y****l
发帖数: 1 | 1 大家好，我最近拿到了一个十二个跨膜结构膜蛋白的晶体，正在做SeMet标记晶体。
我用的菌株是：B834（DE3）
培养基：M9+19个氨基酸+0.5%glycerol+ 5%glucose +Thiamine+1mM MgSO4+0.1mM
CaCl2+0.05mg/ml selenomethionine+amp
温度：37°
培养时间：24小时
用这样的方法，没4L菌可以大概拿到3毫克的蛋白。
现在问题是3毫克蛋白根本不够我用来长晶体。
问题：
1.在养细胞的时候我发现离心以后上清还是很浑浊，还有大量的菌在上清中无法被离下
来。我
加大了离心的速度和时间，还是无法离下来。有好多菌附着在离心管壁上。不知道这是
为什
么？
2.离下来的菌有一些黄黄的东西，而且是比较多的。通过我的纯化，我发现这些黄黄的
东西是
不能被detergent溶解的，里面没有我的目的蛋白。不知道这些黄黄的东西是什么？
3.离下来的菌在悬在buffer的时候，我发现很粘稠，和我用与表达非标记蛋白用到的菌
的时候
是完全不一样的。是不是菌破裂了，dna跑了出来。很奇怪。
4.长SeMet derivative pro... 阅读全帖 |
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O*****a
发帖数: 11621 | 2 恶魔的片尾曲我很喜欢
听得我伤心死了 泪眼
http://www.tudou.com/programs/view/YyapYyg9rvk/
「爱してる」っていうあなたの言叶は「さよなら」よりも哀しい
aishiterutte iu anatano kotobaha sayonara yorumo kanashii
（你说你爱我 却比跟我说再见更让我伤心）
これ以上 何も言わなくていい だから この夜を止めてよ
kore ijou nanimo iwanakute ii dakara kono yoruwo tometeyo
（不要再说话 就让今晚停在这一刻吧）
呼吸(いき)するみたいに ふたりは出会ったね 疑いもせずに
ikisurumitaini futariha deattane utagaimoserzuni
（我们的相遇仿佛呼吸一样自然 确定无疑）
伤つけ 伤つき 痛みこそ爱だと 信じてきた日々
kizutsuke kizutsuki itamikoso aidato shinjitekita hibi
（一直坚... 阅读全帖 |
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b********n
发帖数: 38600 | 3 On the local AM radio they had a guy call in, local black guy who frequently
does, to point out that the US is controlled by Israel and that Iran
actually isn't an enemy. First words out of the disc jockey's mouth: not
supporting Israel is "anti-semetic", and then the whole diatribe about them
being our "greatest ally" and "the only democracy in the ME", and on and one
, the same old tried and tired lies.
https://thesaker.is/zionism-judaism-and-the-jewish-state-of-israel/ |
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l****z
发帖数: 29846 | 4 March 21, 2012 Posted by Shawn Mallow
By now, most all of us who follow politics have heard the collective barking
over Mitt Romney and his dog, Seamus.
Seems in 1983, Mitt saw fit to attach Seamus’ kennel to the top of his car
while driving to a family vacation.
I adore animals, including our clunky, slobbering, faithful doggies. And
while I can’t understand why anyone would pop a pup on the roof of their
car, the way this tail (excuse me, tale) has played out in the current
political realm i... 阅读全帖 |
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z***0
发帖数: 238 | 6 是一个偏向于teaching的school，每个semeter交两门课。
一个系只有几个phd.而且对自己招的Ph.D.只提供2年的stipend (start-up package)
每年要发一篇文章，对grant没有要求。
系主任介绍完之后，没有怎么问我问题，15分钟就完了。另外，他说要开会才能决定给谁on-site. 不大热情的样子。
哎，估计out了 |
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s*******e
发帖数: 515 | 7 【 以下文字转载自 Visa 讨论区 】
发信人: seraphine (Taotoro), 信区: Visa
标 题: F1，即将申请OPT，回国风险大么？
发信站: BBS 未名空间站 (Wed May 22 19:07:13 2013, 美东)
F1，8月份毕业（summer semeter只注册了一个学分），马上要申请OPT了；想回国一趟
，返签会有问题么？是不是在OPT申请还没交上去前回去比较好？
请有类似经验的GGJJ指教！不甚感激！ |
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s*********1
发帖数: 25 | 8 情况有点特殊：本人10年末拿到绿卡 然后2011 spring semeter的时候补申请了大一的
financial aid。。。今年大二又继续申请FA。。。然后发现今年学校给的的1098T表上
面 5.Scholarships or grant的金额比 2.Amounts billed for qualified tuition
and related expense要多了不到1W 原因是因为 当我大一申请FA的时候学校给我发FA
的时候是在2011年 学校说他们算1098T的时候是按照颁发FA的时间来统计的 所以相当
于两年的FA都统计在一年里面了 这样才导致了比学费高。。。 我没有填2010年的tax
return。。。所以今年天11年的tax return的时候能否把2010年的学费也加到2011年的
学费里面报税？ 这样子的话学费和FA的金额就match up了？ 请各位大神帮帮忙啊！
还有第二个问题：母亲一直在国内工作 有绿卡，应该怎样给她报税？直接把她的收入
金额填到1040EZ里面对应的格子里就好了吗？ 有没有什么要注意的？
万分感谢各位！！！！ |
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s*******e
发帖数: 515 | 9 F1，8月份毕业（summer semeter只注册了一个学分），马上要申请OPT了；想回国一趟
，返签会有问题么？是不是在OPT申请还没交上去前回去比较好？
请有类似经验的GGJJ指教！不甚感激！ |
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s*******e
发帖数: 515 | 10 F1，8月份毕业（summer semeter只注册了一个学分），马上要申请OPT了；想回国一趟
，返签会有问题么？是不是在OPT申请还没交上去前回去比较好？
请有类似经验的GGJJ指教！不甚感激！ |
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N********8
发帖数: 13 | 11 最近打算注册考 CPA. 在填 application of intent 的时候遇到了两个问题。 希望有
经验的朋友提供点信息。
第一， the board requires that a minimum of two semeter credit hours in
research and anaylsis relevant to the course content described in subsection
(c)(6) or (7).
我想请问大家在申请表格填对应课程时这一栏一般都填的什么课程？ 我毕业前最后一
门高级会计课程叫 Senior Seminar, 具体就是做 case analysis. 可以填这个吗？ 考
试中心怎么根据名字来判断这门课符合要求呢？
第二， the board requires that a minimum of two semester credit hours in
accounting communications or business communications be completed.
我符合要求的那门课是从国内转学分过来的 |
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g*****p
发帖数: 451 | 13 3mg的蛋白已经很多了，怎么可能不够你长晶体
又不是做nmr，不需要那么高的浓度的
离心不下来的基本都是细胞死掉了
因为Se-Met的毒性外加你的minimum medium的缘故
另外就是S->Se导致极性变弱了
水溶性太差
达到过饱和的浓度也比原来低了
把你的蛋白浓度稍微继续降低点 |
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s*******e
发帖数: 1010 | 15 Se-Met和WT几乎就是两个蛋白，十几个突变在那里，性质不一样很正常，应该重新
screen生长条件，不能抱住WT的条件不放手。
DDM都出沉淀的话确实不是好兆头，你如果在室温下长晶体的话应该试试4C |
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F*******2
发帖数: 103 | 16 3mg的蛋白够你set up不少tray了吧。。。 |
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s*****h
发帖数: 460 | 17 yes,I know I can argue this with the board.however, something is not right
with the accreditation itself.We might be able to do something to correct
this.As I understand it,NCEES,CPEES,board, all follow ABET criteria, but
does ABET give guidelines ho to evaluate the credits from other countries?
kind of frustrating, I took advanced math (2 semeters, 6 credits each
semester),general chemistry, generl physics(2 semester), gology,linear
algebra,etc. still failed.
still |
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k**e
发帖数: 2728 | 18 i took a spoken english class when i first came to grad school here for corr
ecting my accent, and then taught a semeter (some sort of lab class but each
class must present 15 mintues talk to students), i felt like reading englis
h fictions help as well. I barely watch TV or movies, not that i don't have
access to it, but i got easily scared by a lot of story plots. Based on my e
xperience, if you are not a grad student here (and no chance to teach), you
can just go out to grab some volunteer op |
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