说他认为他的方向如此有潜质
: 为啥不用同位素示踪，人工合成miRNA喂耗子，人家都重复不出来，自己为啥不换个角度
: 重复。不比他苍白无力的辩驳要好得多
: 做过miRNA的人都明白，那个测序其实就是很扯淡的东西
: 还有做miRNA的文章，随便一篇跟风灌水的引用过百正常的很，用引用来说，就更无敌了
: 以后他还可以吹发过NBT呢

S****8
发帖数: 1

134

大致已经浏览了一遍回帖和原帖。。。。。
此刻我感觉很不舒服，肚子很胀，，我不知道应该说什么。。。
我想开一个会，到我家里来，我们讨论一下这个问题。。。。
我万万没有想到我自己猜得这么准。。。。
我现在除了性生活不能满足以外，还想生小孩以外，其它的都真的挺满意的。。。
我公司的电话号码：
6751612
你们知道我在那里，知道怎么加区号。。。
谢谢顶贴的同学。。。
祝你节日快乐。。

【在 I******i 的大作中提到】

: 聽過張院長的報告,幽默睿智,我映像中的張院長還是聽不錯的

(共1页)

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