m***e
发帖数: 16 | 1 最近刚开始接触神经科学，想设计一个在SY5Y中表达目的蛋白的实验。但是lentivirus
vector种类太多，也不知道哪种好用。请帮忙推荐，谢谢。 |
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p****z
发帖数: 31 | 2 最近想用retrovirus转一个基因,用的是pBabe-hygro,addgene protocol上推荐的细胞
系我们没有，隔壁实验市用的是Phoniex A,不知道这个细胞系可以用来转pBabe-based
vector 吗？老板最近经费不多，不想让费钱在一个可能只用几次的细胞系上。谢谢！ |
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S*****s
发帖数: 287 | 3 我以前一直在用 Vector NTi 的，现在收费了之后自己电脑上没钱装了，只能用实验室
的公共 copy，很麻烦。版上有没有朋友在用什么软件来管理 DNA sequence？我的要求
不高，只要能把 Genbank 的序列导入，然后作图显示就行。最好能有酶切位点分析，
不过就算没有也无所谓，只要免费就行。谢谢大家推荐！ |
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a********k
发帖数: 2273 | 5 恩，找了一圈，发现很多人cotransfection几个，很多人做tandem，也有很多人用几个
cassette表达的。
vector |
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z*******9
发帖数: 112 | 6 请问有没有人试过在Lentiviral vector里表达T7 polymerase的？可行吗？？ |
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z*******9
发帖数: 112 | 7 有没有人用lentivirus vector 表达T7 polymerase？？ |
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b******e
发帖数: 3348 | 8 是不是2-3天，细胞就慢慢把transfected进去的vector给排出了？还是能维持一个礼拜
左右？ |
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a***u
发帖数: 155 | 9 能推薦一個inducible的vector 嗎？ 謝謝！ |
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n******u
发帖数: 418 | 10 whats the package plasmids for this vector?
Could I use pMD2.G and pSPAX2? |
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z*t
发帖数: 863 | 12 我只知道addgene有个lentiviral tet-on/off的可以这么干，但是没有gateway,不过你
不急的话可以自己把attL从donor vector上PCR下来然后装在这个leniviral载体上 |
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v***2
发帖数: 131 | 13 请问哪位朋友有解密的Vector NTI 软件啊，不要求最新版本，只要解密的能正常使用
就行，俺用惯了这软件，刚换了实验室，这里没人用，有没有朋友帮忙啊
先谢谢各位朋友了，我的信箱：r****[email protected] |
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v***2
发帖数: 131 | 14 急问，哪位朋友有破解的Vector NTI， 版本旧一点没关系，从网上下载了几个破解版
，没一个能用，请各位帮帮忙了，先谢谢各位朋友了
my email: r****[email protected]
thanx |
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s********8
发帖数: 619 | 15 现在PCR了一个8k的片段,要blunt end克隆到pBluescript里去(ECoRV digested),应该
用什么ratio呢?大家都说应该3:1或更多,但是我的载体才3k,insert 8k的话,到底那个
算insert,那个算vector 呢?理论上难道不是1:1最好连吗?
先前做了一个5k的blunt end clone,用的是3:1ratio,似乎没连出来.克隆倒是长了一些
,不过貌似没有insert.(我做了colony PCR).
请克隆牛人赐教! |
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s******s
发帖数: 13035 | 16 我都随便混混，这种PCR浓度高的一般总是能连出来的。
你假阳性太多，可以考虑CIP/SAP处理一下vector， PCR加个5p？ |
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s********8
发帖数: 619 | 17 vector是用SAP处理过了的,对照板上也长了些, 似乎没有弄干净.我换个ratio试试吧.
再不行就重新订引物加酶切吧.看来blunt end没那么好做呀! |
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s*******q
发帖数: 81 | 18 我一般都用4:1或6:1
除了vector SAP 去磷酸化，还可以对insert磷酸化以增强效率 |
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c***3
发帖数: 527 | 19 PCR 片段有加 Pi 吗 （T4PNK 处理）？假如 CIP vector （通常是必须的，否则效率
太太低）。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 20 个人觉得TA clone不咋好用
TOPO blunt end很好用，注意要买II，不是I，I还是要用ligase的
TOPO blunt end II就是PCR产物直接跟vector室温混半小时
然后transfer |
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s********8
发帖数: 619 | 21 vector去磷酸的话,insert就必须要磷酸化了, 如果是PCR产物的话.这个我也是才搞明
白滴. |
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g***y
发帖数: 201 | 22 1. A lot of expression vectors contain SV40 pA or BGH pA. You can simply
PCR adding those sequence right after the stop codon.
2. It all depends on how you design your KI allele. If your KI allele is
only to replace one exon, then you don't need to worry about anything. If
you are to insert a cDNA sequence right at the 1st exon,
then you may have to worry about non-sense mediated dacay. In this case, it
would be safer to add an exogenous pA.
allelle |
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a*****v
发帖数: 128 | 23 最近小弟做突变，同时做几个克隆，其他的都正常，可以插入可以测序，只有一个质粒
，他可以在真核细胞表达但是需要在Ecoli里面扩增，我做了突变，但是无论如何都没
法测序，回来的峰一片混乱。
但是，template可以测序，我用同样方法抽提的其他plasmid也可以测序，只是这个突
变以后的不能测...
然后听技术员说，有的公司可以保护vector不让别人做突变或者修改，有这样的技术么
？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 24 我有 pQC-XIG （pQC-CMVpromoter-x- IRS- GFP) vector, 是给逆转录病毒用的，带着
CMV 高效promoter, 行不行？ |
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C*****h
发帖数: 926 | 25 用baculovirus vector，可以同时表达十二个genes |
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i*****i
发帖数: 154 | 26 Nat Biotechnol. 2004 May;22(5):589-94. Epub 2004 Apr 4.
Correction of multi-gene deficiency in vivo using a single 'self-cleaving'
2A peptide-based retroviral vector.
Szymczak AL, Workman CJ, Wang Y, Vignali KM, Dilioglou S, Vanin EF, Vignali
DA. |
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D***y
发帖数: 693 | 27 check this out:
Reprogramming of murine and human somatic cells. Bryce W. Careya,b, Styliani
Markoulakia, Jacob Hannaa, Kris Sahaa, Qing Gaoa, Maisam Mitalipovaa,1,
and Rudolf Jaenischa,b, PNAS 2008
using a single polycistronic vector |
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m*****z
发帖数: 1451 | 28 how about this episomal vector? |
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c********u
发帖数: 250 | 29 Invitrogen Gateway C-terminal GFP destination vector pcDNA-DEST47 克隆的蛋白
为什么不亮呐？非得每次再用anti-GFP染一遍才有暴亮的荧光，为啥啊为啥，有没人碰
到过同样的问题？ |
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m*****j
发帖数: 144 | 30 打算用2种不同荧光蛋白标记2种不同的细菌，然后看它们的互作关系。目前，有一种细
菌已经被GFP标记了（用GFP-vector转化到这种细菌里面），现在的问题是 是不是还得
用同样的方法制作第二个荧光标记菌？有没有其他比较简单快速的方法呢？而且买荧光
标记质粒好贵啊。 |
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d*p
发帖数: 534 | 31 I ever made a mistake, pack retro vector with lenti system. It failed. So I'
ll say NO. |
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s******y
发帖数: 28562 | 32 谢谢！
我从来没有用过lenti, 所以都不知道有这种差别。受教了。
另外，为什么retro vector 不能装进lenti 系统里面呢？难道他们的包装
信号差的很远么？
我一直误认为lenti就是多了一个强行进入细胞核的蛋白，这么看来还是有
别的差别？ |
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n********k
发帖数: 2818 | 33 no, it seems u need to do a better homework:))...the packing systems for
lenti and retro are the same except lenti need one extra...the difference is
lenti vector has the bosai element which determine the nuclear import...
that's why lenti can infect both dividing and non-dividing cells...frankly,
I haven't seen any retro which doesn't infect non-dividing at all... |
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i*****i
发帖数: 154 | 34 第二点，在表达载体上，第二代表达载体采用野生型的 HIV的LTR，而第三代载体采用
了chimeric的LTR，所以你经常会看到第三代表达载体的LTR写成CMV/LTR或者RSV/LTR用
来表示这种杂合LTR结构。
无论是lenti还是retro，LTR都既是promoter又是enhancer，比较一下lenti和retro的
LTR差别还是非常大的。
其实我们试过，lenti的包装系统可以包装retro的，而retro的也能包装lenti的表达载
体，只是效率非常非常的低，没有实际的可操作的意义，还不如直接用pcDNA3.1感染呢。
lenti里的特殊结构
WPRE (Woodchuck
Posttranscriptional Regulatory Element) from the woodchuck hepatitis
virus, increases transgene expression.
cPPT (central Polypurine
Tract) from the HIV-1 integrase gene, increases the copy number o... 阅读全帖 |
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h********n
发帖数: 4079 | 35 高人们能不能推荐一个lentiviral vector, 可以表达两个外来的gene, 比如
luciferase 和 Cre, 同时还能表达一个shRNA?
tyler jacks的那个 UbC.Luciferase.PGK.Cre 好用吗?
谢谢谢谢. |
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w********w
发帖数: 469 | 36 能同时表达3个或以上的基因的mammalian expression vector,谁能推荐一个啊？谢谢 |
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w********w
发帖数: 469 | 37 谢谢。好主意。类似的方法想过了， 就是不想太多的cloning, 最好有卖的现成的
vector， 知道有同时表达2个的，不知道3个或以上的。 |
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l******g
发帖数: 1623 | 38 表达几个受制于plasmid的大小. 一个vector, 你可以随便装几个expression
cassettes. 工业界用这种方法生产蛋白, 都是每升以克计 |
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s******s
发帖数: 13035 | 39 现成卖的不知道，不过表达四个以上的很正常，比如ips的vector. 问题是
每一个都装上下游序列实在太大了，而且克隆起来很不方遍。所以我建议你
用2A配合gibson，克隆方便，体积小 |
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w********w
发帖数: 469 | 40 谢谢。可以考虑2A的方法。 不过ips vector你有名字 和相关信息吗？ |
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w********w
发帖数: 469 | 41 就是有个问题这些放在任一express vector都行吧， 还有就是cleave后会留17-20aa |
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G***G
发帖数: 16778 | 43 given a set of numbers, such as ,1,5,4,2, we can sort it and the result is 5
,4,2,1 by the descending order.
but if given a set of vectors, how to sort them,
for example
a1={1,1,1,1,4}
a2={2,1,4,3,2}
a3={3,2,4,2,1}
how to sort a1, a2, and a3? |
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g**********t
发帖数: 475 | 44 Right. LZ must define a function (rule) to compare two vectors. The
implementation depends on your programming language,but it should be fairly
easy to do it using some libraries/functions, e.g. the qsort function in C,
if the comparison is well defined. |
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a*****x
发帖数: 901 | 45 depending on your rules. For example, you can sort by the length of vectors,
a1 = 1^2 + 1^2 + 1^2 + 1^2 + 4^2, etc. You can also look for their spatial
distribution. We have many software for high-content screenings that can do
it. It's not sorting though
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z******5
发帖数: 30 | 46 直接用lentiviral vector 感染细胞，病毒会整合到基因组吗？ |
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l***y
发帖数: 638 | 47 in my understanding, particle is virus, vector is backbone plasmid |
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j******i
发帖数: 939 | 48 lentiviral paticles(LP) 就是光壳子 没有病毒ssRNA包装到里边 lentiviral vector
(LV)就是一般的病毒载体包含ssRNA信息。 |
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s******n
发帖数: 63 | 49 用vectornti11patch.exe破解一下就可以了，这个应该很多地方都有免费下载的，当然
只能破解vector Nti11这个版本的 |
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s*****i
发帖数: 315 | 50 一定要用vector NTI么？ Serial Cloner是免费的，功能强大，而且win，mac，linux
都能用。 我到了美国之后一直用这个 |
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