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s*****i
发帖数: 315 | 2 我用的gene block，N端加了3xFlag和nucleoplasmin NLS，就是张峰的Cas9的核定位序列
转293也试了韩paper里面targeting GFP的5pssDNA，也没做出来，也许GFP质粒转的太
多了
里面很多不确定因素，我已经做了一个跟韩的paper里完全一样的设计，N端Flag-
SV40NLS
我也怀疑我的ssDNA 也许local公司磷酸化的不好。我有自己磷酸化的，并且从IDT定了
韩paper里的G10，下周再试一次
如果有结果我会post 出来的。 |
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r********s
发帖数: 149 | 3 刚刚看到Addgene已经有他们的质粒了，发现c-terminus多出几个氨基酸。
[在 samalli (小米) 的大作中提到：]
:我用的gene block，N端加了3xFlag和nucleoplasmin NLS，就是张峰的Cas9的核定位
序列
:转293也试了韩paper里面targeting GFP的5pssDNA，也没做出来，也许GFP质粒转的太
:多了
:里面很多不确定因素，我已经做了一个跟韩的paper里完全一样的设计，N端Flag-
:SV40NLS
:我也怀疑我的ssDNA 也许local公司磷酸化的不好。我有自己磷酸化的，并且从IDT定
了韩paper里的G10，下周再试一次
:如果有结果我会post 出来的。
:天下熙熙，皆为利来；天下攘攘，皆为利往。 |
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r********s
发帖数: 149 | 4 刚刚看到Addgene已经有他们的质粒了，发现c-terminus多出几个氨基酸。
[在 samalli (小米) 的大作中提到：]
:我用的gene block，N端加了3xFlag和nucleoplasmin NLS，就是张峰的Cas9的核定位
序列
:转293也试了韩paper里面targeting GFP的5pssDNA，也没做出来，也许GFP质粒转的太
:多了
:里面很多不确定因素，我已经做了一个跟韩的paper里完全一样的设计，N端Flag-
:SV40NLS
:我也怀疑我的ssDNA 也许local公司磷酸化的不好。我有自己磷酸化的，并且从IDT定
了韩paper里的G10，下周再试一次
:如果有结果我会post 出来的。
:天下熙熙，皆为利来；天下攘攘，皆为利往。 |
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v*********a
发帖数: 453 | 5 去年被拒一次，今年两次，打算五月再试一次。可是不知道怎么才能说服签证官才能让
他们相信没有移民倾向，我们准备的材料那帮人一眼都不看直接扔出来，把我妈气得心
脏病都要犯了。
这几次申请的都是B2签证，问过一些人说是申请的种类不对，可是还有什么签证种类是
符合探亲的？我查了一圈儿也没找到更合适的种类，希望大家指点。谢谢。 |
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发帖数: 1 | 6 老刑的弱智图库数量有限，只要找一填上，多试几次肯定有一次通过。用test
automation tool估计跑个500次，差不多就封上了。
老刑的图片算是比较清晰的。识别算法的正确率再不高，次数上去，肯定没问题。 |
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s*****n
发帖数: 10890 | 7 好的 谢谢~ 只是总觉得先搞定比较安心。万一机场客服也这个态度就完蛋了。
我再试两次吧，一次美国加航，一次国内加航。也只能这样了吧 |
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s*****n
发帖数: 10890 | 8 好的 谢谢~ 只是总觉得先搞定比较安心。万一机场客服也这个态度就完蛋了。
我再试两次吧，一次美国加航，一次国内加航。也只能这样了吧 |
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C*******r
发帖数: 258 | 9 怀老二八个月，也许是因为荷尔蒙的问题，最近特别焦虑。想到公婆要再来就非常
难受。 他们上次来，非常不习惯。我和老公矛盾重重，责怪他心都在父母身上，自己
很压抑。 当时说以后再难也不让他们来了。
因为我客气，自己压抑，他儿子在家里又强势，他们呆得很舒心，他们回了国以后
又要乘签证有效期再来一次，又准备再呆六个月。我说孩子要上preschool了，我也在
家呆着，三个大人大眼瞪小眼没意思。和老公吵了几次，他才放弃和父母再泡半年的想
法，对他们说我们生老二的时候再来。
现在我要生老二了，想起过去的不愉快经历，非常不舒服。不想在生老二的时候重
复这些。而且我现在在家呆着，我是文科博士，在这边也不一定找到工作。 我们刚买
房子，钱都花光了。他们来了就是老公一个人的收入养六个人，我觉得太难了。而且他
父亲在我们两个人都靠奖学金生活时就觉得我们发了，根本不替我们着想。另外，从根
本上，我不喜欢家庭结构的改变。
和老公说了经济情况和我自己的愿望，他开始和我吵，大发雷霆，说没想到我是这
种不孝的老婆。后来冷静了，告诉我不管我需要不需要他们帮忙，他的父母想看他的新
房子和... 阅读全帖 |
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r********9
发帖数: 367 | 10 可不可以跟你妈妈谈谈，看看她是不是太严肃了？
或者，她下次可以主动跟签证官交谈下吗？
我爸也被拒过，虽然我不知道原因，但是我告诉他要放松，要想交谈，而不是问答，他
第二次签主动说了他为什么要来美国，还微笑着主动递交材料，没等问道才递，第二次
过了，，，
bless，给你妈妈找些签经，可以让她再试一次 |
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C********5
发帖数: 1065 | 11 在现在这种糟糕的形势下，大家都是经过几次INTERVIEW才找到工作的？我为什么试
一次，败一次。是不是我说的英文真的很难听？可是平时同学也能听得懂呀？还是我
让人觉得讨厌？可是我的朋友很多，在学校人缘也很好呀？到底我什么地方出了问
题？真的不明白了。 |
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o***s
发帖数: 42149 | 12 小鲜肉现在是越来越多，一拨一拨的年轻演员开始占领了娱乐圈市场，而经过时间锤炼出来的老演员，老戏骨则显得越来越珍贵，他们不靠外表，不靠名气，就单单靠自己的一身本领，靠着这眉眼之间全是戏，今天介绍这位便是这样一位老戏骨，他就是倪大红。
说到倪大红的演艺之路，可谓一波三折，父母都是话剧团演员，所以他从小就想当演员，但因为他长相丑，父母并不期望他走上这条路。16岁下乡之后，他就当起了马车夫。随着高考制度的恢复，当演员的梦想又重新被点燃。可78年他第一次参加中戏的考试，第一轮就刷下来，第二年又考解放军艺术学院，可结果与上一年一样，第三年又报考了上戏，因长相问题连名都没有报上，本来家中都替他安排好了去电线厂当工人的工作，不服输的倪大红决定最后试一次，结果皇天不负有心人，真考上了，并且跟张光北是同班同学。
毕业后，他第一次参与拍摄电视剧，是与陈佩斯、潘长江合作的《我是乡巴佬》，有很多人都说他演技不行，加上长相不好，让他好几次都想转行不干了，不过还是咬牙坚持下来。
他的勤奋和努力在圈内是有目共睹的， 所以自然有人十分看好他，张艺谋就是其中一个，张艺谋对他的评价非常高，说他是“模样长得怪，越老越吃香”，... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 13 俄罗斯第一次没高潮：“请再操一次”。韩国果然🈶操了一次。连续抽查280下
，俄罗斯终于操爽了，闭嘴了 |
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d***a
发帖数: 13752 | 15 我觉得你是不是应该再去试开一次。这车0-60只有5.6秒，刚开时得有个适应过程吧。 |
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a*****1
发帖数: 162 | 16 谢谢
明天下午和他，还有一个副导师谈，
我再试着表一下态，努力赶上试验进度，写论文等等，具体后事如何---听天由命了
呢？ |
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q*******l
发帖数: 394 | 17 炒年糕一次也没有做成功过，之前在韩国料理吃过挺好吃，但是自己上网查了又看
了书上的菜谱，都做不成功啊。大部分介绍的配菜就是洋葱和胡萝卜，然后主要调料是
番茄酱，但是就是做不出来那个酸甜可口的味道，总是一股怪味，开始以为是番茄酱的
品牌问题，毕竟有的番茄酱就是偏酸一些的，但是换了几个品牌的了都不行，就连意大
利面酱的那些番茄味的酱也用过，效果也不好。就是跟店里吃到的差很远。本以为很简
单的一道菜，试过多次却总是做不成功，挫败感折磨人啊，请教一下版上的朋友有没有
做的比较成功的给点注意事项吧，辣炒的或者不辣的都可以，吃起来味道很舒服的那种
，一般韩国料理店里的味道都还是不错的。 |
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T********n
发帖数: 528 | 18
我自己不认为是。重点是想要negotiate第一次被拒，大胆的再试一次，居然成功。
分享经验，因为跟我朋友们说的时候很多人说没想到被拒一次还可以有戏。我自己以前
也不知道。
心情上我当然是很高兴，所以面经写起来多少可能会带上和BSO同因素的东东。
不好意思啦。 |
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t******6
发帖数: 367 | 19 RT 看到这张卡史高60k的offer 结果网申被秒据.说是信用记录太短...(已经3年半了)
请问有必要去branch请manager 再试一次么? 成功的机会大么? |
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i*****8
发帖数: 2691 | 20 买试纸测吧，那样算不准的。要看你月经周期。试纸很便宜，amazon上十几刀，40根+
早孕试纸10根。我试一次就成功了，早知道不用买那么多了。少的还有20+10的。 |
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o*******y
发帖数: 1498 | 21 从来不刻意去试，仅仅是不排斥生孩子的情况下不做安全措施而已 |
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p********0
发帖数: 6313 | 24 试了三天就想怀上，，大大不会以为是电影吧，，一击就中～～！！！
运气好的几个月，，运气不好的几年，，身体有问题的更麻烦，，， |
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w*********s
发帖数: 618 | 26 我妈妈也是类似情况去年底在成都两次被拒。 第一次据后，我的同事告诉我给我住的
区的议院写信可能有用，他的grandfather就是帮助外国人办签证，建议我这样做。我
当时很高兴，要到信后还以为有用呢。我找这个coucil women是直接把信fax给成都领
馆的。结果遇到了同一个老头签证官，还没说两句就拒le。今年还想再试一次。
有人签过或不过请回来说一说经验啊。 |
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b*******7
发帖数: 31 | 27 不明白为什么会有这样的问题：
1. visa 不能决定你在美国可以逗留多久
2. 可以逗留多久在入境时由移民局决定
3. 移民局不是傻瓜，在决定逗留时间时参照你申请visa时的事由
你女朋友申请B1/2签证时的理由是什么？如果那个理由不足以justify 她在美国逗留近
一年，那她就是欺骗；反之，如果还能圆回来一些，就编好故事再试一次。
最近去过一次美国后仍被拒签的例子蛮多的，都是以为第一次乖乖回去以后就bullet
proof了。国人的智慧真是没的说。。。。。 |
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g*****a
发帖数: 1457 | 28 今天抄一次，下个星期试一次，把手上的cash都抄完，三个月以后再看帐户，如果那时
候还有帐户的话。 |
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r*****n
发帖数: 972 | 29 这个是有可能的。
你第一次FP的时候都是accept么？如果有当时显示reject的话，据我所知，他们会进行
系统辨认，如果仍然不通过的话会要求你再去一次。我一个朋友就是这样的情况。所以
做FP的时候尽量要求他们多试几次，一直到accept为止。
祝一切顺利 |
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a***x
发帖数: 26368 | 31 很简单，你再去试一次。decock了再打如果还有爱的话那就是真爱了。 |
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n****e
发帖数: 1242 | 32 再试一次哥本哈根
第一天
早 咖啡加糖
午 煎牛排 西红柿 生菜柠檬
晚 两个煮鸡蛋 |
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a******0
发帖数: 1071 | 33 进行到一半重新开始会不会伤身体？
哥本哈根好像只能两年试一次 |
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F*****4
发帖数: 149 | 34 谢谢，找到了， 太有用了。
里面必须穿fast dry的，否则是nightmare.
上星期六难得的好天气，Mt Shasta 非常漂亮，虽然经验不足没能登顶，但景色非常美
丽。很有意思。
打算July之前再试一次，就是有些担心不会用ice ax. |
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D*******0
发帖数: 20 | 36 软件是安卓版的。软件里可以选的参数有测量单位，拍头面积，线床密度，线的种类和
直径。
测了两把Dunlop M-fil 300 （拍头98，线床16x19），不同时期上的合成肠线。
一般要试几次才能给出结果，不过重复性还可以，测量结果和击球感觉也一致，力量大
的那把拍子张力低了4磅。
感觉是很有用的一个工具，可以用来监测拍线张力的变化。 |
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d********e
发帖数: 39903 | 37 米扫，我喜欢你很久了，你能做我的女 朋友吗？”被被紧张的询问。“不行，我 比你
大一届呢。这时候，米扫的老师 看见了，一下勾起了往昔的回亿。于是 回到办公室，
默默的把她的所有期末试 卷的分数都改为了59分。加油吧孩子！ 加油吧孩子！ 老师
只能帮你到这了。。 |
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l*******7
发帖数: 805 | 38 我也是看论坛猛说这个很好，上次趁neiman有优惠时败了一个，感觉，还没以前用的
bobbi brown的好，遮盖力一般，透气性一般，价钱却不一般。看来以后不能太跟风了
，还是多试几次好 |
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b**n
发帖数: 289 | 39 1，爆光时间对你的镜头焦距而言太长，减少时间试试。现在的星星在这样的小图上看
起来不是点，而是短线，看起来相当的晕。要么你就爆老长，爆个1，2个小时，拍星轨
。当然，拍星轨，个人更prefer的方法，是拍多张照片叠加，这样可以减少noise。
2， 可能前景比较差，你这里基本没前景，山的形状没有吸引力。可以试试一些个好看
的前景，或者一些与星空有对比性的前景。
3，不同的参数多试几次。 |
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d****i
发帖数: 397 | 40 几年前俩次签证被拒，一直都不敢再签，可粘。。。这次终于鼓足勇气准备再试一次，
10／22 中午，希望顺利。。。 |
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j*****n
发帖数: 200 | 41 9. 吕布
说起吕布, 人们想到的不外乎是他令三军觫惧的武艺, 威猛高大的身
形, 还有无数见利忘义有勇无谋的事迹. 演这样的人物是要冒风险的,
尤其对于我这样已经小有名气的正角演员来说. 可是想象一下吕布在
沙场上威风八面所向披靡的痛快, 还有和美女一起演戏的机会, 足以
让人甘愿背上演反角的名声去试一次.
我们可以把吕布为了赤兔马和飞黄腾达而杀死义父丁原的经过稍稍略
写. 毕竟那场景充满血腥暴力. 说实在话, 如果撇开杀人不谈, 那么
吕布的所为是颇可以成为现今成功人士精英分子们跳槽择业的先驱和
楷模的.
吕布没有能够看破王允的美人计, 不是因为他笨, 而是因为他爱上了
貂婵. 整个三国, 唯一一个为了所爱的人不顾一切的, 就只有吕布了.
虽然说部分是由于上当受骗, 可是吕布刺杀董卓, 毕竟是他自己, 也
是当时天下英雄所能达到的最高成就了. 我个人是深恨董卓的. 每次
不论玩那种三国游戏, 我不会杀任何被俘的武将, 除了董卓. 因此当
吕布用同样血腥和暴力的场面将方天画戟直刺入董卓咽喉的时候, 我
竟有一丝快意.
离开长安后, 吕布和部下们辗转流浪. 一直到被困下邳. 我越来越深 |
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j*****g
发帖数: 739 | 43 我一个同事试几次，回答都是“对不起，我不知道你在说什么。” |
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y********l
发帖数: 3970 | 44 dell optiplex 790. 每次冷启动的话，头两次按电源键的时候，机器哼一声，硬盘和
光驱灯亮一下，马上又熄火。再按，再哼，再熄火。哼个两三次了，再按才能真正启动
。启动后也没啥异常。这是啥问题。Thanks. |
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L*******l
发帖数: 126 | 45 Gre 成绩不是都在一起的，不管你寄哪次，人家都能看到全部，只是参考最高的吧。我
也是刚考了，不是很理想。在犹豫要不要再试一次。 |
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s*******e
发帖数: 3042 | 46 这个差别也太大了，看来我得再去试一次。你的MDX和X5分别是哪年的？什么配置？ |
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h**m
发帖数: 63 | 47 有姐妹在Washington, DC区域的吗？Shady grove fertility center到底技术怎么样？
要做下一次IVF， 不知是不是到外州去做。 如果Shady grove fertility center技术
还行，就再在这儿试一次。毕竟去外州有诸多不便，IVF周期这么长。请热心的姐妹给
个建议吧！
谢谢！ |
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