发帖数: 1 | 1 taqman也得需要引物，而且比sybr green 还要多一个探针序列 |
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发帖数: 1 | 3 发卡二聚体试剂盒能实现 zero positive。 |
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l*********r
发帖数: 695 | 4 情报机构早就知道了，美帝也没准备，连试剂盒引物都搞出二聚体，连个pcr都没做就
把有问题的试剂盒发出去了。 |
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x*********r
发帖数: 608 | 6 MTHFR纯合突变，按医生的理论，我身体比较容易形成血栓！回国做了些检查，MTHFR
影响的叶酸、半胱氨酸、凝血什么都没问题，期间有次D二聚体高，复查结果也没问题
！只当怀孕后宝宝周围的血管有多又细，我又是高凝体质，保不齐哪条一栓上就没戏了
（中医也说我是血瘀体质，容易造成胎停）那咱就乖乖听医生的话，阿司匹林吃着，B
族维生素补着……什么活血咱吃什么！
前几天在右边大腿发现几个皮下出血点，直径2mm左右的紫色小点，我当是我刮痧造成
的，试了一阵子刮痧，自己只能刮刮腿，从来都不起痧！可是人家的痧都是论片的，咱
这论个不说，还平布分布的很均匀，莫名其妙还在肚脐周围发现一个出血点，于是停了
刮痧等等看……右边小腿上出现两个，大腿没增加也没退，我还以为没啥事了！
今天突然在左边大腿上看到一小片，两个2mm的，剩下的比1mm还小，就是我平时上网时
手会不经意按到的地方，我一下子就郁闷了，这是怎么个状况？我都停了刮痧了，咋还
能起痧呢？该不是这血管通得通出血液病了吧？家庭医生最早也得下周五才能约到，估
计见了也不会被重视……OB还说下次怀了之后每天打肝素呢！别好不容易不堵了，再发
大水把人家冲下去... 阅读全帖 |
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r****o
发帖数: 105 | 8 几个小建议：
(1) 去磷酸化不是那么重要。
(2)换新的连接酶尤其是新的BUFFER。连接反应的BUFFER
非常容易坏，因为里面有ATP，冻融几次就不行了。
(3)载体和插入片段的量要足够。建议插入片段的量越多
越好。我一般让片段的莫尔量是载体的几十倍。
(4)既然你用琼脂糖凝胶纯化你的片段。我估计你用UV照射过
胶来确定位置，然后切下有DNA的部分，是吧？UV照射下，
很容易让DNA形成嘧啶二聚体，急剧降低连接效率。所以你要么
不用gel purification，如果必须分离两个片段，你可以
同时在两条LANE上跑少量的DNA和大量的DNA，切下少量DNA的
胶用UV照射确定所要片段的位置。 |
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t****u
发帖数: 10218 | 9 I wasn't talking about the crystal structure either.:)
I thought in the pulldown exp. you had a GST fusion to pull-down another
version of your protein, is that right? I am concerning about that your
GST-fusions are so geographically close to each other there will be very
little chance to form a GST-protein/protein dimer. Most of them will be
GST-protein/GST-protein dimer, that's why "E coli. 表达纯化的yeast蛋白不能形成
二聚体 （GST pulldown)".
But I'm just speculating, didn't know your exp. detail.
maybe
的修饰 |
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b******n
发帖数: 4225 | 10 是引物二聚体
以前做real time PCR经常碰到
如何消除没试过 |
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e****l
发帖数: 204 | 11 LIC的效率应该挺高的
但做 LIC 时，不能用最新的 Phusion 等酶来 PCR insert，因为那会产生很多能连接
到载体里的引物二聚体。 |
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e****l
发帖数: 204 | 12 我们的反应主要依靠引物上的序列产生长的单链 overhang
而引物二聚体也能产生相同的 overhang，会引入假阳性
大片段我们也较难连上 |
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w******a
发帖数: 1527 | 13 实验室里冷极了，没有窗户，不知道是白天还是黑夜。这是一周的最后一天——周 末
。在这又冷又黑的晚上，一个蓬头散发的小女孩在试验台前坐着。她从家里出来的时候
还穿着一件外套，但是有什么用呢？那是一件很大的外套──那么大，不知是哪一年
买 的。她工作的时候的，就穿上白大褂了，实验室的师弟嘲笑说，何必穿实验服呢，
你的破大衣都可以当抹布了。
小女孩只好一个人做实验，一双小手被PE手套捂得苍白。她的面前的胶板上有一串
点样孔，还有好几管菌落pcr产物。这一整天，目的基因还是没连上质粒，谁也没帮过
她。
可怜的小女孩！她又冷又饿，哆哆嗦嗦地点样。灯光落在她的干枯的长头 发上，
那头发卷曲着披在肩上，看上去很久没梳，不过她没注意这些。每个桌上都堆满 了文
献，实验室飘着一股LB培养基的香味，因为这是老板催要结果的时间——她可忘不了这
个。
她在上完出某个样后停了下来，蜷着趴在桌子上。她觉得更冷了。她不敢跟老板说
，因 为她试了所有的taq酶，试剂盒，质粒，没p出阳性的菌落，老板一定会骂她的。
再说，换做别的题目跟这个一样难。她们头上只有pap... 阅读全帖 |
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m********r
发帖数: 124 | 14 版上牛人多，特来问个问题：
PCR总是令人烦恼，国内的时候就遇到过，现在又出来折腾我了：
我是想分别扩e.coli两个蛋白的两个同源domain,都很小，200bp的样子，但总是得不到
，都只有引物二聚体。我不觉得是引物的问题，因为两组引物都失败了，而且以前没有
遇到过这个问题。我到觉得是模板的问题。我直接用的colony，然后用PCR的那个95度
10Min，理论上认为能裂菌。我在想是裂菌不充分呢？还是我开始加的菌落太多了？我
一直担心模板不够，挑个菌落在tube里twirl了很久。或者裂菌之后就是问题比较多，
我应该尝试的先制备chromosome再扩增呢？太头大了，牛人过来指点下吧 |
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b*******6
发帖数: 39 | 15 不应该是引物的原因
我在另外一端即Hind3那一段也有很长的引物，但是基本上没看到出问题，应该是Bgl2
和BamH1酶切的问题。突变的原因应该也不是PCR引入的，因为其他段（即除了Bgl2段的
）其他基本没发现如此多缺失和突变现象。我觉得你碰到的老板太好了，竟然会那么说
；别人一直跟我说，2周之类做不出克隆会被赶出实验室，用了那么多试剂重复了那么
多回还在折腾克隆同样也会被赶出实验室。
我询问过周围的高年级学生，有的建议换载体、换引物（但是现在已经出来一个克隆了
，换载体引物什么的、而且要选到合适载体）。你说的overlap PCR我没用，是我经验
不足，不知道可以这样，我当初不应该使用如此长的引物的。引物长贵不说，PCR也不
容易，容易形成二聚体，我后来尝试同Touchdown PCR才解决这个问题的。 |
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b*******6
发帖数: 39 | 16 实验的目地是表达和纯化一个蛋白，加入不同的Translocation mitif，使它能够加到
培养基里面能够进入细胞内。
对于下面实验:
1 换引物、突变回去估计不太现实
2 因为出问题总是在Bamh1-Bgl2位点，而载体因为考虑Bamh1星号活性的问题只切了1小
时，所以考虑过夜切；还有考虑毒性问题，降低培养温度。质粒切以后跑胶的时候有一
个问题就是跑得不是很平直，不知道是因为我没有切好还是质粒量太多。
3 请别人做不是没考虑过，但是负责我的那位高年级博士生估计PCR都有问题，因为他
也做过，但是没做下去。长引物容易形成二聚体，我是用Touchdown PCR或者里面加了
甘油才解决问题的。
4 插入的片段很普通，就是600bp左右，关键是要加的tag，3个不同tag，是
translocation motif，加在蛋白上面用于进到细胞里面去的:
TLM 1 (PLSSIFSRIGDP, 12 aa)
CCGCTGAGCAGCATTTTTAGCCGCATTGGCGATCCG
TLM TAT (GRKKRRQRRRPPQ, 13 aa)
GGCAGGAAGAAGCGGAGACAGC... 阅读全帖 |
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s*******e
发帖数: 1010 | 17 Hisx10肯定不是灵丹妙药，我做的时候大概只有一半相对于Hisx6产率有所提高。螯合
金属当然不会有太多的His参与，但也有个His的局部浓度的问题。一个明显的例子就是
我有几个即使连着Hisx10的蛋白，咪唑梯度洗脱的时候也是先洗脱单体，再提高浓度才
洗脱二聚体。如果10和20个His有差别，我认为6和10有差别是必然的。
因为还没见过有副作用的例子，所以只好一律X10了。你说的影响溶解度的情况我还没
遇到过——His-tag影响溶解度是肯定的，但是没遇到过长短Histag影响的差别明显的
情况。
至于影响结晶，从来不敢带着Tag去长晶体，无论x6还是x10，一律切掉再说。 |
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l********s
发帖数: 70 | 18
你看看你引物设计的如何把，如果二聚体丰富信号也会收集，或者非特异 |
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k*********7
发帖数: 49 | 19 实验室里冷极了，没有窗户，不知道是白天还是黑夜。这是一周的最后一天——周末。
在这又冷又黑的晚上，一个蓬头散发的小女孩在试验台前坐着。她从家里出来 的时候
还穿着一件外套，但是有什么用呢？那是一件很大的外套──那么大，不知是哪一年买
的。她工作的时候的，就穿上白大褂了，实验室的师弟嘲笑说，何必穿 实验服呢，你
的破大衣都可以当抹布了。
小女孩只好一个人做实验，一双小手被PE手套捂得苍白。她的面前的胶板上有一串点样
孔，还有好几管菌落pcr产物。这一整天，目的基因还是没连上质粒，谁也没帮过她。
可怜的小女孩！她又冷又饿，哆哆嗦嗦地点样。灯光落在她的干枯的长头发上，那头发
卷曲着披在肩上，看上去很久没梳，不过她没注意这些。每个桌上都堆满了文献，实验
室飘着一股LB培养基的香味，因为这是老板催要结果的时间——她可忘不了这个。
她在上完出某个样后停了下来，蜷着趴在桌子上。她觉得更冷了。她不敢跟老板说，因
为她试了所有的taq酶，试剂盒，质粒，没p出阳性的菌落，老板一定会骂 她的。再说
，换做别的题目跟这个一样难。她们头上只有paper，虽然网上有好多类似的文献，但
到她这里就是不work。
她... 阅读全帖 |
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j****x
发帖数: 1704 | 20 拿质粒作模板，而且还只有1.5kb，基本上闭着眼也能扩增出来的，呵呵。直接2-step
PCR，不用退火，变性后直接72度延伸，可以有效减少引物二聚体的影响。前提是引物
Tm值均高于72度（这个应该不难） |
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C*******e
发帖数: 4348 | 21 可以跑个native page
就是running buffer还有sample buffer里面都没有SDS的
制备胶的时候也没有SDS
不知道你的二聚体有多大
另外是不是上样太多了
不过带弥散开来的话跑native page挺常见的
不过你不跑自己的样品也不知道对吧 |
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g***x
发帖数: 645 | 22 我的二聚体是280KD， 特别大，但是分离没啥问题
上样量大概在35ug 左右， 不算少，我可以再少上点儿
en, 准备试试native page，不过我觉得跑native gel 更容易弥散，但你说的对，不试
试总是没法知道，试了不行至少排除了一个方法，也就算了
多谢 |
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Z******5
发帖数: 435 | 23 貌似扩增的最猛的那几条曲线有两个指数增长区。 会不会是有超强的引物二聚体？你
检查一下引物看看。
一般用2ug total RNA反转录cDNA后，1:10稀释，取3ul做模板，内参GAPDH的Ct也就20
左右。 按照模板差10倍，Ct值差3来看，你这个结果真的是不好解释啊，即使是过表达
也没见过这么高丰度的基因。 |
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q***7
发帖数: 144 | 24 如果用SybrGreen，３０个cycle以后的我基本都不考虑，跑个胶看看你就知道，那基本
上是引物二聚体.
上面那个仁兄说的对，可以适当增加点PCR长度，我有时用４００bp左右，因为结合较
多的dye可以得到非常好的信号 |
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j*****9
发帖数: 716 | 25 加了melting curve步骤了没有？看每个孔的melting curve，产物是否单一，或者把产
物跑胶检样，看条带是否单一，引物有没有二聚体等等 |
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h******y
发帖数: 351 | 26 理论上当然是这样，但是两个TALEN可以形成三种二聚体（AA,AB,BB)，在极端条件下，
一端位点强结合，另一端弱结合也能造成Off-Target的剪切。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 28 估计是你那一次用的是旧的loading buffer，里面的还原剂剂量不够，所以有些二聚体
没有完全解开。 |
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t******y
发帖数: 716 | 29 应该是蛋白形成二聚体，外源蛋白和内源蛋白一起ip下来，flag的外源蛋白分子量大在
上面，内源蛋白本身在下面。蛋白的抗体可能识别的位点是和flag相连的末端，因为连
上flag反而不能识别外源蛋白了，所以只看到低一点的条带。 |
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g*****n
发帖数: 241 | 30 谢谢回复。我的蛋白分子量175KDa，所以可以排除轻重链。另外我的蛋白是在null
mutant的背景里在另一条染色体上插入一个FLAG tagged gene，所以应该不是和内源蛋
白行程二聚体。
请问还有其他什么可能吗？谢谢 |
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l********8
发帖数: 45 | 31 这个法国人声称重复出来的结果，发现是引物二聚体（ dimer），还是无法证明重复了
韩的结果。 |
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H**T
发帖数: 3007 | 32 尼玛！现在生物版的几个上窜下跳的是经过科学训练的吗？！
脑残还是咋地？！阅读水平这么差还做科研，还出来现？！
人家讨论的是最小的band，是primer dimer! 不是中间的bands.primer dimer是50bp左
右的band,明白了吗？primer dimer当热不是editing的产物!
连韩春雨的主要贡献都没搞清楚，就出来喷啊，还跳的那么欢实！韩春雨的主要贡
献是将找到特异的菌株，将 NgAgo 的最适工作温度65度成功降到37度。
很可能是完全没有科学素养，在某个实验室混吃等死，心里打算着转行，老板叫他
重复一下韩的实验，他就只读了一下韩文章的method部分，照着做没搞定。
http://www.mitbbs.com/article/Biology/32028889_0.html
发信人: liveinsky8 (live), 信区: Biology
标 题: Re: NgAgo最新结果！Efficient！
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jul 18 08:31:19 2016, 美东)
这个法国人声称重复出来的结果，发现是引物二聚体（ dimer... 阅读全帖 |
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f*******e
发帖数: 5594 | 33 你确定他用的是紫杉吗？
紫杉醇是红豆杉属植物中的一种复杂的次生代谢产物, 也是目前所了解的惟一一种可以
促进微管聚合和稳定已聚合微管的药物。同位素示踪表明, 紫杉醇只结合到聚合的微管
上, 不与未聚合的微管蛋白二聚体反应。细胞接触紫杉醇后会在细胞内积累大量的微管
，这些微管的积累干扰了细胞的各种功能,特别是使细胞分裂停止于有丝分裂期，阻断
了细胞的正常分裂。 通过Ⅱ-Ⅲ临床研究，紫杉醇主要适用于卵巢癌和乳腺癌，对肺癌
、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤也都有一定疗效。 |
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l*****9
发帖数: 9501 | 34 万古霉素三天用了之后体温还是下不来，撤万古上美罗培南
血液科：骨髓嗜血状态，可能是续发于感染，D二聚体非常高，可能存在DIC,或者微血
管栓塞 |
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l*****9
发帖数: 9501 | 35 纤维蛋白原降解产物和D二聚体一直非常高，more than 300ug/ml, any suggestions? |
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l*****9
发帖数: 9501 | 36 万古霉素三天用了之后体温还是下不来，撤万古上美罗培南
血液科：骨髓嗜血状态，可能是续发于感染，D二聚体非常高，可能存在DIC,或者微血
管栓塞 |
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l*****9
发帖数: 9501 | 37 D二聚体太高，必须得预防DIC, 所以用肝素要用，三联保肝，激素，都是有利于肝的 |
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l*****9
发帖数: 9501 | 38 纤维蛋白原降解产物和D二聚体一直非常高，more than 300ug/ml, any suggestions?
HSV |
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l*****9
发帖数: 9501 | 39 他的一般状况良好，饮食正常，没有卧床不起，每天都给他做下肢按摩，因为考虑到可
能有DIC所以一直用低分子肝素和前列腺素E1，但是目前没有发现DIC的征象，没有发现
血栓，肝功能好的非常快，AST已经降到285U/L了，总胆红素也只有50mmol/l了，但是D
二聚体依然很高。 |
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F******y
发帖数: 1988 | 40 发信人: wistaria (紫藤花 is having a crush), 信区: Biology
标 题: PCR的小女孩——原著安徒生 ZT
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Nov 13 20:45:48 2010, 美东)
实验室里冷极了，没有窗户，不知道是白天还是黑夜。这是一周的最后一天——周 末
。在这又冷又黑的晚上，一个蓬头散发的小女孩在试验台前坐着。她从家里出来的时候
还穿着一件外套，但是有什么用呢？那是一件很大的外套──那么大，不知是哪一年
买 的。她工作的时候的，就穿上白大褂了，实验室的师弟嘲笑说，何必穿实验服呢，
你的破大衣都可以当抹布了。
小女孩只好一个人做实验，一双小手被PE手套捂得苍白。她的面前的胶板上有一串
点样孔，还有好几管菌落pcr产物。这一整天，目的基因还是没连上质粒，谁也没帮过
她。
可怜的小女孩！她又冷又饿，哆哆嗦嗦地点样。灯光落在她的干枯的长头 发上，
那头发卷曲着披在肩上，看上去很久没梳，不过她没注意这些。每个桌上都堆满 了文
献，实验室飘着一股LB培养基的香味，因为这是老板催要结果的时间——... 阅读全帖 |
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i****r
发帖数: 1803 | 41 内容简介：
迷男大大的又一部力作，一曲香艳的仙侠之歌。
散者，即无拘无束，逍遥自在。散仙者，诸仙之末，或逍遥于深山海岛，或淡隐于
街井闹市，低者不过丹卜之流，高者却堪比大罗太乙，鸿蒙至今，流传着无数光怪陆离
的奇人异事。
散仙，似仙非仙、是人超人的特殊身分，而崔小玄正是玄教内的除魔小散仙，身负
先天太玄的崔小玄正是不属九幽十类，不入六道轮回，不在三界五行的太古散仙玄狐转
世。
和其他散仙的小小不同之处，便是他醉心于异宝新术的发明，不过，超越常规的发
明总需要付点代价，而最常碰到的代价就是……无敌将军大暴走啦！！！
日月新帝大兴土木建造迷楼，悄悄吸取十九灵脉精华，玄教查出这迷楼可能源自於
叛教逆徒之手，为了维持天下苍生万物，玄教教主特指派如意仙娘崔采婷入京，而这回
，下山除魔的名单上也多了从未见识过花花世界的崔小玄……
且看一个贪玩小散仙遨游天地，游戏于诸多妖娆之中香艳的故事。
罗袜高挑，肩膀上露两玩新月；
金钗斜坠，枕头边堆一朵乌云。
誓海盟山，博弄得千般旖旎；
羞云怯雨，揉槎的万种妖娆。
恰恰莺声，不离耳畔；
津津甜唾，笑吐舌尖。
杨柳腰脉脉春浓，樱桃口微微气喘。
星眼朦胧，细细汗流... 阅读全帖 |
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E******u
发帖数: 3920 | 42 第四节 转依论
在玄奘所传唯识学中，心体与理体是两个不同的概念。理体即清净法界，亦即真如、法
性；心体即第八阿赖耶识，即藏识、种子识。第八识之中蕴藏的无漏种子既是众生解脱
的根据，也是连接心体和理体的中介。唯识学的“三性”、“三无性”学说，一方面是
对“识”之体性的描述，另一方面又具有联结心体与理体的特别意义。“三性”中依他
起性最为关键，在某种意义上依他起之最终的根据是阿赖耶识，此识体所蕴藏的有漏、
无漏种子正是遍计所执性与圆成实性之所以形成的根源。通过依他起性，唯识宗将心体
与离言之心性（真如）之转依关系揭示了出来。同样，“相名五法”，一方面是对世间
诸法所作的一种分类说明，另一方面此五法之间的关系也蕴含了心体与理体之间的差别
与联系。与中土的“性宗”相同，唯识宗同持不可言诠的“离言真如”立场，窥基创发
的“四重二谛”，其目的正是试图以此将心体与理体紧密地联系起来。
“转识成智”是唯识宗将其心性论落实于解脱论层面的必然结果。凡夫不知外境非实、
离心无境的道理，若明了“唯识无境”之理，并且转变所依，就可实现“转识成智”而
解脱成佛。唯识宗以四缘论证“转识成智”如何可能，前二属于主观方... 阅读全帖 |
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B***o
发帖数: 133 | 43 “当学观音耳根圆通。反闻自性。当学势至都摄六根。净念相继。”
(下面解释是藕益大师的《楞严经文句》)
尔时世尊。普告众中诸大菩萨。及诸漏尽大阿罗汉。汝等菩萨及阿罗汉。生我法中。
得成无学。我今问汝最初发心。悟十八界谁为圆通。从何方便入三摩地。
垂询圣众。其故有二。一者正显方便多门。二者正显门门各有成验。所谓要知山下路
。须问过来人也。最初发心等者。先开解也。从何方便入三摩地者。依解起行也。二十
五圣。虽未必人人先开圆解。而从解起行。自是修证通途轨式。或见此处有最初字。便
欲拟答最初方便之问。反以第一大科拟答妙奢摩等。误矣。误矣。
（庚）三众圣各说证门五。初观六尘。二观五根。三观六识。四观七大。五观耳根。
（辛）初中六。初陈那观声。（至）六迦叶观法。
（壬）今初。
憍陈那五比丘。卽从座起。顶礼佛足。而白佛言。我在鹿苑。及于鸡园。观见如来最
初成道。于佛音声悟明四谛。佛问比丘。我初称解。如来印我名阿若多。妙音密圆。我
于音声得阿罗汉。佛问圆通。如我所证。音声为上。
六尘圆通。色应居首。今先明声尘者。此方真教体。清净在音闻。且与耳根圆通。一
始一终。互相映故。释此二十五种圆通。各为三意。一。... 阅读全帖 |
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B***o
发帖数: 133 | 44 《宝王三昧忏》续跋
《宝王三昧忏》乃先师夏莲老晚岁最后之巨著。“忏”者，梵语“忏摩”之略。正译为
“乞容恕”，旧译为“悔”。音义结合，名为“忏悔”。《心地观经》曰：“若覆罪者
，罪即增长。发露忏悔，罪即消除。”《业报差别经》曰：“若人造重罪，作已深自责
，忏悔更不造，能拔根本罪。”是故古云：“灭苦之要，莫过忏悔。”
普贤大士曰：“我于过去劫中，由贪嗔痴，发身口意，作诸恶业，无量无边。若此
恶业有体相者，尽虚空界，不能容受。”本仪中广列当世众生种种罪恶，其邪妄险毒，
倍蓰于前。若不速忏，果报堪悲。
夫忏法有事、理二类。仪中严净道场、礼佛诵经、随文忏罪，是为事忏，亦名作法
忏。至于仪中“应观法界性，一切唯心造”，“无量胜方便，从思实相得”，“若欲忏
悔者，端坐念实相”等，乃观照无生，从容中道之妙行，是为理忏，亦名无生忏。唐清
凉国师曰：“事忏灭末，理忏拔根。”本仪寓理忏于事忏，人人皆可入手；从作法契无
生，念念灭除罪根。方便究竟，微妙难思。
又此忏名为“宝王三昧”者，盖宝王三昧即念佛三昧。本忏以法藏因行，为自典范
；弥陀果证，作我依归。仪中之礼拜、赞叹、作愿、观察、回向，即《往生论》之“五... 阅读全帖 |
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h**r
发帖数: 8078 | 45 ☆─────────────────────────────────────☆
nuonuo12 (快哉风) 于 (Sat May 5 09:12:08 2012, 美东) 提到:
第一卷连接：
http://www.mitbbs.com/article_t2/Chicago/31695989.html
封神2012 （八十） 昆仑
狂风怒号，雪花纷飞，山坳中还不时飘过一阵浓雾，纵然是在白天，也只能看到数尺之
内，稍不留神，就会摔落万丈悬崖。
在过去的十多天中，殷飞好多次都认为自己将会把性命送在这昆仑山中。上个月，他离
开芝加哥参加十五年一度的玉虚仙葩大赛。在北京短暂停留后，又乘飞机来到青海西宁
，然后根据预先龙菁菁给他设计好的路线，各路火车汽车七转八换，来到了一个偏远得
不能再偏远山脚下的小村，在农家的土炕上休息一晚，翌日清晨便独自背着背包踏入了
莽莽苍苍的昆仑山中。
经过一年来跟着龙菁菁的修炼，殷飞的修为又有了新的突破，勉强进入了第七品。这个
进展导致了殷飞的极度自我膨胀。根据阐教规定，修为在七品以下的弟子，必须由师长
陪同前往昆仑阆苑境参加玉虚新锐大赛，而达到七品及六... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 46 四、观行蕴处界我之生起次第
次叙蕴我、处我、界我，及其生起次第，广令佛门四众可以依之实地观行而断我见
。若此界众生能断我见之人数极众者，则此界将可渐转清净，由众生之净业因缘故，可
以渐渐成就人间净土也。若佛门弟子中之多数人已断我见者，则必舍弃世相法上（广建
寺院、追求佛教界第一）之营谋，而开始注重人类心性之改善：以教导众生断除我见为
主要弘法内涵，以教导众生舍离我所（财色名食睡）之贪著为主要内涵，即可令社会清
净而不再有人干犯恶业、作奸犯科，则使国土渐转清净，人寿亦可因而渐次增长，福报
亦可因而日渐转增，从此以后，不再以建造金碧辉煌、一尘不染之寺院而可名为人间净
土也！人间净土之成就，在于心净则土净，而非泥土大地之清净故；心方是真实之土故
，众生心净则国土亦将随之渐渐清净，净业使然故。如是方是真实人间净土之建设者。
甲、五蕴我
五蕴我者，谓色蕴、识蕴、受蕴、想蕴、行蕴。蕴者何义？谓众集义、积聚义。
色蕴者，谓人类色身由四大物质所造成，经由父精母血而成就，经由四大所成之食
物而长养，是故新陈代谢、念念变异、生住异灭，由生而长，由长而变异、而老，由老
而死；有生则必有灭，是由物质... 阅读全帖 |
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j*******x
发帖数: 24 | 47 第二十六集
第一章
一股暗黑色的铁流涌入大雪覆盖的三川口。镶着蹄铁的马蹄溅开积雪，捧日
第六军骑兵潮水般驰骋而来。冲在最前方的是骁骑营的军士，他们卸去甲胄，轻
骑突进，在距离溪水还有五十步的位置便张开角弓，箭矢雨点般朝敌寇射去。
沿溪守御的雇佣兵分成两列，敖润带着数十名雇佣兵守在溪后，他挥舞长刀
劈开几枝箭矢，然后反手摘下铁弓，展臂挽成满月，瞄也不瞄便将最前面一名骑
手射下马来。佣兵们发出一片欢呼，弓手纷纷张弓搭箭，还有几名擅长甩石的汉
子则用皮绳兜起石块，在头顶甩了几个圈子，接着奋力甩出。
矢石交错，双方各有损伤，但骁骑营射来的箭矢无论数量还是力道都远远超
过佣兵，这一轮较量无疑是雪隼团吃了亏。
很快骁骑营距离溪水只剩下十几步，佣兵的暗器开始出手，第一轮的飞蝗石
和袖箭不约而同打向骁骑营的坐骑，尤其是马匹的眼睛。最前面六七匹战马嘶鸣
着栽倒在地，将马背上的骑手抛开。
第六军两千骑兵作为捧日军的精锐，奉命出击，却被对手引得大兜圈子，折
腾半日也没能好好打上一场，全军上下都憋着一口气。这会儿与中军大军只隔着
两道溪流，一个冲锋就能将敌寇灭掉，士气高涨。面对射来的飞石、暗器，骁骑
营毫无惧... 阅读全帖 |
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c****t
发帖数: 19049 | 48 “春天……好多感觉挤到一块儿，累人呢，秋天多好。”
罗辑停了车，和她下车来到田边，看着几只喜鹊在地里觅食，直到他们走得很近了它们
才飞到远处的树上。接着，他们下到一条几乎干涸的河床里，只在河床中央有一条窄窄
的水
流，但毕竟是一条北方的河，他们拾起河床里冰冷的小卵石向河里扔，看着浑黄的水从
薄冰
上被砸开的洞中涌出。他们路过了一个小镇，在集市上逛了不少时间，她蹲在一处卖金
鱼的
地摊前不走，那些在玻璃圆鱼缸中的金鱼在阳光下像一片流动的火焰，罗辑给她买了两
条，
连水装在塑料袋里放在车的后座。他们进入了一个村庄，并没有找到乡村的感觉，房子
院子
都很新，有好几家门口停着汽车，水泥面的路也很宽，人们的衣着和城市里差不多，有
几个
女孩子穿得还很时尚，连街上的狗都是和城市里一样的长毛短腿的寄生虫。但村头那个
大戏
台很有趣，他们惊叹这么小的一个村子竟搭了这么高大的戏台。戏台上是空的，罗辑费
了好
大劲儿爬上去，面对着下面她这一个观众唱了一首《山楂树》。中午，他们在另一个小
镇吃
了饭，这里的饭菜味道和城市里也差不多，就是给的分量几乎多了一倍。饭后，在镇政
府前
的一个长椅上，他们在温暖的阳光... 阅读全帖 |
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S**C
发帖数: 2964 | 49 六朝云龙吟
内容简介：
汉国朝会时论及王哲与左武军大败之事，众人皆知是汉国天子为争权而旧事
重提，只有程宗扬是真心想找出究竟谁是幕后主使者，泄漏军机致使王哲就此殒
命？
天子藉由八校尉的职位笼络韩定国，偏偏韩定国是黑魔海的人，更是小紫迁
怒的对象。程宗扬与卢景原想先下手为强，但韩定国将赴宴地点防范得滴水不漏、
处处陷阱，让程宗扬与卢景束手无策。小紫依然不见踪影，只有与她形影不离的
雪雪独自出现，更令程宗扬忧心不已……
第二十四集
第一章
“天子问，有什么生意能在三个月内赚得两三倍的利钱？”
左悺尖细的声音还在殿中回荡，几名中常侍一个个目瞪口呆，一时间殿内安
静得针落可闻。
半晌唐衡才道：“蔡常侍去找天子借钱了？”
“你们怎么知道？”左悺道：“不过不是借钱。蔡常侍私下求见天子，说他
夜观天象，山阳一带当出金砂，其值以亿计，求天子从内库拨一千万钱，由他去
山阳采金，如果三个月内不见效，愿付首级。”
众人都围上前去，“他要去当阳采金砂？”
“其值数亿？还拿性命担保？”
“天子根本就不信他那一套，”左悺道：“什么山阳有金砂？山阳挖了多少
年铁了，连根金毛都没见着。多半是他找到什么来钱的路子，想... 阅读全帖 |
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a*******2
发帖数: 465 | 50 达真堪布宣讲于2015年极乐法会
为修持成佛要发殊胜菩提心！
为度化一切父母众生要发誓修持成佛！
为早日圆成佛道要精进认真闻思修行！
今天是极乐法会的第三天。极乐法会期间，我们所用的仪轨是列绕朗巴大师的《阿
弥陀佛修法极乐捷径》。这是莲花生大士的法，莲花生大士当时造这个仪轨的时候，只
传给了身边的几个人，并没有公开传，然后就伏藏起来了。后来由列绕朗巴大师取出了
此伏藏，把这个法传扬开。
喇荣开极乐法会的时候，主要用的是这个仪轨。列绕朗巴大师是上师如意宝的前世
，也是一位非常殊胜的伏藏大师，他的伏藏非常珍贵，所以上师当时用了这个仪轨。
修此法也要获得灌顶，上师如意宝每年开极乐法会的时候，也会给大家灌顶。在座
的很多人虽然没有得到《阿弥陀佛修法极乐捷径》的灌顶，但是得到过其他的灌顶，比
如说得到过《金刚萨垛修法仪轨》灌顶，这样也是一样的，也可以修持此法，也可以念
诵这个仪轨。
此法也要得到传承才可以修，因为这是密法，没有得到传承是不允许修持的。尽管
很多人都得到过这个传承，但也有新皈依的、新学佛的人没有得到过这个传承，今天我
可以给大家传承。
首先，我给大家简单地讲一下这个修法仪轨的内容。... 阅读全帖 |
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