y*********e
发帖数: 10 | 1 小弟准备做免疫荧光染色，一抗是小鼠来源单抗（IgM kappa 链），二抗需要的是带荧
光标记（绿色红色都可以）的抗小鼠 IgMk抗体。二抗物种来源无所谓。
抗IgM的二抗本来就不多，再加上是一抗是kappa 链，更难找了，求各位帮我找找合适
的二抗。文献里提到的二抗公司已经倒闭了，根本找不到。千恩万谢。 |
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t******k
发帖数: 599 | 2 发现mouse和rat一抗共染，然后用invitrogen的alexa二抗发现有很多cross
reactivity.不知道有没有啥好的二抗推荐可以避免这个问题呀、、 |
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y*********e
发帖数: 10 | 3
因为一抗是IgMk啊，所以二抗必须要针对IgMk.因为要做荧光染色，所以要有荧光标记
。二抗物种来源无所谓是因为不需要特殊物种的，我只是需要检测荧光。谢谢 |
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d****i
发帖数: 2346 | 4 我们使用的是荧光二抗，就是licor的那个，不是HRP，做某蛋白的磷酸化分析，
western。
问题一，一般是先上磷酸化抗体，strip之后再上total抗体，但是这种二抗strip掉信
号很困难，大家有什么好办法？
问题二，western里有磷酸化抗体的信号，total蛋白的信号，还有actin的信号，怎么
计算磷酸化信号的强弱？
谢谢！ |
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t******k
发帖数: 5617 | 5 可以加牛奶。一抗如果是单抗一般使用BSA，多抗一般用脱脂牛奶，二抗统一用脱脂牛
奶。 |
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v***a
发帖数: 1242 | 6 一直用Santa Cruz的兔二抗做WB（$70），但最近的一个lot感觉不行，老是有IgG的
band在50那，很烦人。请大家推荐一个价格类似，lot质量稳定的兔二抗，谢谢！ |
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m*******e
发帖数: 90 | 7 我有一个不带任何标记的mouse anti rabbit二抗，请问做ｗｅｓｔｅｒｎ的时候应该
怎么用？
可以把它和ＨＲＰ－conjugated anti-mouse二抗混合在一起用吗？还是要一个一个依
次分别孵育？
请做过的大牛们给点意见，谢谢啦～ |
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m*******e
发帖数: 90 | 8 我有一个不带任何标记的mouse anti rabbit二抗，请问做ｗｅｓｔｅｒｎ的时候应该
怎么用？
可以把它和ＨＲＰ－conjugated anti-mouse二抗混合在一起用吗？还是要一个一个依
次分别孵育？
请做过的大牛们给点意见，谢谢啦～ |
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L*****t
发帖数: 56 | 9 第一次做磷酸化蛋白，一抗封闭用5% BSA没问题。但是二抗（CST 7074）要求稀释时加
5%脱脂奶（尝试换成BSA/明胶的复方出了很多杂带）, 这个对结果是否有影响？ |
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I***a
发帖数: 13467 | 10 今天翻出n多带标记的二抗，做western blot的，HRP标记的
还有FITC标记的，
估计10年都用不完，有些放在4度，好几年，有的在－20度，
一抗也不少
不知道还用么？
有用的话，怎么长期保存，
吐槽一下，真他妈的汗，多少年没人做western blot，试剂一大堆。 |
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s******r
发帖数: 2876 | 11 一般加成50%甘油，-20C可以放个3-5年
今天翻出n多带标记的二抗，做western blot的，HRP标记的
还有FITC标记的，
估计10年都用不完，有些放在4度，好几年，有的在－20度，
一抗也不少
不知道还用么？
有用的话，怎么长期保存，
吐槽一下，真他妈的汗，多少年没人做western blot，试剂一大堆。 |
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s********o
发帖数: 91 | 12 最近实验室买了zeiss的远红filter，就试着用了羊抗兔的cy5二抗。但发现在high
magnification （63X）照相后，信号递减特别明显，基本上照一次之后就没有信号了
。同时拍照的还有hoechst和gfp。已经尽量缩短曝光时间了。是不是我用的时候出问题
了？ |
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I*****y
发帖数: 6402 | 13 二抗也用BSA，奶粉里可能有phosphatase |
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m***0
发帖数: 7 | 15 为什么不直接用不同颜色的荧光二抗，就不用strip了 |
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v***a
发帖数: 1242 | 17 谢谢！准备试试。上次买了个rockland的二抗，结果p也没有，吓得不敢乱买了 |
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j****n
发帖数: 3370 | 19 二抗很便宜。。。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.6 |
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a*****3
发帖数: 565 | 20 我很久以前做过IHC，但也做得不多，那时我们都是用一抗加二抗做的，现在的老板
喜欢直接用荧光标记的一抗，不知道这样做出来效果和加二抗哪个好？我没做过直接
加荧光标记的一抗，所以也不清楚哪种效果好，老板说直接用荧光标记的一抗，不加
二抗能减少干扰，但我觉得二抗能放大信号，洗得干净的话不会有很深的背景，谁有
经验的给说说呀，我老板他自己也没什么IHC经验，他以前倒做过Flow Cytometry,那
都是直接用荧光标记的一抗，所以他就说要用荧光标记的一抗直接做。
另外再问一下，做组化是用OCT包埋好还是石蜡好呀？是小鼠脑组织。 |
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i***0
发帖数: 160 | 21 GFP有自发荧光，如果做GFP的immunostain， 得避开其自发荧光的区域 （ex/em：485/
525）
另，你的negative control是什么？ 不表达GFP的细胞，还是表达GFP的细胞不加一抗
？ 如果第一次做，最好两个control都上一下， 这样便于trouble shooting。如果你
染的是组织切片，只加二抗的control会有荧光，尤其血管区，因为有IgG。比较样本染
色，其有正信号，而control没有信号的区域显示有该蛋白的表达
如果你染的是细胞，只加二抗看到的均匀的荧光背景，则如2楼所言；如果看到点状荧
光，则多为二抗没有洗干净。 |
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D**e
发帖数: 3675 | 22 是时候说说另外一个超级无敌龙套，抗兄啦。
说起抗兄的出现，还有一段小插曲。当时他的ID是ADOMET（@8），立刻就有人问，是不
是我和抗兄要在8点有个约会。。。一直到今天，我也没明白这个ID的来历，不知道抗
兄可否解释一二？
抗兄于是就这么一直潜伏着，话不多，可是一直在。说实话，抗兄真的挺抗郁闷的。因
为他话虽然不多，却总是说在点子上。
更为重要的是，我查了查历史，每次有重大事件发生的时候，抗兄总是默默地支持中学
，包子是捐了不少，名却不怎么留。记得以前看 richard helms (前CIA头目的回忆录
，他写到：in Washington DC, you can get anything done if you don't care who
gets the credits. 我不得不承认，这是我欣赏的一种男生的品行。
我想，正是抗兄这样超级无敌潜水员的存在，才使得中学像一个家。一个你无论走多远
，你都知道你可以随时回来，并且永远会有人为你留一盏灯的家。 |
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P*******i
发帖数: 10965 | 23 好同学
是时候说说另外一个超级无敌龙套，抗兄啦。
说起抗兄的出现，还有一段小插曲。当时他的ID是ADOMET（@8），立刻就有人问，是不
是我和抗兄要在8点有个约会。。。一直到今天，我也没明白这个ID的来历，不知道抗
兄可否解释一二？
抗兄于是就这么一直潜伏着，话不多，可是一直在。说实话，抗兄真的挺抗郁闷的。因
为他话虽然不多，却总是说在点子上。
更为重要的是，我查了查历史，每次有重大事件发生的时候，抗兄总是默默地支持中学
，包子是捐了不少，名却不怎么留。记得以前看 richard helms (前CIA头目的回忆录
，他写到：in Washington DC, you can get anything done if you don't care who
gets the credits. 我不得不承认，这是我欣赏的一种男生的品行。
我想，正是抗兄这样超级无敌潜水员的存在，才使得中学像一个家。一个你无论走多远
，你都知道你可以随时回来，并且永远会有人为你留一盏灯的家。 |
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r****o
发帖数: 105 | 24 可以是可以，但是没有什么意义。因为最后拿到的片子，没有办法分辨那条带
是由哪个抗体识别。所以，还不如同时跑三组，然后平行用三种一抗做。或者
一个BLOT，洗脱前一个抗体后再做第二种.
我能想到的唯一一种用不同抗体的办法是最近的一种新技术，荧光Western.
具体就是说，二抗不联HRP而是联一个荧光生色集团，用近红外光照射后就会发射
荧光。然后有特殊机器扫描记录。由於不同生色团发光颜色不一样，可以同时
展示同时区分两种带有不同TAG的蛋白。 |
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s******y
发帖数: 220 | 25 我做WB detect 心肌细胞的CamKII，（50-60KDa）我用的一抗是mouse host的。结果二
抗总是识
别老鼠的IgG， 在25 和50Kda 处有带。也不知道目标蛋白有没有。
除了换一抗，有什么别的解决方法吗？
多谢了。 |
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Z**********g
发帖数: 222 | 26 可能是你样品的问题,估计你样品混了太多血液成分?当然换一抗host,从而换掉二抗应该可以解决. |
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C*******e
发帖数: 4348 | 27 你要说明白吧
兔抗鼠？兔抗鸡？
什么conjugation？ |
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f*****f
发帖数: 195 | 28 普通WB的话不正常，排除样品混串，假如标其它一抗也这样的话就是二抗原因。不过这
个概率真的是非常非常小。
IP后有重band有时很正常，减弱/消除方式：Ab conjungation with beads，IP和
detection用Abs from different species。 |
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y****y
发帖数: 123 | 29 德国一家公司的CD31据说是唯一可以染老鼠paraffin的
但是好像二抗那步比较麻烦
明天去看看号
顺便问一下BD的CD31染冰冻用什么固定比较好?
formalin可以么 |
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g*****n
发帖数: 250 | 30 在一抗前，用anti-m 抗体封蔽。脑子都抠出来了，切一半做WB, 那还怎么灌？ |
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b*****s
发帖数: 169 | 32 能剪开的剪开分开做，二抗一样的话也可不剪开，但前提是你对这些抗体的特异、非特
异性条带心中有数，尤其是CoIP的样品。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 33 那个是让用户自己进行化学连接来标记的。让你可以想标记什么就标记什么。
想你这样没有经验的人不要乱用。
你最好直接买一个已经有标记的抗体用。
另外，如果你有两个不同的蛋白需要标记，最好是一个一个的来，把一个做完成像之后
洗掉strip 掉之后再做第二个。 |
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w**********g
发帖数: 1985 | 34 抗药性与抗教性——谨以此文纪念毛泽东主席诞辰118周年
黎阳
2011．12．21．
一．中国历史性社会性特色之一：全民性的“抗教性”
二．中国历史性社会性特色之二：根深蒂固的“私人关系大过原则规矩”的社会意识
三．两大历史性社会性特色决定中国走不通西方那样的资本主义道路
四．毛泽东用公有制解决了“抗教性”这一千古难题
五．通向崩溃和内战之路
六．崩溃和内战与回归毛泽东
一．中国历史性社会性特色之一：全民性的“抗教性”
1．曾经沧海难为水
2．宗教的共同之处
3．沉重的历史遗产——全民性的“抗教性”
1．曾经沧海难为水
刚到美国时经不住几个热情拉我入教的教徒的三请四邀，也出于好奇，跟着到教堂听了
一次布道弥撒。之后他们问我有什么感想。我说：“跟‘活学活用毛主席著作 讲用会
’差不多，也是‘带着问题学、活学活用、学用结合、急用先学、立竿见影、在用字上
狠下功夫’、‘带着感情学’、‘把自己摆进去’、‘要斗私、批 修’、‘狠斗私心
一闪念’、‘灵魂深处爆发革命’、‘按照最高指示联系实际对照检查’、‘早请示、
晚汇报’、‘思想爬坡’、‘忠不忠，看行动’……不同的 是把赞美对象换成了‘上
帝’。... 阅读全帖 |
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c*****1
发帖数: 3240 | 35 ☆─────────────────────────────────────☆
Esquimau (雪门院) 于 (Mon Sep 24 23:20:41 2012, 美东) 提到:
为避免贴子过长，新开一贴继续贴自己的《通鉴》笔记，从晋朝开始。
晋纪一
世祖武皇帝上之上 泰始元年（265年）：八月，司马昭卒，昭长子炎为晋王。吴主迁都
武昌，丁固、诸葛靓守建业。十二月，魏帝禅位于晋，降为陈留王，居邺。晋王即皇帝
位，尊封族亲诸王。帝承魏氏奢侈浮华，矫以仁俭。
二年（266年）：永安山贼施但作乱，北至建业；丁固、诸葛靓平之。十二月，吴主还
都建业。
三年（267年）：春正月，立司马衷为皇太子。夏六月，吴主作昭明宫。
四年（268年）：正月，贾充等修律令。吴施绩寇江夏，万彧寇襄阳；刘俊等三攻交趾
；丁奉、诸葛靓攻合肥，皆败师。
五年（269年）：帝有吞吴之志，使羊祜都督荆州，卫瓘都督青州，司马佃都督徐州。
安置西蜀人才（诸葛亮之孙京等）。吴主遣虞翻、李勖等会于合浦，以击交趾。
六年（270年）：吴左大司马施绩卒，陆抗统军；何定权盛。胡烈讨鲜卑不克。南匈奴
五部居并州诸郡，改姓刘氏... 阅读全帖 |
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d*******i
发帖数: 1423 | 36 抗药性与抗教性
——谨以此文纪念毛泽东主席诞辰118周年
黎阳 2011．12．21．
一．中国历史性社会性特色之一：全民性的“抗教性”
二．中国历史性社会性特色之二：根深蒂固的“私人关系大过原则规矩”的社会意识
三．两大历史性社会性特色决定中国走不通西方那样的资本主义道路
四．毛泽东用公有制解决了“抗教性”这一千古难题
五．通向崩溃和内战之路
六．崩溃和内战与回归毛泽东
一．中国历史性社会性特色之一：全民性的“抗教性”
1．曾经沧海难为水
2．宗教的共同之处
3．沉重的历史遗产——全民性的“抗教性”
1．曾经沧海难为水
刚到美国时经不住几个热情拉我入教的教徒的三请四邀，也出于好奇，跟着到教堂听了
一次布道弥撒。之后他们问我有什么感想。我说：“跟‘活学活用毛主席著作讲用会’
差不多，也是‘带着问题学、活学活用、学用结合、急用先学、立竿见影、在用字上狠
下功夫’、‘带着感情学’、‘把自己摆进去’、‘要斗私、批修’、 ‘狠斗私心一
闪念’、‘灵魂深处爆发革命’、‘按照最高指示联系实际对照检查’、‘早请示、晚
汇报’、‘思想爬坡’、‘忠不忠，看行动’……不同的是把赞美对象换成了‘上帝’
... 阅读全帖 |
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d******a
发帖数: 32122 | 37 ☆─────────────────────────────────────☆
weewow (梭影清遊) 于 (Mon Jul 2 08:45:32 2012, 美东) 提到:
這幾年看MITBBS對香港64集會，71游行的討論，這裡的ID多分為幾個觀點，什麼經濟論
，陰謀論都有。但你們恰恰忽視了絕大多數游行人士走上街的理由---社會公義！
今年游行人數特別多，如果不是湖南殘酷對待李旺陽，如果梁CY光明正大，就不會有那
麼多人冒著酷暑上街游行。大家主要集中在3個訴求：
1. 反對官商勾結
2. 質疑梁振英誠信
3. 為李旺陽伸冤
在香港悶熱的天氣下，幾十萬人在太陽下走5個鐘头，從年逾古稀的老人，到十幾歲的
中學生，90%的游行人士為的是香港的核心價值--公義，自由。
或許，公義二字在大陸社會早已被淡忘了，所以大陸人對港人游行的反應是各種可笑的
揣測。
走在游行隊伍中，都是自發前來的各個階層人士，我們為的不是私利，而是用腳實踐公
民責任。公民有責任推動社會公義，有責任監督政府，有責任為弱勢人群發聲！
暴力抗爭，50年前香港也搞過。今時今日，社會進步孕育出香港的公民社會。大家... 阅读全帖 |
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c****x
发帖数: 6601 | 38 【明報專訊】中共決策領導諸君：
8年抗日戰爭，在中華民族戰史上歷時最久，長達8年1個月又8天；戰場的面積最廣，達
500萬平方公里；犧牲最為慘烈，軍民多達2000萬人傷亡，戰果也最悲壯輝煌，是中華
民族最珍貴的精神資產，也是愛國教育最好的題材。
第二次世界大戰期間，唯有中國是以貧窮落後、軍閥割據的弱國，對抗世界第一流強權
的日本帝國主義，是反侵略的正義戰爭，靠全民奮戰到底的意志和精神力優勢，贏得最
後勝利。其他同盟國以美英蘇為主，面對的軸心國德意日，皆屬已開發的國家。他們都
能製造飛機、大炮、戰車等精良武器，交戰的本質是為了霸權，決勝的核心是物質力，
與中國抗日的本質不同。
精神力優勢的形成與發揮，抗戰初期的國共第二次合作，起了很大的作用，但其領導人
是國民黨總裁蔣介石先生。他克服了日本誘和、汪精衛投降、國共摩擦等內憂，以及國
際觀望、盟友出賣等外患，堅持抗日第一、抗戰到底的意志，才贏得最後勝利。老實說
，沒有蔣先生的領導，就沒有抗戰的勝利，以及中華民族的雪恥復興，這是鐵一般的事
實。
第二次大戰後，日本不承認南京大屠殺，不承認侵略，在其歷史教科書中，以「進出中
國」代替「侵略中國」，... 阅读全帖 |
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g**1
发帖数: 10330 | 39 不甩陸抗議？美二戰紀念官網列入「中華民國國徽」
2015-09-04 10:07:53 中央社 華盛頓3日專電
圖擷自美國二戰紀念官網
分享雖然面對中國大陸抗議，美國國家二戰紀念碑之友會還是將中華民國國徽放置在官
方網頁上，與二戰同盟國成員並列。
由美國國家二戰紀念碑之友會與聯邦政府機構國家公園管理局，2日共同主辦「盟軍對
日作戰勝利70週年紀念」儀式，中國大陸駐美大使崔天凱因中華民國國徽出現在儀式上
，以及中華民國駐美代表沈呂巡受邀出席獻花，未在活動現身。
美國華府二戰紀念碑2日舉行二戰對日作戰勝利70周年紀念儀式，我國在致敬儀式上使
用的花圈(左)掛有國徽，中共外交人員抗議未果，中共大使崔天凱因此缺席。 記者賴
昭穎／攝影
分享
北京為爭奪對日抗戰話語權，活動邀請發出後即向主辦單位與國務院抗議施壓，認為官
方性質活動需遵守「一中原則」，儀式手冊與官方網站，不得出現中華民國國旗與國家
象徵，中方雖在活動現場抗議，但抗戰期間廣為使用的中華民國國徽，仍與戰時盟國旗
幟或標識並列。
不過抗議歸抗議，活動官方網站今天在太平洋戰區盟邦頁面中，將原本未出現的青天白
日國徽與駐美代表處同時列出，跟... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 40 中国工程院院士、国家卫健委高级别专家组成员李兰娟17日在武汉接受中新社记者专访
时表示，只要把传染源100%找出来且有效控制、对已发现病人采取针对性治疗、把感染
者进行隔离，感染人数就应该会降下去、外界就是安全的。
“除湖北以外各省，我认为(疫情形势)逐渐出现了好转。”李兰娟说，湖北及武汉当前
采取了非常有力的措施。中央提出了“应收尽收、应治尽治”，武汉市部署落实5个“
百分之百”举措。随着这些措施的落实到位，武汉的疫情也会慢慢控制下来。
湖北省在将临床诊断病例纳入确诊病例后，重症患者人数出现一定程度上升。李兰娟认
为，“目前还有相当数量的重症、危重症的患者群体”确实是武汉急需解决的难题之一
。“我们看到有些病人病情进入晚期，多器官功能出现衰竭，这给挽救增加了很大难度
。”
她说，新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第五版)将血液净化、血浆治疗、微生态
平衡等内容写入其中。呼吸机、血液净化系统正确运用，细胞因子风暴早期应对，这些
方法得当将大大降低病患从重症发展到危重症的概率，新冠肺炎病死率也会随之下降。
近期受访，李兰娟曾多次提及“四抗二平衡”治疗方案在抗击新冠肺炎疫情中的应用。
据... 阅读全帖 |
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s******r
发帖数: 2876 | 41 这个sample本身就比较稀，第一条lane已经是1:5稀释，后面是1:25, 1:125稀释。
所以western 本身的问题应该不大，主要是想看看在我手里ECL和Odyssey哪个好使，
可能二抗和blocking buffer都不够好，所以我这个看起来Odyssey比普通ECL要弱上
几倍。
actin，我的理解是表达极强的蛋白。基本可以看作是housekeeping，做loading
control。所以应该是极强，至少也是很强。在默认设置下，应该是强信号，甚至是过
饱和。这种背景还算低，但actin信号几乎没有的情况，说明western本身有问题。
如果其他步骤没有出差错的话，最大问题就是二抗-milk组合出了问题。
odyssey是不推荐使用奶粉的。就是因为它太灵敏，牛奶甚至普通bsa的背景太高。
因为很多公司这么做，所以我怀疑licor也可能会这样。licor一向推荐自己出的二抗和
blocking buffer。尤其是后者，比牛奶和bsa都贵很多，是他们公司主打消耗品之一。
他们非常不愿意见到客户用廉价的奶粉。别家出的二抗他管不了，但是自家的二抗，很
可能有什么技术，... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 42 现今，新冠肺炎疫情在中国已得到初步控制，而在全球则呈现加速蔓延的
趋势。每天公布的疫情数字后面是一个个鲜活的生命正在遭受疾病的折磨和死亡的威胁
。全球抗击新冠肺炎是系统工程，支离破碎的措施不可能取得成功。中国抗疫模式、韩
国抗疫模式、日本抗疫模式、俄罗斯抗疫模式、新加坡抗疫模式等，均有助于促进全球
抗击新冠肺炎的体系构建。局限于本人见识，本文主要简述中国抗疫模式对于全球抗击
新冠肺炎体系构建的启示。中国人民特别是湖北人民付出巨大代价而获得的抗疫经验与
方法，弥足珍贵。抗疫的一般规律、基本原理在不同国家、不同地区都是存在的，各国
、各地根据中国、韩国、日本、俄罗斯、新加坡等国的抗疫经验，寻找抗疫的一般规律
、基本原理，并结合本国、本地的实际情况进行调整，就可以发展出体现本国、本地特
殊性的抗疫模式。
中国可供世界各国参考的抗疫经验是：
一、政府层面：应当高度重视，及早行动。
1、全面检测：采用“早发现、早报告、早隔离、早治疗”的原则，对出
现新冠肺炎症状者、病毒感染者、疑似病例、密切接触者进行... 阅读全帖 |
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b******n
发帖数: 4225 | 43 1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在 这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的 价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗
体质量可以，但是选用 Santa的单抗还是有风险，估计这也是业界共识了吧。
进口抗体国内分装包装我也用过不少，呵呵，毕竟是穷人（420元/100微升），大概好
抗体的比例约为50%，如果能做出来，也存在一个问题，就是... 阅读全帖 |
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i****g
发帖数: 3896 | 44 写得比较有意思，但是不太实用，可能实验条件相差太大。precast gel比自己制的gel
效果要好很多，结果也容易重复。antibody要看运气的，呵呵。
1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在 这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的 价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗
体质量可以，但是选用 Santa的单抗还是有风险，估计这... 阅读全帖 |
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w********h
发帖数: 12367 | 45 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: bulletin (bulletin), 信区: Biology
标 题: 穷人的劳斯莱斯——五年western经验谈（转）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Mar 2 23:29:05 2012, 美东)
1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在 这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的 价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10... 阅读全帖 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 46 actin，我的理解是表达极强的蛋白。基本可以看作是housekeeping，做loading
control。所以应该是极强，至少也是很强。在默认设置下，应该是强信号，甚至是过
饱和。这种背景还算低，但actin信号几乎没有的情况，说明western本身有问题。
如果其他步骤没有出差错的话，最大问题就是二抗-milk组合出了问题。
odyssey是不推荐使用奶粉的。就是因为它太灵敏，牛奶甚至普通bsa的背景太高。
因为很多公司这么做，所以我怀疑licor也可能会这样。licor一向推荐自己出的二抗和
blocking buffer。尤其是后者，比牛奶和bsa都贵很多，是他们公司主打消耗品之一。
他们非常不愿意见到客户用廉价的奶粉。别家出的二抗他管不了，但是自家的二抗，很
可能有什么技术，保证它与奶粉和普通bsa不兼容。
下面有两个选项可以尝试一下。
1）改用licor专用blocking buffer试一下。
2）改用别家二抗试一下。（rockland, invitrogen等公司都有比较成熟的红外荧光二
抗）。
2个选项交叉试一下，一共4种条件（含原先二抗-奶粉组合）。有了这四种对... 阅读全帖 |
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z**********e
发帖数: 22064 | 47 http://hx.cnd.org/?p=111572
二，军方连环计是“融安、里高”事件翻版
小平头
（一）起底军人集团连环计
“兵者，诡道也。”1968年柳州造反派“5.21”抢援越物资、“5.25”抢围剿部队的枪
，可以说是军人集团力挺韦国清为首的广西当局实施的非常举措，是经过周密策划的连
环布局，层层剥笋，步步惊心。而最终的目的是倒逼毛中央抛弃造反派依靠军队。实际
上是一个“连环手”，第一手是“5.21”抛以诱饵子弹，第二手则依托第一手顺势而出
，“5.25”再假收缴子弹部队之手，拱手送出七百多支与之匹配的五六式冲锋枪。以“
常规”的形式造成了日后一个“非常规”的战略态势。
这就是“连环手”中的第二手。第一手是明手，第二手是暗手；第一手只是虚晃，第二
手才是扑杀。一招占先，全局改观——这是军人集团倒逼毛泽东依靠军队牺牲造反派的
杀手锏！
图1：中共文革密档《柳州铁路局文革大事记1966.6—1976.10》中共柳州铁路局整党办
公室，1986年10月编印。盖上“机密”的印戳，内部印发，编号登记。
这绝对是个套。所有的表面文章好像都是对韦国清不利。但是台面下的实际情况不一定
是这... 阅读全帖 |
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t*******a
发帖数: 4055 | 48 抗朝援美专家共同体浮出水面！瞧瞧北大院长对朝核危机的一派胡言！
点击：396 作者：朱志华 邋遢道人 来源： 新民学社 发布时间:2017-09-16 11:
50:41
北大国际关系学院院长贾庆国在首尔参加韩国的防务对话会前夕，接受中评社
记者采访，就朝鲜第六次核试验表述自己观点，反复读之，终于悟出其基本思维可概括
为二条：
第一，认为朝鲜半岛核危机发展到今天的结果，责任一在朝鲜，二在中国;
第二，现在的重大问题是要与有关各方，当然主要是美国沟通研究对朝鲜进行军事打击
的预案。
其论点论据完全是站在美韩立场上，以其特殊的身份职务，来误导中国外交决策和社会
舆情，不但要我与虎谋皮，更要我为虎作伥，完全背离了中国外交的社会主义核心内涵
，严重损害中国的国家利益和国家形象，颠覆了我国一贯的在朝核问题上的原则和底线。
贾庆国称，朝鲜于中国主办金砖会议时进行核试验，在中国主张半岛无核化和时间节点
是“错上加错”，此话国人尚能接受，但通观其全部讲话，絲毫无半点对美国批评谴责
之意，完全罔顾半岛危机历史发展由来和造成今天事态的美国责任甚至是主要责任。
须知朝鲜战争停战后，我... 阅读全帖 |
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i****r
发帖数: 1803 | 49 内容简介：
迷男大大的又一部力作，一曲香艳的仙侠之歌。
散者，即无拘无束，逍遥自在。散仙者，诸仙之末，或逍遥于深山海岛，或淡隐于
街井闹市，低者不过丹卜之流，高者却堪比大罗太乙，鸿蒙至今，流传着无数光怪陆离
的奇人异事。
散仙，似仙非仙、是人超人的特殊身分，而崔小玄正是玄教内的除魔小散仙，身负
先天太玄的崔小玄正是不属九幽十类，不入六道轮回，不在三界五行的太古散仙玄狐转
世。
和其他散仙的小小不同之处，便是他醉心于异宝新术的发明，不过，超越常规的发
明总需要付点代价，而最常碰到的代价就是……无敌将军大暴走啦！！！
日月新帝大兴土木建造迷楼，悄悄吸取十九灵脉精华，玄教查出这迷楼可能源自於
叛教逆徒之手，为了维持天下苍生万物，玄教教主特指派如意仙娘崔采婷入京，而这回
，下山除魔的名单上也多了从未见识过花花世界的崔小玄……
且看一个贪玩小散仙遨游天地，游戏于诸多妖娆之中香艳的故事。
罗袜高挑，肩膀上露两玩新月；
金钗斜坠，枕头边堆一朵乌云。
誓海盟山，博弄得千般旖旎；
羞云怯雨，揉槎的万种妖娆。
恰恰莺声，不离耳畔；
津津甜唾，笑吐舌尖。
杨柳腰脉脉春浓，樱桃口微微气喘。
星眼朦胧，细细汗流... 阅读全帖 |
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S*******C
发帖数: 7325 | 50 ☆─────────────────────────────────────☆
ccccmm (猪喂曼玉) 于 (Mon Feb 8 16:47:33 2010, 美东) 提到:
发信人: Heliyaoqiu (合理要求), 信区: Seattle
标 题: 有關抗戰的那些八卦（長篇連載）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Feb 5 16:29:59 2010, 美东)
（1）闖關東
話說當年滿清入關以後，定都北京，而東北地多人少，一片荒蕪。爲了建設革命老區，
滿清政府決定搞一個“東北大開發”，爲了吸引漢人去開荒種地，政府推出了很多優惠
政策。
有些啥優惠政策呢？除了在稅收上給以很大的減免外，對於投身東北部建設的的幹部群
眾實行免費住房，醫療，入學政策，簡直就是局部進入社會主義，條件只有一個，就是
在戶口本上要改為東北戶口。
按說這條件夠優惠了的吧？可是居然沒有什麽人去。原因嘛，首先是因為中國農民的鄉
土觀念非常深厚，一說到“背井離鄉”四個字，也不管是外出發財，還是流亡跑路，都
是一副淒淒慘慘的感覺，所以政策雖然很優惠，但是報名者并不踴躍。另外一個原因嘛
，大... 阅读全帖 |
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