r********s
发帖数: 149 | 1 如果他们号称在293T里可以切endogenous gene, why bother using GFP plasmid?
[在 laghs (微小) 的大作中提到：]
:你动手够快的。我们实验室还在克隆Ago。。。ssDNA应该比质粒好转，共用质粒
:protocol就行了。听你这么说，情况不乐观啊。NLS signal加了吗？韩自己也说目前
的系统不完善，建议从切GPFplasmid底物开始。看了还有很多工作要做。但希望不是个
大泡泡。 |
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r********s
发帖数: 149 | 2 如果他们号称在293T里可以切endogenous gene, why bother using GFP plasmid?
[在 laghs (微小) 的大作中提到：]
:你动手够快的。我们实验室还在克隆Ago。。。ssDNA应该比质粒好转，共用质粒
:protocol就行了。听你这么说，情况不乐观啊。NLS signal加了吗？韩自己也说目前
的系统不完善，建议从切GPFplasmid底物开始。看了还有很多工作要做。但希望不是个
大泡泡。 |
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s*****i
发帖数: 315 | 3 我用的gene block，N端加了3xFlag和nucleoplasmin NLS，就是张峰的Cas9的核定位序列
转293也试了韩paper里面targeting GFP的5pssDNA，也没做出来，也许GFP质粒转的太
多了
里面很多不确定因素，我已经做了一个跟韩的paper里完全一样的设计，N端Flag-
SV40NLS
我也怀疑我的ssDNA 也许local公司磷酸化的不好。我有自己磷酸化的，并且从IDT定了
韩paper里的G10，下周再试一次
如果有结果我会post 出来的。 |
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r********s
发帖数: 149 | 4 刚刚看到Addgene已经有他们的质粒了，发现c-terminus多出几个氨基酸。
[在 samalli (小米) 的大作中提到：]
:我用的gene block，N端加了3xFlag和nucleoplasmin NLS，就是张峰的Cas9的核定位
序列
:转293也试了韩paper里面targeting GFP的5pssDNA，也没做出来，也许GFP质粒转的太
:多了
:里面很多不确定因素，我已经做了一个跟韩的paper里完全一样的设计，N端Flag-
:SV40NLS
:我也怀疑我的ssDNA 也许local公司磷酸化的不好。我有自己磷酸化的，并且从IDT定
了韩paper里的G10，下周再试一次
:如果有结果我会post 出来的。
:天下熙熙，皆为利来；天下攘攘，皆为利往。 |
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r********s
发帖数: 149 | 5 刚刚看到Addgene已经有他们的质粒了，发现c-terminus多出几个氨基酸。
[在 samalli (小米) 的大作中提到：]
:我用的gene block，N端加了3xFlag和nucleoplasmin NLS，就是张峰的Cas9的核定位
序列
:转293也试了韩paper里面targeting GFP的5pssDNA，也没做出来，也许GFP质粒转的太
:多了
:里面很多不确定因素，我已经做了一个跟韩的paper里完全一样的设计，N端Flag-
:SV40NLS
:我也怀疑我的ssDNA 也许local公司磷酸化的不好。我有自己磷酸化的，并且从IDT定
了韩paper里的G10，下周再试一次
:如果有结果我会post 出来的。
:天下熙熙，皆为利来；天下攘攘，皆为利往。 |
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z*t
发帖数: 863 | 6 话说仔细看他paper就发现目前的protocol不是特别方便。
是不是要质粒和ssDNA一起转才能work？ |
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D****n
发帖数: 14 | 7 NgAgo 2.0很快就要出来了，毕竟手里有二十多个有活性的Ago，而且昨天他说他还找到
了和C2c2类似的蛋白。ssDNA导入的问题他也说，有人告诉他可以用病毒来实现。
遗发所很多人在做，而且国内也有很多合作者，连百泰克公司也在合作，想做成可以靶
向任何序列的内切酶 |
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发帖数: 1 | 8 重复出来也不一定能发财啊，P-5’-ssDNA怎么安全导入体内做in vivo editing, 怎么
解决 |
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发帖数: 1 | 9 发信人: samalli (小米), 信区: Biology
标 题: Re: 闊╂槬闆ㄧ殑NgAgo鏁堢巼鎬庝箞鏍凤紵鏈変汉璇曡繃涔堬紵
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jun 4 14:56:56 2016, 美东)
我试了两次，没有做出来，完全用韩写的protocol做的，而且试过了分别转质粒和
oligo。正对照是CRISPR-Cas9, target 同一个 exon，所以做的Surveyor assay 没问
题。
质粒的转染效率有80%，因为共转了EGFP质粒并做了FACS。
也许是我手臭吧。有没有共转质粒和ssDNA比较好的protocol？ |
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发帖数: 1 | 10 发信人: raindallas (Never give up), 信区: Biology
标 题: Re: 闊╂槬闆ㄧ殑NgAgo鏁堢巼鎬庝箞鏍凤紵鏈変汉璇曡繃涔堬紵
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jun 4 20:32:20 2016, 美东)
我也试了一次，没做出来。现在准备用他们的gata4来做positive control.
[在 samalli (小米) 的大作中提到：]
:我试了两次，没有做出来，完全用韩写的protocol做的，而且试过了分别转质粒和
:oligo。正对照是CRISPR-Cas9, target 同一个 exon，所以做的Surveyor assay 没问
:题。
:质粒的转染效率有80%，因为共转了EGFP质粒并做了FACS。
:也许是我手臭吧。有没有共转质粒和ssDNA比较好的protocol？
:天下熙熙，皆为利来；天下攘攘，皆为利往。 |
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d********m
发帖数: 3662 | 11 一位朋友最近在和韩老师交流，他只上国内虎扑不上MITBBS，所以我征得他同意发到这
里，希望对正在重复这个实验的各位有所帮助。
for 24 well plate, 300ng NgAgo expression plasmid, 30-40ng GFP-N1, 200-500ng
5'P ssDNA guide----co-transfection. after 24 hours, detect GFP expression
under fluorescnet microscopy. do not use electric trasnfection. NgAgo can
remove 24bp from target, we suggest you do silver stain PAGE to observ T7E1
results; the "Protocol of NgAgo/gDNA-mediated genome editing and examination
(T7E1 assay) and a representative experiment" in ONLINE ME... 阅读全帖 |
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m****a
发帖数: 270 | 12 细胞污染之类的话有谁信？
乐观得讲现在无非是两种可能，一种是韩隐瞒了关键的技巧，为发表声称的 smart 2.0
版争取时间。
第二种就是NgAgo能切质粒但是切割基因组的效率极低（<1%），可能是体内ssDNA 不稳
定，loading 有些tricky，总之完全没达到文章中声称的CRISPR同等水平，以至于需要
用银染才"可能"看到T7E1的条带。
效率太低，导致直接测序或者或者单克隆以后测序看不到indel，很可能需要做deep
sequencing。 |
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发帖数: 1 | 13 For those who can not access the link
I copied the content here:
>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>
NgAgo
15 posts by 9 authors
Davide Seruggia
Jun 23
Hi,
I tried a couple of transfections with the NgAgo plasmid from Addgene and
the 5'P oligo against GFP from the paper, but I did not see a dramatic
reduction in GFP+ as seen using Cas9 and a GFP sgRNA.
Anybody tried as well and came to the same (dead) end?
Davide
k*****[email protected]
Jun 24
Hi, Davide,
I tried th... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 14 韩春雨NgAgo基因编辑技术可重复性引质疑
该领域专家认为“不能重复不意味着是假的”
科学网6日讯 近日，有关NgAgo基因编辑技术首篇论文实验的可重复性受到相关研究者
质疑，该论文作者、河北科技大学副教授韩春雨在各类报告上回应这需要“高超的实验
技巧”。对此，《中国科学报》记者在采访该领域专家时了解到，所谓“高超的实验技
巧”实为实验“标准化”，目前多个实验室的重复实验结果即将出炉。
最近一个月，许多研究者在网络平台上声称无法重复韩春雨发表论文中的实验。科学网
上，多名博主转发研究者的评论，参与了对此事的关注。
截至发稿前，韩春雨本人并未就此事细节向媒体进行回应。不过，据《中国科学报》记
者了解，世界范围内有几家实验室正在对NgAgo-gDNA基因编辑技术的几项实验进行重复
，并且已有从未与韩春雨联系过的研究者独立完成了重复实验，即将在学术刊物上发表
论文公布结果。
“韩春雨所说的‘高超的实验技巧’并不准确。”国内一名从事基因技术研究的院士告
诉《中国科学报》记者。他推测，无法重复的原因可能是实验过程的“标准化”出了问
题，“在细胞生物学的历史上，不能重复的实验时有发生，甚至有时候只... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 15 国内媒体都是些啥玩意儿
http://www.cernet.edu.cn/ke_yan_yu_fa_zhan/zui_jin_geng_xin/201607/t20160707_1427266.shtml
截至发稿前，韩春雨本人并未就此事细节向媒体进行回应。不过，据《中国科学报》记
者了解，世界范围内有几家实验室正在对NgAgo-gDNA基因编辑技术的几项实验进行重复
，并且已有从未与韩春雨联系过的研究者独立完成了重复实验，即将在学术刊物上发表
论文公布结果。
。。。。。。。。。。。。。。
目前，已有研究者正在逐步发现“诀窍”。在专门讨论NgAgo的谷歌讨论小组中，一名
无法证实身份的研究者“Jan Winter”表示，他因为替换了一项实验材料，取得了重复
实验的成功。韩春雨的实验显示，NgAgo能够识别5’磷酸化的ssDNA并利用其作为向导
，完成后续的编辑过程，而获得磷酸化的小段DNA是前提。
。。。。。。。。。。。。。。
对此，记者从可靠渠道了解到，韩春雨早在论文发表之初，便意识到，这一新技术目前
并不稳定，他也一直致力于优化和改进该技术，并曾表示“很有信心”。目前，韩春雨
已向... 阅读全帖 |
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m****a
发帖数: 270 | 16 重新看了一下paper的supplemental method， 文章里明确得说明了
5’-phosphorylated ssDNA guides are dissolved to 100 ng/μl in 0.5x TE
buffer (PH 8.0)....and are diluted in 50 μl Opti-MEM (Gibco).
这与gluestic所说的pH 6，无EDTA 完全矛盾，
事实上不加EDTA，加Mg2+ 会增加Dnase活性，让DNA更容易降解？
如果是真的，那么韩春雨就是在误导大家。如果是假的，那么gluestic就是来这里捣浑
水的。
假的可能性更大。 |
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m****a
发帖数: 270 | 17 哥，这里的single strand DNA 是指 guide DNA 不是 target.
意思是降低ph能防止潜在的Dnase降解ssDNA.
发这三条所谓tricks的Gluestic与其说是韩的水军，不如说是韩的高级黑，
这个帖子被好事者当成韩春雨的建议发到了google group，
立马被专业人士喷成了筛子，最确切的评价就是"not even wrong". |
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z*******4
发帖数: 285 | 18 楼主你拿到生物学相关学位了么？不会是中专生吧。
还什么“即使你拿同一个样品去测一百遍，你肯定会在其中的少许几个测
仇子龙说看到的indel,是靶点区域，是那24个ssDNA的地方，在这里出现indel你说是测
序问题？外行的也太夸张了吧
少废话，你可以大张旗鼓的去写comment，看看编辑会不会请你拿出证据，会不会撤稿
，没人拦你 |
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z*******4
发帖数: 285 | 19 楼主你拿到生物学相关学位了么？不会是中专生吧。
还什么“即使你拿同一个样品去测一百遍，你肯定会在其中的少许几个测
仇子龙说看到的indel,是靶点区域，是那24个ssDNA的地方，在这里出现indel你说是测
序问题？外行的也太夸张了吧
少废话，你可以大张旗鼓的去写comment，看看编辑会不会请你拿出证据，会不会撤稿
，没人拦你 |
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发帖数: 1 | 20 1) I have no comments, but Dr. Chou has mentioned he was able to reproduce
it.
2) DNA band and migration are easily alternated by sample ionic strength and
buffer. The reason lies in the mechanism of DNA molecule electrophoresis is
so different from SDS-PAGE. DNA band shift is not a unusual result if DNA
sample denature or conformation is not consistent because DNA molecules
migrates on a electrical filed by the negative charge of its own phosphate
groups of which the charge is easily altered by... 阅读全帖 |
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n**********g
发帖数: 196 | 21 1) I have no comments, but Dr. Chou has mentioned he was able to reproduce
it.
The biggest concern is not addressed by your answer.
2) DNA band and migration are easily alternated by sample ionic strength and
buffer.
No, I did not talk about band distortion. Read my question carefully. Fig 4a
and Fig 4e. No shift when cleavage sites are 30bp and then clear shift when
cleavage sites are closer.
3) Visualization/staining and capture will add non-linear effects to DNA
quantitation. Un-even chemical... 阅读全帖 |
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n**********g
发帖数: 196 | 22 So based on your reply,
1) still not addressed
2) still not addressed
3) clear your stance. Should Han paper be trashed because there is not
calibration curve, or should we trust the fields experience that such gels
should preserve their linear relationship between staining signal and DNA
amount?
4) you changed topic. You were talking about ""three tricks" of ssDNA
transfection". Stick to DNA transfection before we switch to what happens
after transfection.
any
reproduce |
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发帖数: 1 | 23 Dr. Chou is not a green hand. He is doing quite well right now and becoming
a rising star professor in SIBS.
I personally think Dr. Han's enzyme has relatively low activity of
catalyzing DNA compared to the CRISPR enzyme, which cause quite low success
rate of this experiment.
There is an improvement of timing and efficiency of ssDNA transfection after
plasmid DNA produces the enzyme in living cells.
I can feel the anxiety of some scientists questioning Dr. Han's work,
however the way they are qu... 阅读全帖 |
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S**********e
发帖数: 620 | 24 他没有说到底什么不同，仅仅是基因不同？难道仅仅改变了ssDNA序列，换一个基因或
者设计方法？
不过能做出来就算不错了 |
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s***e
发帖数: 911 | 25 我彻底外行。 请教有没有这种可能性：ssDNA结合Rad51这类的recombinase, 导致
strand invasion， 形成D-loop, 最后被resolvase切掉？ |
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z*******4
发帖数: 285 | 26 事实上判定小保是否造假，也是用楼主的逻辑----只要有一家能重复关键结果就行！
所以日本最后让小保自己重复，她自己都重复不出来，才定性为造假。倘若有一家能重
复，哪怕效率再低，也只是系统不成熟，不能指责为造假。
如果NgAgo没有一家能重复，当然可以质疑造假，现在有其他教授公开声称可以重复关
键数据（ssDNA区域的indel）,某几个id依然抓着造假不放，让人不得不怀疑其动机，
以及思维逻辑是否合理。 |
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z*******4
发帖数: 285 | 27 反正已经公开声明了，测序数据也不是什么科学机密，请公布出来，证明设计的ssDNA
区域可以见到indel.
这是击败“韩春雨造假”说的子弹，一颗就够了。
作为一个中国生物科研工作者，真心不希望韩春雨被定性造假，否则以后每个中国人，
哪怕只是名字像中国人，想要发好文章，无形中的难度又提高了几成。 |
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发帖数: 1 | 28 这不会影响中国人的科研发表。只要实事求是即可。
沉舟侧畔千帆过，病树前头万木春。死了韩屠夫，不吃混毛猪。
ssDNA |
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S**********e
发帖数: 620 | 29 仇老板回国混身不由己，别难为他了
自闭症的专家用ago玩p53，脚趾头想想就知道这不是四大恶人的招，比如阿三和澳洲那种
ssDNA |
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s*********y
发帖数: 292 | 32 就用lipofectamine
找个带GFP的质粒，转染完拿去sorting到96孔板。哪怕效率只有5%，只要能转进去，挑
几百个细胞总挑的出来的 |
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H****N
发帖数: 997 | 33 Dear colleagues,
the publication by Gao et al in May in Nature Biotechnology http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27136078 triggered an enormous expectation. This Chinese team led by Chunyu Huan reported that the Argonaute (Ago) protein from a rare haloarchaea, Natronobacterium gregoryi, (NgAgo) would efficiently work for gene editing purposes in human cells. Ago had been described as an DNA-guided endonucleases two years before, through a Dutch-Spanish microbiologist collaborating team (Swarts ... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 34 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: hanchunyu (), 信区: Military
标 题: 韩春雨是第二个小保方－业界专家的信
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jul 29 11:59:57 2016, 美东)
Email on ngAgo sent to the ISTT mailing list：
Dear colleagues,
the publication by Gao et al in May in Nature Biotechnology http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27136078 triggered an enormous expectation. This Chinese team led by Chunyu Huan reported that the Argonaute (Ago) protein from a rare haloarchaea, Natronobacterium gregoryi, (NgAgo) would efficiently work for gen... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 35 国际转基因技术协会原主席Montoliu博士建议不要再试图重复韩春雨实验结果
澳大利亚国立大学Gaetan Burgion今天撰写长文介绍他试图重复河北科大韩
春雨创立的NgAgo基因编辑技术的经过，得出结论：韩春雨的实验无法重复，而
且与韩在论文所说矛盾；《自然·生物技术》应要求韩公布原始数据；该技术显
然没有前途。
国际转基因技术协会创建者和原主席Lluis Montoliu博士根据这一结果以
及其本人实验室的实验结果，向国际转基因技术协会会员发出一封公开信，建议
停止继续试图验证韩春雨的实验，不要再浪费时间、金钱、人员和项目。
CRISPR谷歌群针对这项技术和韩春雨的文章的调查表明，140个调查回复中，
只有一个（中国神经所仇子龙？）回答该技术起作用，73个回答无效，63个回答
在验证。
From: [email protected]/* */ on behalf of Lluis
Montoliu To: ISTT List
Subject: [ISTT_list] Great disappointment with Ago: Long life to
CRISPR... 阅读全帖 |
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c********n
发帖数: 225 | 36 第四类“重复” 验证实验信息：实名, 网络、论坛发布
- 重复、拓展验证实验不能支持NgAgo基因组编辑功能
- 包含有具体实验信息（eg实验材料，步骤，etc）以及发布方具体信
息的发布报告
- 需包含发布时间
- 建议注明是否应用2016年8月8日韩春雨组在Addgene更新的Protocol的相关条件
信息简述：
- 发布方：Thomas DANIELE
- 发布时间：2016年8月16日
- 发布平台：wormbase forum
- 发布方国家：Austria 奥地利
- 发布方城市：Vienna 维也纳
- 发布方研究机构：Research Institute of Molecular Pathology (IMP)学総合研
究所
- 实验室PI：Dr. Cochella
- NgAgo的来源：Synthetic codon optimized NgAgo
“NgAgo DNA sequence has been taken directly from Entrez NCBI, then codon
o... 阅读全帖 |
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c********n
发帖数: 225 | 37 第四类“重复” 验证实验信息：实名, 网络、论坛发布
- 重复、拓展验证实验不能支持NgAgo基因组编辑功能
- 包含有具体实验信息（eg实验材料，步骤，etc）以及发布方具体信
息的发布报告
- 需包含发布时间
- 建议注明是否应用2016年8月8日韩春雨组在Addgene更新的Protocol的相关条件
信息简述：
- 发布方：Dr Joseph Miano
- 发布时间：2016年9月27日
- 发布平台：google groups
- 发布方国家：美国
- 发布方城市：Rochester NY
- 发布方研究机构：U Rochester
- 实验室PI：Dr Joseph Miano
- NgAgo的来源：original NgAgo sequence or codon optimized NgAgo, with
elements designed for expression in mouse
- 应用验证实验结果: 无法验证韩春雨NgAgo基因编辑的实验结果， 实验室在
Addgene proto... 阅读全帖 |
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c********n
发帖数: 225 | 38 第四类“重复” 验证实验信息：实名, 网络、论坛发布
- 重复、拓展验证实验不能支持NgAgo基因组编辑功能
- 包含有具体实验信息（eg实验材料，步骤，etc）以及发布方具体信
息的发布报告
- 需包含发布时间
- 建议注明是否应用2016年8月8日韩春雨组在Addgene更新的Protocol的相关条件
信息简述：
- 发布方：Thomas DANIELE
- 发布时间：2016年8月16日
- 发布平台：wormbase forum
- 发布方国家：Austria 奥地利
- 发布方城市：Vienna 维也纳
- 发布方研究机构：Research Institute of Molecular Pathology (IMP)学総合研
究所
- 实验室PI：Dr. Cochella
- NgAgo的来源：Synthetic codon optimized NgAgo
“NgAgo DNA sequence has been taken directly from Entrez NCBI, then codon
o... 阅读全帖 |
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c********n
发帖数: 225 | 39 第四类“重复” 验证实验信息：实名, 网络、论坛发布
- 重复、拓展验证实验不能支持NgAgo基因组编辑功能
- 包含有具体实验信息（eg实验材料，步骤，etc）以及发布方具体信
息的发布报告
- 需包含发布时间
- 建议注明是否应用2016年8月8日韩春雨组在Addgene更新的Protocol的相关条件
信息简述：
- 发布方：Dr Joseph Miano
- 发布时间：2016年9月27日
- 发布平台：google groups
- 发布方国家：美国
- 发布方城市：Rochester NY
- 发布方研究机构：U Rochester
- 实验室PI：Dr Joseph Miano
- NgAgo的来源：original NgAgo sequence or codon optimized NgAgo, with
elements designed for expression in mouse
- 应用验证实验结果: 无法验证韩春雨NgAgo基因编辑的实验结果， 实验室在
Addgene proto... 阅读全帖 |
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D********d
发帖数: 2154 | 40 Sample name: ssDNA NgAgo-induced DYRK1A
Submission： Hebei University of Science and Technology, Feng Gao; 2016-03-
11
《捉NgAgo》
池塘裡水滿了 雨也停了
老千的实验室里到處是NgAgo
天天我等著你 等著你捉NgAgo
韩副主席好不好 咱們去捉NgAgo
我们的韩副主席帶著你捉NgAgo
韩副主席好不好 咱們去捉NgAgo |
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m****a
发帖数: 270 | 41 你这相当于要KI两个不同长片断来筛选biallelic mutation
感觉技术上可行，不是这方面的专家，我就说一点我个人的一点点看法
1. 编辑的效率比利用ssDNA oligo 作为Donor 低不少。
2. 两个位点同时KI GFP或者RFP这两种情况被排除掉了也进一步降低了效率
3. 要克隆和转染的质粒有点儿多，实验上操作有点复杂。 |
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c********n
发帖数: 225 | 42 对于韩春雨NBT文章无法重复的问题
需要从Figure 1 开始一步步看
作者的contributions
1. C.H. conceived the study and designed the experiments.
文章 “Story” “Idea” 的设计与发起人
2. X.Z.S. provided intellectual advice on the project and experimental
design.
实验设计， “One guide-faithful” -Figure 2d？
3. C.H. performed mammalian genome editing.
（Figure 4,5）
文章里让科研界最感兴趣的结果，也是无法被重复验证的主要问题
4. F.G. performed the BLAST search and the in vitro cleavage experiments.
（Figure 1, supplementary figure 2）
大肠杆菌E coli 表达的蛋白
NgAgo 基因编辑功能的初步 in vitro 数据支持
注... 阅读全帖 |
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c********n
发帖数: 225 | 43 【再贴一次】
对于韩春雨NBT文章无法重复的问题
需要从Figure 1 开始一步步看
作者的contributions
1. C.H. conceived the study and designed the experiments.
文章 “Story” “Idea” 的设计与发起人
2. X.Z.S. provided intellectual advice on the project and experimental
design.
实验设计， “One guide-faithful” -Figure 2d？
3. C.H. performed mammalian genome editing.
（Figure 4,5）
文章里让科研界最感兴趣的结果，也是无法被重复验证的主要问题
4. F.G. performed the BLAST search and the in vitro cleavage experiments.
（Figure 1, Figure 2？，Figure 3a，supplementary figure 2）
大肠杆菌E coli 表达的蛋白
NgAg... 阅读全帖 |
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c********n
发帖数: 225 | 44 关于韩春雨NBT论文重复性的问题
【记录历史】需要记录一下：
1 沈啸老师没有原始数据，也无法重复验证NgAgo基因编辑实验
- 沈老师对于NBT论文中的数据和结论就没有发言权了
- 这样情况下，还是否应当在文章作者list上？
- 这样情况下，还是否应当在专利拥有者list上？
2. NBT文章的fig 4， fig 5 是没有人能重复出来的
- 这两个图支持 NgAgo in vivo gene editing acitivity
- 按作者贡献，是韩春雨做的实验
- 原始数据应当韩春雨拥有
3. 有没有人能够重复出来 NgAgo 的in vitro DNA nick、DSB activity？
- NBT文章的fig 1， fig 3a，b，supplementary fig 1， supplementary fig 2
- 按 文章贡献，应当是高峰做的实验
- 原始数据高峰应当拥有
- 高峰有没有自己重复过这些实验呢？
4. 有没有人能够重复出来 NgAgo 的in vivo cleavage activity？
- NBT文章的fig 3c,3d
- 按 文章贡献，应当是... 阅读全帖 |
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c********n
发帖数: 225 | 46 http://www.mitbbs.com/article0/Biology/32051025_0.html
2016.10.25
关于韩春雨NBT论文重复性的问题
【记录历史】需要记录一下：
1 沈啸老师没有原始数据，也无法重复验证NgAgo基因编辑实验
- 沈老师对于NBT论文中的数据和结论就没有发言权了
- 这样情况下，还是否应当在文章作者list上？
- 这样情况下，还是否应当在专利拥有者list上？
2. NBT文章的fig 4， fig 5 是没有人能重复出来的
- 这两个图支持 NgAgo in vivo gene editing acitivity
- 按作者贡献，是韩春雨做的实验
- 原始数据应当韩春雨拥有
3. 有没有人能够重复出来 NgAgo 的in vitro DNA nick、DSB activity？
- NBT文章的fig 1， fig 3a，b，supplementary fig 1， supplementary fig 2
- 按 文章贡献，应当是高峰做的实验
- 原始数据高峰应当拥有
- 高峰有没有自己重复过这些实验呢？
4. 有没有人能够重复出来... 阅读全帖 |
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t*****i
发帖数: 13 | 47 问个基础的生化问题：
ssDNA之间的结合力（假设是100bp）和Ligand-receptor的结合力比起来哪个更强？哪
里可以查到常见的 Ligand-receptor组合的 Kd或者IC50?
谢谢！ |
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m****s
发帖数: 18160 | 48 2016年5月2日，英国《自然》杂志子刊《自然 生物技术》刊载了一篇有关"基因编辑工具"的论文，论文负责人的英文署名是"Chunyu Han"，这篇论文在华人生物界获得广泛赞誉。论文发表的第二天，韩春雨的名字和论文在一个名为"生物艺术全球生物医学交流"的微信群里得到了热烈讨论。生命体从受精卵开始，经过不断分裂，可分化出大约60兆亿个构建人类身体的细胞，每个细胞都含有全部生命遗传信息的基因组，所谓基因组编辑技术，就是人为来调整、改变、插入、去除、修改个体或物种的基因组序列。
http://tv.cctv.com/2017/05/20/VIDEBZRf7rQNg2Y1ExpBhpQM170520.shtml
一、学界和媒体的热议Mitbbs.com
一年前，英国《自然生物技术》杂志刊载了一篇有关"基因编辑工具"的论文。论文的负责人"一鸣惊人"，得到了学界和媒体给予的无限荣光。在《自然》杂志社的所属期刊上发表论文，通常表明，该科研成果走在了世界科学研究的最前沿，并有可能对未来科学的发展起到关键性作用。此消息一经媒体爆出，在站内引起站内相关专业人士的热议。
国内科研水平不得了了... 阅读全帖 |
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发帖数: 34 | 49 尘埃落定韩春雨? Nature Biotechnology 撤稿 NgAgo!
原创2017-08-03 知社 知社学术圈
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北京时间8月3日，在经历过长达一年多的纷争和等待之后，Nature Biotechnology应韩
春雨等作者的要求，撤稿其发表于2016年5月的NgAgo论文。
从一鸣惊人到一波三折再到一声叹息，这一年多，中国学术界和韩春雨走过来了什么样
的历程？“身心疲惫”？NgAgo的争议，是否又就此尘埃落定？ 请看知社对这一里程碑
事件的回顾，和业内人士特约独家点评。
首先，我们来回顾一下NgAgo事件的主要发展过程与关键时间节点。
2014年2月，荷兰科学家John van der Oost在Nature杂志发表论文，报道TtAgo可以在
高温条件下体外切割DNA。韩春雨受到启发，开始利用Argonaut进行基因编辑，并在
2014年5月中旬取得关键突破。
2015年6月3日，韩春雨向Nature Biotechnology投稿。12月21日，浙江大学沈啸和韩春
雨提交“以Argonaute核酸酶为核心... 阅读全帖 |
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a****r
发帖数: 12375 | 50 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: arthir (阿瑟~不懂), 信区: Military
标 题: 韩春雨教授正告颜宁等黑子
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Aug 3 00:29:00 2017, 美东)
韩春雨研究团队声明
发文时间：2017-08-03
自2016年5月2日国际期刊《自然·生物技术》（Nature Biotechnology）发表《NgAgo-
gDNA为导向的基因编辑技术》论文以来，多家实验室发表论文提出，采用该论文中提供
的实验方法与流程（protocol），不能重复其关键结果（Figure4），且至今尚无第二
篇表明NgAgo-gDNA可以有效进行基因编辑的论文发表，韩春雨及其论文共同作者决定主
动将该论文撤回，同时，将进一步研究不能重复其关键结果的原因，以期提供更详实有
效的实验方法与流程。关键实验条件标准化后的实验方法与流程将会尽快发布。
韩春雨团队一直在进行深入的实验研究工作。在近期的实验中已经发现，将ssDNA
guide 成功导入细胞以结合NgAgo是NgAgo进行有效基因编辑的关键。在满足一些关键条
件... 阅读全帖 |
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