由买买提看人间百态

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全部话题 - 话题: 上膜
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g*****p
发帖数: 451
1
你确信你的蛋白是膜蛋白?做过细胞定位么?
很多膜蛋白的猜测都取决于疏水区的预测
而疏水区有可能只是在折叠的时候位于蛋白核心而已,不见得真的是膜蛋白
你的结果不是意外不意外的问题
如果我看了这样的实验结果,直接会强烈质疑你文章的技术方法的可性度
从你对膜蛋白确证以及测活的方法学一定会要求你逐步讲个清楚
再没有合理解释之前,我完全无法信任你基于该蛋白的任何重要发现的claim

发帖数: 1
2
来自主题: Biology版 - 单独表达膜蛋白的跨膜区
第一个建议真的很有用 我一定试试
A和B确实都是一次跨膜蛋白
我也非常怀疑是否是false positive
确实用的NP40 buffer 提全蛋白(7号针头抽吸)
但现在结果是A和B的全长和cleavage都作用
而且cleavage要比全长作用强很多 且cleavage在胞内部分
所以我想这样B cleavage是否就不算膜蛋白 也就不行成micelle
为了避免这种可能 所以做截段看作用位点 这样也能抛开膜蛋白特性
不管如何还是希望尽快确定是false还是true

RIPA
P*********e
发帖数: 112
3
RT
就是真空抽滤,具体参数查不到,不考虑具体压力等因素,求问个大概滤纸膜孔半径大小
要让10kD以上的Melonoidins分子在滤纸上,
膜孔半径用0.45um(微米,暂时用不了小键盘希腊字)或0.22um的能截住吗?
现在手上只有这两种膜,这两种膜一般能截住多少kD的?
非常感谢!!!
P*********e
发帖数: 112
4
就是真空抽滤,具体参数查不到,不考虑具体压力等因素,求问个大概滤纸膜孔半径大小
要让10kD的Melonoidins分子在滤纸上,
膜孔半径用0.45um(微米,暂时用不了小键盘希腊字)或0.22um的能截住吗?
现在手上只有这两种膜,这两种膜一般能截住多少kD的?
非常感谢!!!
z*m
发帖数: 3227
5
高考枪手“明码标价”指纹膜出破绽老师不阻拦。河南查实高考替考生127人替考大学
生将开除。
考试前,考试组织者向每位“枪手”支付5000元定金,考试结束后将根据成绩补发
“奖金”。
高考枪手
昨日,央视报道有人组织武汉在校大学生“枪手”前往河南杞县等高考考点参加替
考。教育部回应称,已派出工作组赶赴河南省、湖北省指导督办调查。河南省招办回应
称,2014年该省已查实违规违纪考生165人,其中替考127人。
“枪手”价格
一本三万二本两万重点五万
高考前几个月,在武汉大学、武汉理工大学和中南财经政法大学等高校教学楼的厕
所里,出现了招募高考“枪手”的小广告。广告留下的是同一个手机号码。打通这个号
码之后,一个自称是李老师的人提出了应聘“枪手”的条件。
李老师说,他会安排高校的大学生做高考模拟试卷来测试能力。只要测试过关,大学
生就能成为“枪手”了。在与李老师的QQ聊天中,他报出了充当高考“枪手”的价码—
考上二本两万,一本三万,重点一本五万,如果考上了全国名校,酬劳还可以商量。

高考枪手
在当天的测试中,到场的几名枪手最后都顺利通过... 阅读全帖
Z*****l
发帖数: 14069
6
希望柴进来个黑膜吸成白膜的对照。
c****x
发帖数: 6601
7
来自主题: Military版 - 美帝现在最重要的就是除膜慰道
整天戴着那层政治正确和普世价值的膜,不解决实际问题。
每次晚上撕破膜,白天还总得做修复术,还总得保持非常pussy的样子。
现在,美帝问题越来越严重。就要拿出当年殖民时代,佛挡杀佛,神挡杀神的气势。
内里问题严重,就别在乎那层膜了。该上药上药,该煞痒煞痒。
才能maga
g**1
发帖数: 10330
8
狼警性侵國中女因處女膜未破裂 恐龍法官竟發回更審
林保宏
2011年11月23日 10:34
社會中心/花蓮報導
哪有這款警察,竟然「知法犯法」!花蓮縣一名員警,6年前見到一名國二女學生和男
友在校園約會,竟然要脅少女上車並載往海邊性侵。一路上訴到最高法院,竟以前審未
查明員警的性器官大小和興奮程度而於今年初發回更審,被戲稱為「開春第一個大笑話
」。22日最高法院判刑定讞將這名狼警判處11年徒刑。
這起警察化身大野狼的案件,發生在2005年7月4日。任職於花蓮縣新城分局的員警吳錦
榮,當時他身著警察制服,駕駛警用吉普車到一處國小處理民眾紛紛。當時他見到一名
國二女生在廁所外面等人,吳男向前詢問得知她正在等男友,並了解家人反對兩人現在
交往,吳男趁機要脅將她載往海邊,否則就告訴她父母親。
少女擔心吳男會告訴父母,只好同意和吳男前往海邊,並要男友先離開。吳男趁機性侵
得趁後,將少女送往一處國小附近要她自行搭公車回家。少女事後1個月告訴同校學姐
,才讓這起警察性侵國二女的案件曝光。
檢方審理後更一審判處吳男9年徒刑,吳男不服還反控少女誣告。上訴到最高法院時竟
以未查明被告性器官大小和興奮程度... 阅读全帖
s**********d
发帖数: 36899
9
来自主题: Automobile版 - 求推荐做车窗膜的
玻璃没多少钱。打打电话问一问好了,前风挡上门换常不到$200。
侧面的便宜。
贴膜好的要差不多300。便宜的膜和安装1、2百都有,craigslist
上的一般便宜。有的上门做。再想便宜就自己买了弄,但基本只能买到
抵挡的膜,后窗很不容易做。snaptint的膜质量还行。ebay也有,
买切好尺寸的容易一点。
K******S
发帖数: 10109
10
来自主题: Automobile版 - 好Tint用处大吗?选哪个膜?
带金属的膜就足够了,我也在南方,TINT前空调开最大,TINT后开中,低档就够
不过有人抱怨带金属的膜稍微会影响GPS和RADIO。不要用低档的DYE-BASED的膜,时间
长了就变PURPLE了。
c*********6
发帖数: 858
11
来自主题: Automobile版 - 哪里能买到车前窗玻璃膜? (转载)
【 以下文字转载自 SanDiego 讨论区 】
发信人: coldfire666 (coldfire), 信区: SanDiego
标 题: 哪里能买到车前窗玻璃膜?
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Sep 17 12:24:38 2011, 美东)
加州规定车前窗玻璃膜透光性必须大于70%,walmart,autozone看到的最多只有35%,哪
里还能买到70%透光性的玻璃膜?谢谢
x*b
发帖数: 5723
12
来自主题: Automobile版 - tint用什么膜比较好
Mr. Tint应该是性价比最高的一家,手艺和上面两家不相上下,唯一的问题是不Carry
最顶级的膜比如3M Crystalline或Photosync Nano。但是如果Ceramic膜你觉得够用的
的话那他们家绝对是不二的选择,因为他们家那个Ceramic膜也是市面上最好的几个型
号之一,价格大约在$450-500(4+back)。

...
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7
i******4
发帖数: 20643
13
☆─────────────────────────────────────☆
paopaodog (qqlove) 于 (Thu Dec 13 14:16:29 2012, 美东) 提到:
这不神医和护士因为膜的问题吵开啦。。
☆─────────────────────────────────────☆
FDTD (尘埃) 于 (Thu Dec 13 14:27:04 2012, 美东) 提到:
。。。。。。。。

☆─────────────────────────────────────☆
mikelanglang (Death to all who oppose us!) 于 (Thu Dec 13 14:45:51 2012, 美东) 提到:
............
☆─────────────────────────────────────☆
benyang1984 (I shall be your eyes!) 于 (Thu Dec 13 14:55:29 2012, 美东) 提到:
其实没膜可以补的,在乎的是心理上第一次
☆─... 阅读全帖
t*********u
发帖数: 26311
14
【 以下文字转载自 ebiz 讨论区 】
发信人: tingtingliu (Grand Cherokee Overland), 信区: ebiz
标 题: pplar 你来解释一下为啥你能有两台机器的破膜破的几乎一样
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jul 18 08:02:10 2015, 美东)
经高人提点
如果大家还有上次pplar自爆的说收到破膜的货照片
看看那台机器和给我的照片里面的第四台
为啥两台机器破膜的方式和形态都那么一样?
B********n
发帖数: 12753
15
我用英文搜的window pane test,发觉他们所谓的出膜,我肯定早出了
我一直以为出膜得是那种很薄很薄的手套膜。。。。
s**********d
发帖数: 36899
16
来自主题: Living版 - 谁家给窗户贴过膜?
我贴过。二三十一个窗吧。比较好的膜。不懂为啥会影响玻璃保险

我家有几扇窗户下午很晒,虽然也装了帘子,但是还是热。想贴上膜或者用别的什么办
法,最好是无色的膜,看不出来但挡主了紫外线。谁做过,大约多少钱一扇窗?会不会
影响玻璃的保险?谢谢!
f********r
发帖数: 326
17
来自主题: Medicine版 - 急问脊膜瘤
老爸一月前开始晚上腰椎酸痛, 影响睡眠, 去做了CT和核磁共振,发现T7-8水平椎管
内髓硬膜下占位, 2个阴影分别为1.5*1.8cm. 阴影边缘清晰,考虑脊膜瘤可能。
请问:
1)是否建议手术 (老爸快70了)? 风险大么。
2)除了脊膜瘤,有没有其他肿瘤的可能?
谢谢
w**********0
发帖数: 7
18
宝宝出生后,发现他的眼睛里,黑眼球和白眼球交界处有一层白膜,这层膜从下眼睑白
眼球处开始,尖端延伸到黑眼球内,扇形,医院的护士和大夫说,过一段时间,这层膜
能自己脱落,现在都过2周了,还在,着急啊!请大家给看看,这是怎么回事啊!
c****n
发帖数: 15245
19
来自主题: PennySaver版 - 大家ipad都贴的什么膜?
tempered glass是比一般的膜厚,材质是钢化玻璃,有一定的保护屏幕严重刮蹭和摔的
作用,如果用手机我还是比较建议这种膜,在贴的时候很好贴不太容易起气泡和进灰
普通的贴膜是塑料的膜,很容易贴出气泡,不过一般也够用了
我建议没什么贴膜的经验就别贴了,呵呵,贴膜是一个技术活,屏幕越大越不好贴
不过我几乎每个ipad都贴了,那是以前没用带smart cover的套,后来发现其实有cover
根本不需要贴....
当然看人了
B*****m
发帖数: 434
20
来自主题: PennySaver版 - 请推荐iPhone 6s plus的钢化玻璃膜
还是看摔的寸不寸,我看对钢化膜的review,有人说幸亏有膜,膜碎了屏幕没碎;也有
人说屏幕依然摔碎了。
d**0
发帖数: 660
21
【 以下文字转载自 Apple 讨论区 】
发信人: d700 (nikon), 信区: Apple
标 题: 板上有想买Macbook Pro / Air键盘膜的吗?
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 5 21:55:29 2012, 美东)
TPU 键盘膜。$6.99。 Fulfilled by Amazon。
http://www.amazon.com/gp/product/B007FL7GGS
只要你愿意给我的产品留一个customer review,可以亏本销售给你一个$3 off的code。
基本上amazon上的TPU键盘膜找不到这么便宜的。最终价$3.99 shipped by Amazon。
这个产品基本上跟很多其他的$7以上的,包括moshi的$22左右的,都差不多厚薄,差不
多做工。我自己也在用,很满意。这个材料比silicon的要好不少,薄,键盘光可以透
出,就是稍微硬一点。如果不是码工的话,手感还是不错的。
有兴趣的给我邮件 [email protected],我给你发code。
斑竹手下留情,虽然是广告,但是旨在优惠mitbbs上的id。... 阅读全帖
m***a
发帖数: 1407
22
鱼腹内黑色膜衣,俗称“黑衣”.为鱼体中最腥、泥土味较浓的部位,且含有大量的类
脂质及粗腰、溶菌酶,误食会引起恶心、呕吐、腹痛等症。
另有科研资料认为:这层黑膜是各种有害物质的汇集处,是被细菌、农药、水质中有脏
物等有毒成分长期污染而成的。食之当然有害。所以,剖鱼后要刮掉“黑衣”(膜)。
z**t
发帖数: 443
23
来自主题: Fashion版 - 高浸透瞬密发膜试用报告
昨天买了一罐,$14.98 in Marukai, 今天早上洗头发之后涂上,保持了10分钟,这款
产品与其他我用过的任何一款发膜都不一样,就是绝大部分都被头发吸收了,不像其他
产品冲的时候还是滑滑粘粘的。冲完之后把头发吹干。
味道蛮好闻的,感觉还不错,但是还没出现楼主说的超级滑顺有光泽的感觉,弹性一般
。也许现在才过了3个小时,我再等等看吧。我的头发属于油性,发尾烫过,有开叉,
也许出来的效果和楼主有点差异。
我准备把这款发膜和我平时用的Neotragena hair mask混合在一起,看看是不是能有更
好的效果。
Marukai真的是有好多好多化妆品,价钱在8,9块到20多块不等。
好多可以遮盖毛孔的东东,散粉,发膜,面膜,小工具等等。
昨天买了好几样。
s****x
发帖数: 4701
24
来自主题: gardening版 - 我是盖膜呢,还是不盖膜呢?
今早气温升高到20摄氏度以上,我在raised bed旁纠结,不盖膜怕刚出芽的被晒死,盖
膜怕芽都热死,毕竟是春菜,求建议!
s****x
发帖数: 4701
25
今天上午把膜盖上棚了,中午有太阳,一会棚上的膜就有水雾了,连忙掀开透透
气,明显感觉里面很暖和,下午3点太阳小了又盖上,晚上去看也有水雾。
请问白天多少度需要掀开膜透气?
比如今天最高摄氏6度,最低-4,但是太阳很好。
明天最高8度,白天掀还是不掀?
还有什么时候浇水比较好?
已经两天没浇水了,因为听说喝饱水的菜更容易冻死。
我问题太多了,不好意思
a****a
发帖数: 3905
26
来自主题: PhotoGear版 - 说说电子产品的膜
看到最后,我倒。
sgp膜就是保护屏幕用的,zagg会有全身的膜,但是贴屏幕上会有影响。你不贴屏幕上
,等于没没比么。

这样
Zagg膜
透光
多,
s*******7
发帖数: 743
27
来自主题: PhotoGear版 - 说说电子产品的膜
只用过笔记本键盘膜,其它的膜感觉是没太大意义。

这样
Zagg膜
透光
多,
z**c
发帖数: 7595
28
咳咳。 设备坏掉了。 电脑报错是激光被挡住了。 没挡住啊? 就给客服打电话。 那
小姑娘是内行,立马就说你动了那个膜没有? 我说我擦过啊? 不是插啊。 她说你可
能要换膜,500刀。 这不是明抢吗! 我说不换了。 还有别的辄没有? 她说看看洞洞
里面脏了没有。 我说我清理一下试试了。 然后我就清理洞洞。。。
清理完了,再开机,自检过了,一切顺利,看来不是膜的问题。
k***g
发帖数: 4904
29
就是用来做包装那种两层塑料膜压在一起形成气泡的缓冲层那种东西,小孩喜欢把那小
泡泡捏爆听响呵呵。我想知道哪里可以买到1米以上宽度的这种膜,贴窗玻璃上,隔热
隔音还可采光又不走光呵呵。谁知道哪里可以买到啊?最好是三层膜那种。谢谢!
如果有人好奇要问到底为啥想用拿东西,我就解释两句省得有人回帖把话题跑偏了。冬
天来了我发现窗玻璃很导热,屋子窗户又多又大,很是浪费取暖能源,不过阳光照射进
来时又能感觉出其取暖功能,但是打开窗帘时又有点影响隐私,而且俺住在马路边很吵
。于是想到要是买来那个气泡膜贴玻璃上,问题刚好解决了。
f****m
发帖数: 7469
30
【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: bingya (bing), 信区: Military
标 题: 港女遊台住人家連續2天遭迷姦 處女膜未破
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 26 20:16:55 2013, 美东)
http://hk.apple.nextmedia.com/realtime/china/20130709/51543617
台灣台中市一名男子從香港搭機返台,邀請在機上新相識一名到台自由行的香港女
遊客,到他家裏住宿,卻連續2天在女子早餐飲料裏添加安眠藥,趁女子昏睡時性侵犯
對方。他原被控迷姦罪入獄8年,但因女子處女膜未破,二審時獲改判4年監。
事發於前年3月,該名香港女子當日發覺自己從早上昏睡到下午,醒來下體有疼痛
感等異狀,於是佯稱要到运歪t,期間詢問醫生她是否曾遭下藥,醫師遂建議她報警
。法院二審時查出,香港女子處女膜未破,改以較輕的用藥劑強制猥褻罪控告他。不過
,法官判刑時,嚴厲斥責他假意協助香港女子觀光旅遊,卻心懷不軌,侵害台灣治安
H********g
发帖数: 43926
31
【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: nocturnal (夜猫子), 信区: Military
标 题: 小浣熊爱上捏气泡膜 网友感叹“和我一样”
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Feb 19 23:34:54 2014, 美东)
据英国《每日邮报》2月18日报道,有人曾说,作为易碎品常用外包装的气泡膜唯一的
作用其实是被捏。但或许没有人想过,捏气泡膜的习惯不是人类独有,小动物们也喜欢
!近日,Youtube上疯传的一段爆笑视频证明了这一点。在57秒的视频中,一只呆萌的
小浣熊不断地用前爪和嘴巴把气泡垫上的泡泡压扁,玩的不亦乐乎。
视频中,小浣熊极其“认真”地捏着气泡垫。它似乎对这个有趣的游戏很着迷,不
断地用前爪在气泡垫上发出“啪啪”的声音,来回捏个不停。
这个视频自上传后,迅速受到网友的欢迎,获得上百万的点击率。有网友评论道:
“从来没想过,我竟然和小浣熊这么相似!”(林熹)
v****e
发帖数: 609
32
来自主题: pets版 - 请教狗狗眼睛上的膜
我的小狗是只一岁的maltipoo, 前几天发现他两只眼睛上瞳仁附近有薄薄一层的膜,
之后去医院体检那天,膜又不见了,医生看看了说没事,可能有轻微的irritation.结
果膜昨天又出来了,请问大家这是什么啊?我能做点什么吗,比如眼药水之类的?上网
查了查还是没思路,貌似不是infection,因为几天前医生才看。
先谢谢大家啦!
w**m
发帖数: 169
33
塑料大棚里,绿油油的生菜叶又肥
又嫩,又大又红的柿子“个子”大了一号,让
人垂涎欲滴……生菜增产28%,柿子增产
42%……多么诱人的蔬菜长势!喜悦背后,凝
结着我校开发的光生态膜的功劳!
研究人员在日、美、俄等国研究基础上,在
塑料薄膜中加入了同其他助剂有较好相容性和
协调性的有机共轭分子萤光助剂。光生态膜增
强了透光能力,更神的是,“萝卜白菜,各有
所爱”,新型光生态膜的仿生功能滤掉作物生
长不需要的光,使“胃口”不一样的不同蔬菜
大饱口福,选择自己喜欢的光谱频段,茁壮成
f*****c
发帖数: 424
34
来自主题: Apple版 - 贴好后背膜了,上个图片
我也曾经给我的手机贴过膜。第一个是干帖的,没用液体,发现即使在洁净间里也很难
贴到完美,即一粒
灰尘都没有,位置也很难把握。最后贴上了还是有一粒小灰尘,仔细看的话能看出来。
第二个偷懒了干脆
用酒精滴在手机表面上再贴,发现很容易,把液体挤出去就行了,看上去也没有灰尘。
后来看到他们很多
人(甚至包括商场里面的invisible shield)都是这么干的,先喷雾再贴,当时看上去
真的是天衣无
缝,操作起来连毫无经验的菜鸟也能完成。但是拿回来等个两三天里面的液体真正干透
了才会发现问题,
有大灰尘的地方就是个泡,膜本身如果偏软的话就会凸凹不平。而这些问题贴的当时是
完全看不出来的。
这经验是我看了身边无数丑陋无比的diy贴膜总结出来的。不过lz是背面,有点灰尘气
泡也无所谓,反正
又不去看它,还是银色的,不明显。
总结:
1,要想贴好膜,一个干净无尘的环境是最重要的,至于贴的方法倒是其次。
2,湿贴的童鞋们不要高兴过早,贴的好不好三天以后见分晓。

象smugsmug那样
在灯下烤几十个小时……Orz……我吹完过个10分钟就拿起来用了。
我不贴膜了,裸奔
最舒服,用起来手下那是丝绸一般的... 阅读全帖
L*****y
发帖数: 4290
35
贴了磨砂膜字体就没那么细腻了. 简单的办法就是把灯关掉.

读paper是看到的是顶上的灯。请问有什么能够保持高清晰度的matte膜吗?没有膜真的
不能看书啊。。。
d**0
发帖数: 660
36
这个产品进货价都不止一块,不要说amazon还要抽走2块的运费再加commission。你以
前买的应该是硅胶的。一等价钱一等货。另外amazon moshi键盘膜也没见评论反映有影
响声音啊?你要不要试试看,不行再退。
更新,刚刚看了一下ifixit的macbook air tear down,扬声器在键盘左右的最边上,
就是caps lock和enter的下面。这个TPU键盘膜不会影响的,如果是厚的硅胶膜是会有
可能盖住的。
d**0
发帖数: 660
37
同意,键盘膜多少有些扼杀手感,这个好比戴套。谁都不想戴,不戴的也就不戴了,呵
呵。完全没有要说服不用膜的同学用膜,只是个有这个需要的提供优惠而已。
s******p
发帖数: 4962
38
来自主题: Apple版 - 求推荐rmbp键盘膜
买了个case+键盘膜套装
case不错,不过键盘膜贴上,每个键四边变得很硬,打字很不舒服
求推荐一个好用的键盘膜
n**********n
发帖数: 44
39
来自主题: Apple版 - 手机壳跟手机膜不匹配呢
谢谢啦,是因为我买的膜是玻璃膜,而且是全屏的,比普通的玻璃膜要宽。后来我换了
个手机壳就可以了呢。
h*********e
发帖数: 6997
40
来自主题: Biology版 - 请推荐好的wenstern blot用的膜
目前用的是Bio-rad Trans-Blot Transfer Medium Pure Nitrocellulose membrane,
本来一张膜可以blot三四种不同蛋白,用三四次,最近不知什么原因不行了,有时blot
第二种蛋白,即使是b-actin都看不到条带了。而有些查看的蛋白和actin位置比较接近
,不好把膜剪了,这样的话想检测internal and loading control都不好办。
大家有没有其它膜可以推荐的?
m****m
发帖数: 395
41
来自主题: Biology版 - 请教一下膜蛋白表达问题
膜蛋白难表达是很正常的事。
先把各种可能性一一排除,然后确定原因。各个击破。一次改变一个条件,一次解决一
个疑问。
关于测序的事,如果可以的话,还是想想办法做一下。
先从涂板开始,每个菌落小量摇菌,检测质粒的存在,还有生长活性。标记好有质粒的
菌,挑选最有活力的菌进一步做表达蛋白,有几个问题需要解决:OD生长到多少的时候
开始换培养基最好?(一般是对数生长期吧,不过自己也可以试一下在不同生长期)。
更换培养基后,多久以后开始诱导?(我一般是1个小时以后,不过你可能不同,要试
一下)。分几个不同的温度进行诱导(更换培养基后就用这个温度)、诱导多久后膜蛋
白表达量最高?(这个就要麻烦你要每隔一段时间取点菌去测一下有没有蛋白了)最后
决定最佳诱导温度和时间,还有你说的IPTG量的问题,也可以试一下,抗生素的浓度也
要控制好,太高菌就不长了,太低么要长杂菌。最后裂解细菌,看你用什么方法了,裂
解完离心后膜蛋白有可能在上清液里,也有可能在PELLET里。确定这个以后,就可以开
始纯化了。总之每个步骤都要严格监控,别把蛋白弄丢了。
小小建议呈上,希望对你有所帮助,祝你成功~ 实在不行,最后可以去做
t*******k
发帖数: 87
42
这几天总是遇到一个问题,想请教一下。
做western,同样的样品上两遍,转膜后切开,分别用抗体A和B杂交,信号挺好。实验
需要,将B抗体探测过的膜再次用A抗体杂交,中间无stripping,结果和同样样品直接
用A抗体大不相同,信号几乎完全丢失,是怎末回事呢?蛋白在膜上降解了吗?有人遇
到同样的问题吗?
b*******3
发帖数: 99
43
膜蛋白做Western Blot需要用PNGase F去掉N端糖基?
我现在在做一个膜蛋白的Western Blot,这个膜蛋白的基因序列前辈被我加了一个FLAG
的标签构建立一个表达载体pcDNA3,然后转染到细胞HEK293中.筛选后构建了稳定的细胞系.
免疫染色,药理学都很正常.(如果没有转染成功不会有这么强的药理现象.)
抗FLAG的一抗,做Western Blot却做不出来.
是不是需要用PNGase F去掉N端糖基再做呢?有必要?
PNGase F去掉N-linked carbodydrates?和去糖基是一个意思?
谢谢
N-Glycosidase F (PNGase F) is a ~36 kDa amidase that cleaves at the
innermost N-acetylglucosamine (GlcNAc) and asparagine residues of high
mannose, hybrid, and complex oligosaccharides from N-linked glycoproteins.
C**S
发帖数: 522
44
用一个膜蛋白拉下来几个细胞骨架蛋白,大家觉得该怎么往下做,是不是没什么意思?
膜蛋白一定是和骨架蛋白有结合吧,没查到几篇文章研究膜蛋白和骨架蛋白作用的文章
,是不是大家觉得这都是已知的?
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