a***n
发帖数: 428 | 1 有时下载的MP3，Tag信息乱七八糟，或者需要根据自己已有的收藏做一些改动。iTunes
可以修改MP3的Tag，但是经常改不彻底。在Windows下有个神器，叫MP3Tag，批量改ID3
干净又利索。Mac下一直找不到能与之匹配的软件。俺有时要听的中文歌曲，iTunes根
本就没有，因此不得不琢磨个法子。
现在找到了一个可以补充iTunes不足的办法，尤其是处理一些中文MP3文件ID3乱码之类
的问题。但是不能批量处理。
Audacity是一个著名的免费编辑MP3的软件，是跨平台的，PC和Mac都有相应版本。可以
将需要清除ID3的MP3文件拉进Audacity重新export一下就可，当然也可以自己加一些效
果，比如fade in，fade out，或截取某一小段之类的。Audacity重新export的过程中
，是产生一个新的MP3，所以原来的ID3全都清得干干净净了。然后，在iTunes里想怎么
设置就可以怎么设置了，hoho～劳动人民的智慧是不可低估滴！ |
|
n**********l
发帖数: 271 | 2 depends on switchport mode?
access ports drop traffic with VLAN tags (Cisco Catalyst yes, other non-
managed switch not sure), incoming/outgoing packets are untagged
tagged traffic are for trunk ports
untagged traffic to a trunk port goes to the native VLAN
I can be wrong tho... Haven't worked on VLANs for a while...
https://supportforums.cisco.com/docs/DOC-17237 |
|
T*****e
发帖数: 361 | 3 I have been annoyed by several hundred warning messages generated by
Eclipse (3.2.2) WTP (1.5.3, Dynamic Web Project). There are two major sets
of warnings, one for JSP tag files ("Unknown tag") and the other for "EL
Syntax Error".
My project structure is:
/
|- src (for all java source files, including servlets)
|- web
|- images
|- scripts
|- styles
|- ...
|- resources (JSP files for serving AJAX calls)
|- services (JSP files)
|- ...
|- WEB-INF
|- classes |
|
a*****g
发帖数: 19398 | 4 我看好多网站有 Tag 功能．
这个在数据库里面是怎么实现的？是不是就是有个 field，然后把所有 Tag值都存里
面． |
|
w***g
发帖数: 5958 | 5 create table tag (article_id int, text char(1000));
然后显示的时候select text from tag where article_id = xxx. |
|
s*********i
发帖数: 1813 | 6 有一个想法，能不能像del.icio.us tag网址一样，有一个软件可以tag local的文件呀
？这样实际上就可以不再局限于folder的结构，可以更方便的组织和搜索文件。刚才
google了一下，发现了一个软件就是基于这种构思，tag2find，但网上关于这个软件的
review很少，不知道还有没有其他类似的软件。大家说说。 |
|
r****y
发帖数: 26819 | 7 没听说过windows的文件加tag功能
什么操作系统可以给文件加tag？ |
|
s***s
发帖数: 7178 | 8 我现在有大概几百G的文件要分类
主要是图片文件和pdf，少量video，docx以及ppt
试图用folder的方式管理，用起来非常不方便
win 7 ultimate说可以加tag，可是又不能加pdf
可否给推荐一个使用tag来file文件的软件？
谢谢
我用的是win 7 ultimate和xp |
|
r****o
发帖数: 105 | 9 Flag tag 最早来自于T7噬菌体十号基因表达产物11个氨基酸的前导序列。
现在公认的序列是：DYKDDDDK
这个标签的好处是一来比较小，二来比较亲水，所以一般不影响所标记蛋白
的活性。至於是在N还是C端，要看你蛋白的实际情况。比如有些蛋白N端或者C端要
经过蛋白酶切除，这种情况下FLAG显然不能加到要被切除的一端去。当然你也可以
两端都试试，加在哪端活性好，就用那端好了。
如果是N-terminus Flag，ATG应该加在FLAG前面，之前还应该有Kozak sequence,
以便翻译正确。不用隔太多氨基酸，用一两个glycine之类旋转比较灵活的氨基酸
隔开就行了。
如果你想省事，可以找商业化的有FLAG载体，比如Stratagene的
pCMV-Tag系列,既有N端FLAG的载体，又有C端FLAG的载体。又如SIGMA公司的pFLAG-CMV
系列，也是既有N端又有C端FLAG载体。SIGMA公司还提供一种特别的p3XFLAG-CMV系列，
加有三个串联的FLAG。如果你的蛋白做western检测起来信号很弱，加三个或者更多
FL |
|
r****o
发帖数: 105 | 10 跑跑western，用anti-His-tag 抗体看看有没有蛋白。另外Ni-NTA与his-tag
的结合非常不特异。你biacore的结果其实不可信。
很难相信300mM的imidazole还洗不下来.我觉得要么是根本没有蛋白表达
，或者没结合上去。如果是后者，你检查一下你的Ni beads是不是好的。 |
|
p****e
发帖数: 1336 | 11 谢谢啊。给你信箱发了信。另外谁有一点strep tag antibody呢。。 |
|
c*********t
发帖数: 340 | 12 如果想证明A和B相互作用，在CELL LINE里表达FLAG epitope-tagged A
然后证明B也能一起被PULL DOWN
这个方法有什么缺点吗（我觉得这种大量表达某种蛋白可能会造成某些ARTEFACT？）
为什么要用FLAG TAGGED A呢
直接拿cell lysate做CoIP为什么不行呀
请达人指点下，多谢！：） |
|
f******e
发帖数: 125 | 13 请问用HISTINE TAG 纯化蛋白.这个TAG会对蛋白性质影响大吗?
多谢了 |
|
n***w
发帖数: 2405 | 14 虽然自己没用过这个tag，但是看到n多组用6xHis tag做fusion protein，应该可以搞
吧。 |
|
w***y
发帖数: 493 | 15 我把3xHA的tag接到蛋白的N端, 然后做了in vitro transcription得到了mRNA. 接着把
mRNA注射到了鱼的卵里,另外准备了一些uninjected fish作为negative control, 一段
时间后做western观察蛋白表达情况. 我发现在那些negative control的样品里也有带,
而且量还不少, 大概在75KD 左右. 我试过两个不同的 anti-HA的抗体, 结果都一样.
请问有人在zebrafish里面表达过HA-tag的蛋白么, 有没有看到这种情况呢? |
|
s*******e
发帖数: 1010 | 16 在你蛋白的C末端终止密码子之前加进两个限制性酶切位点，然后把你的补加的linker
和tag设计成引物。即使十六氨基酸加上十个His也就26×3=78个bp再加上两头的酶切位
点6×2=12和保护碱基四个，总共才不到100个碱基。设计两条长度60bp的引物在中间有
20bp的互补区域就正好能覆盖100个bp。放在一起退个火再延伸一个回合，把产物连到
你蛋白的C-末端就成了。
我觉得这个其实不是连多长的tail的问题，换tag可能更好。你可以连接一个GST或着
GFP到你蛋白的C末端，如果用GFP的话再把His连到GFP的C末端。这个融合蛋白如果能表
达就一定能亲和纯化。在两个蛋白之间加上一个蛋白酶切位点就有机会在纯化后切出你
的蛋白来。
另外，Hisx6已经不fashion了，要X8或者X10才能hold住场面！ |
|
s*******e
发帖数: 1010 | 17 Hisx10肯定不是灵丹妙药，我做的时候大概只有一半相对于Hisx6产率有所提高。螯合
金属当然不会有太多的His参与，但也有个His的局部浓度的问题。一个明显的例子就是
我有几个即使连着Hisx10的蛋白，咪唑梯度洗脱的时候也是先洗脱单体，再提高浓度才
洗脱二聚体。如果10和20个His有差别，我认为6和10有差别是必然的。
因为还没见过有副作用的例子，所以只好一律X10了。你说的影响溶解度的情况我还没
遇到过——His-tag影响溶解度是肯定的，但是没遇到过长短Histag影响的差别明显的
情况。
至于影响结晶，从来不敢带着Tag去长晶体，无论x6还是x10，一律切掉再说。 |
|
c********b
发帖数: 363 | 18 已经发了. 忘了说,我的方法对HIS tag或者Intein tag都适用. |
|
o*****r
发帖数: 156 | 19 One thing you can check is to denature the protein (8M urea) to see if it
binds to the Ni column. If it does, the his-tag is buried and un-accessable
in the native state so you need a bigger tag/longer tail. If it still doesn'
t, something else is going on. |
|
C*******e
发帖数: 4348 | 20 GST tag有C端的么？
lz的蛋白必须到periplasmic（N-pel signal）
你的意思是N-pel后面再连个可切的GST tag？ |
|
b*******n
发帖数: 605 | 21 请问，大量购买Tag酶和dNTP做genotyping，那个公司的Tag酶和dNTP 最便宜？刚刚独
立，钱少少的说。。。
谢谢。。。 |
|
b******s
发帖数: 1089 | 22 我做了好几个不同的tag: YFP，CFP, mcherry等。用histone试全部有荧光，但连其他
蛋白的时候，偶尔有荧光，但很多都没有。蛋白和tag中间隔的是MCS，大约15aa的样子
。我看很多其他的载体还做了专门的亲水linker，是不是加了这样的linker大部分情况
下都好用，还是也要看不同蛋白的特性？ |
|
r******t
发帖数: 629 | 23 我用agilent的Site-Directed Mutagenesis Kit在蛋白的N端加6 his tag。
分两步加的，一次加三个，结果第一次三个加得很容易，第二次的三个就是加不上，
primer也是靠agilent自己网上的primer design做的。
不知道有啥办法吗？
目前好郁闷啊。
另外，有没有人试过用3个his的tag来纯化呢？ |
|
l*****i
发帖数: 1163 | 24 想在human iPS里面研究某个转录因子的结合的Promoter，由于没有好用的抗体，需要
加Tag来做Chip-Seq。请问加什么样的Tag会比较好？多谢 |
|
c********u
发帖数: 250 | 25 想加一个小的tag到目标蛋白的cDNA上,然后一起放进AAV2再打进小鼠脑子,请问这种情
况用哪个tag好一些呢? HA, Myc, His, FLAG, V5, 还是有比这些更好的? |
|
m*b
发帖数: 1421 | 26 发明his tag的人岂不是要恨死他们了
这么好用的tag竟然为了省点儿小钱就不用了 |
|
h*********e
发帖数: 55 | 27 his-tag和GST-tag的专利应该过期了吧。 |
|
m***c
发帖数: 177 | 28 Tag的作用是用来提纯。对于产量低、纯化困难的旦白是有效的。但是对于production
level来说，还要考虑单位产量的问题，除纯度外。有Tag的就需要増加纯化部骤，因此
就会增加纯化过程中的损耗。 |
|
b******y
发帖数: 627 | 29 Ni TNA 的柱子 is too nonspecific. But you can do Ni TNA 的柱子 and then Myc
tag来做IP. |
|
e****s
发帖数: 1125 | 30 单纯的蛋白蛋白interaction,我个人喜欢pulldown，因为下步Western不存在IGG干扰的
问题。不过Mass Spec就不知道了。建议是Imidazole特异洗脱，别用SDS buffer直接洗。
Myc做Co-IP还是不错的Tag，而且看见过几篇mass spec based proteomics用Myc. |
|
m******5
发帖数: 1383 | 31 大家有没有遇到过N-terminal tag Flag Tag表达高，但用M2抗体识别不出来，换一个
公司的DYKDDDDK抗体就能识别出来的情况？
Very uncomfortable ！！ |
|
b******n
发帖数: 4225 | 32 可能蛋白的his-tag被包埋在蛋白里面了
如果不需要有活性的蛋白，直接变形了再去结合Ni-NTA
需要有活性的蛋白就要考虑将His-tag放到蛋白的另外一端试试看 |
|
p****y
发帖数: 95 | 33 why use phosphate buffer for His-tag, it will precipitate Ni2+ and your
beads won't bind your His-tag protein anymore |
|
s******y
发帖数: 28562 | 34 Mammalian cell 里面很多蛋白本身就有 4xHis, 会被Ni-NTA resin 一起
纯化拉下来。所以你的蛋白不能在如此多的背景蛋白中被看到。
如果你真的要用这个方法纯化蛋白的话，我的建议是：
1。用大量Hela 细胞，悬浮培养。
2。用high glucose medium.
3. 在你的蛋白上再加一个tag, 进行双重纯化。如果实在不能再加一个tag的话，也必
须至少在NTA-NI resin之后进一步用ion-exchange column + size exclusion column
进行再纯化。
COOMASSIE |
|
m*********r
发帖数: 49 | 35 正在纯化一个his-tag的蛋白。我想让蛋白结合到Ni柱上后用TEV protease剪切后收集
切下来的蛋白，我觉得这样比用immidazole洗脱纯度高，还省了以后再切tag的麻烦。
现在问题是，老板买了个qiagen的fast start kit (gravity flow的那种）， 里面的
Ni-agarose成型了之后像gel一样，不能被重新悬浮，我在加TEV protease洗脱的时候
（4C 过夜），溶液不能完全浸没Ni-agarose，跑胶后和immidazole洗脱的比较发现洗
脱效率很低，我怀疑是因为TEV protease不能很好地与Ni-agarose接触造成的。
请教下有什么推荐的解决方法么？别家卖的Ni-NT好像有那种纯化过程中一直都自由悬
浮的，
不知道哪家的好，或者我的TEV proteasejianqie剪切加洗脱的方案有设么可以改进的
地方？多谢！ |
|
T****u
发帖数: 424 | 36 Flag tag for western。也可以纯化，就是用Flag beads太贵。
his-tag 应该是wesetern和purification都可以。
GST的话做纯化可以，做western，由于有点大，可能会对功能有不可以预测的影响。 |
|
X******n
发帖数: 914 | 37 是不是可以考虑两个tag放到一起呢：比如你可以用SBP－HA tag，前者用于
purification，后者用于检测。 |
|
s********n
发帖数: 2939 | 38 我用的Hig-tag的多抗特异性很差。大家有没有好的His tag抗体介绍？ |
|
z*t
发帖数: 863 | 39 现在实验要过表达一个protein，做Co-IP& ChIP因为没有好的antibody，要在蛋白前加
tag sequence，现在有个问题是要不要在tag和orf之间加linker sequence，大家有没
有什么建议？ |
|
s******r
发帖数: 1245 | 40 不知道你的TAG指的是stop codon还是peptide tag
不管放啥，都是在做floxed 的allele的时候设计好一块弄进去，跟cre那步没关系，
cre只负责去掉floxed region
没弄过的自己实验室找个老手带着弄，否则就花钱找公司找facility做，能做这种外包
的大把，自己瞎琢磨浪费时间不值当 |
|
Z******5
发帖数: 435 | 41 最近准备做一个基因的ChIP-seq和RIP-seq，该基因没有相应的ChIP和RIP grade的抗体
，准备用tag来做。
请教HA-和FLAG-哪个好用？
另外，IgG control和Input control的sequence都要做吗？ |
|
y***n
发帖数: 109 | 42 我需要一个很小的affinity tag pair，不知道有没有比下面这些还小的呢？
FLAG/MYC/HA/HIS & antibody， 120+ kDa
biotin & Streptavidin, 52 kDa
HaloTag & ligand, 34 kDa
SNAP tag & ligand, 20 kDa |
|
发帖数: 1 | 43 常用的tag里面最小的tag是halo。纯化的时候会被切掉。 |
|
S****B
发帖数: 17 | 44 Nanobody……10-15KDa
[在 yuban (java) 的大作中提到：]
:我需要一个很小的affinity tag pair，不知道有没有比下面这些还小的呢？
:FLAG/MYC/HA/HIS & antibody， 120+ kDa
:biotin & Streptavidin, 52 kDa
:HaloTag & ligand, 34 kDa
:SNAP tag & ligand, 20 kDa |
|
