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l**********1
发帖数: 5204 | 2 sorry
当时走神
看成
应该说为数不多的露天(铜)矿或者浅层(铁)矿 了 然后回的帖
不过 后来一琢磨 美帝No. 51 base 里的外星人标本 金属含量
尤其是iron 可能远高于人体内的iron 含量 -------just one cent
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发信人: unfieldified (未场化的蛮), 信区: Biology
标 题: Re: oocytes derived from mESC/iPSC develop into normal, fe
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Oct 5 16:41:45 2012, 美东)
应该说为数不多的露天矿或者浅层矿。再往后的器官、组织的协调发育就更难了 |
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F*K
发帖数: 608 | 3 最近刚开始接触mESC，就遇到一个头疼的问题：我研究的蛋白A表达水平不稳定，上次
实验还能测出很高的表达，但细胞冻存复苏后，A就检测不到了（细胞形态正常，无分
化）。
我知道干细胞是一个动态平衡的体系，但蛋白水平不应该有太大的波动吧？有人有类似
经历吗？请指教！ |
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l*******i
发帖数: 153 | 4 有意思。
是female mESC吗？是的话，先做两个实验：
1）H3K27me3 immunostaing：可能发现small dot in nucleus.
2)qRT-PCR测Xist的表达，或者用FISH。
证实的话，就说明出现X chormosome inactivation了。
几个问题：
3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
大新意取决于你的这个gene
2）看一下这个基因的功能，是否已有先关报道，与X chromosome reactivation有关。
是histone modifier, TF还是在X chromsome上的新lncRNA? |
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l*******i
发帖数: 153 | 5 Xist下调是RNA-seq的结果，还是qPCR结果？这一点比较奇怪，与X chromosome
inactivation不一致。
按理说，在mESC中，X chromosome是active的，即XaXa，Xist应该不表达才对。Xist表
达时，会把其中一条X chromosome“包裹”起来，这条chromosome进而失活。X
inactivation一般指发生在female mEpiSC与分化的细胞中.
你这个结果与理论相反，X chromosome基因下调时，Xist竟然也降低。Xist在对照和
knockdown细胞中的表达分别是多少(RPKM or CT value)？
另一个问题，由于你用的培养条件是serum+LIF,这会导致heterogeneity.建议你用2i/
LIF.
knockdown mESC分化明显吗？ colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
形态？
如果你确定用的是female mESCs的话，建议先做H3K27me3 staining,看看X chromosome
是不是失活的。 |
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o**i
发帖数: 1165 | 6 5 楼说得对.mESC XaXa的
我记得naive的mESC是 XaXa的到了primed阶段就变成了XaXi,自然X上的gene有差别.我
忘记这两者之间有哪个gene的变化了.但colony形态上会有差别.
我猜可能你哪个基因跟维持mESC 的naive状态相关. |
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i*********0
发帖数: 915 | 7 我明天确认一下是不是female 的ESCs。
对于其他的问题：
几个问题：
3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
serum + LIF的培养条件
1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
大新意取决于你的这个gene
如果要看Oct4等gene的表达的话，RNA 水平上看到降低，Protein水平上有20%左右的降
低。但是这些pluripotency的gene在蛋白水平还维持在一个高的状态。
2）看一下这个基因的功能，是否已有先关报道，与X chromosome reactivation有关。
是histone modifier, TF还是在X chromsome上的新lncRNA?
该gene目前的功能还不清楚。另外，我看到Xist gene在shRNA处理想样品中，在RNA水
平上有3倍数的降低。 |
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L****T
发帖数: 169 | 8 我当时没有检测到表型就没有发文。他们的表型和我当时的hypothesis是一样，用的
mESC分化protocol也都一样（都是follow一个大牛的方法），我当时除了shRNA kd，还
用了chemical inhibitors，其他几个lab用KO的mESC貌似也没有看到这个表型。 |
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L****T
发帖数: 169 | 9 我当时没有检测到表型就没有发文。他们的表型和我当时的hypothesis是一样，用的
mESC分化protocol也都一样（都是follow一个大牛的方法），我当时除了shRNA kd，还
用了chemical inhibitors，其他几个lab用KO的mESC貌似也没有看到这个表型。 |
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t*******a
发帖数: 4055 | 11 以媒称美国退出联合国教科文组织震惊了以色列 决定前无协商
来源：中东研究通讯 作者：MESC编辑部 时间：2017-10-16
13 0 以色列 字号:A-A+
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巴勒斯坦与以色列
根据犹太通讯社10月13日报道，在美国退出了联合国教科文组织后，以色列也将准备退
出。然而据《国土报》15日报道，美国国务院在宣布这一决定前，并没有告知以色列，
以色列官员也是从媒体上得知。媒体公布后，美国才告知以色列在内的盟友。也就说，
美国做这一决定时没有和以色列有任何沟通。
据悉，以色列总理得知这一消息后，才紧急通知以色列外交部长做好“响应”美国这一
决定，准备退出联合国教科文组织。
随后内塔尼亚胡对外表示：“美国退出联合国教科文组织是一个令人鼓舞的，符合道德
的决定。联合国教科文组织已经从保护历史变成了歪曲历史的荒唐地方。”
就在今年七月，联合国教科文组织宣布把约旦河西岸的希伯伦老城列为濒危世界遗产名
录中，而在之前联合国教科文组织经连续通过多个有关于耶路撒冷的决议，并且同时否
认耶路撒冷和犹太人的联系。
根据环球以色列商业网（Globes—Israel’s Business... 阅读全帖 |
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c****e
发帖数: 188 | 12 SNL 自己express LIF,那么做feeder的时候,mESC 的culture medium里就不用加LIF,
是不是这样? |
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i*****g
发帖数: 11893 | 13 怎么要这么多时间？
我也挑过mESC colonies
你不需要克隆长很大，一点点大就可以了，在解剖镜下看，用20ul tip，一撮一吸就可
以了 |
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F*K
发帖数: 608 | 14 最近刚开始接触ES cell，研究一个基因的功能。几个stable shRNA KD的细胞系，从形
态上看和control KD没有什么显著区别。
请问一下我该从哪里着手找phenotype呢？
谢谢 |
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i*****g
发帖数: 11893 | 16 没那么麻烦，GST-lif expressed in e coli
然后纯化，然后thrombin切割
大概一次提个1mg 蛋白，随便用在mESC 细胞培养里面，没有问题的
我都做过N次的，简单的一壶， |
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s******y
发帖数: 28562 | 20 Cool!
非常好奇里面的几个相关问题。
1。里面的epigenetic marker 以至端粒长度是否被reset 了？
2。如果用公老鼠的体细胞，能产生卵子么？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 24 既然都是从体细胞转化来的，为什么不可以？
而且成熟后的卵子是单倍体啊。
如果是公老鼠来源的，最多就是最后产生的卵子中有一半带有Y, 如果碰到
Y 精子就不能产生后代就是了
不过其实我最感兴趣的还是第一个问题，就是有关epigenetic marker and telomers的
问题。其实领域里对这些问题一直都很好奇，但是一直没有什么好办法来直接研究这些
问题。这篇文章的结果将会对此提供一个非常重要的工具。 |
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m***i
发帖数: 4637 | 26 我也看到了
Nature上也有一个要online了吧 |
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s******y
发帖数: 28562 | 27 所以这个就是一个关键问题，就是XY细胞是否能够成为oocyte?
貌似以前的那个精子的文章里，（不知道是不是我记错了）XX细胞也能被诱导
成精子的？ |
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a*****x
发帖数: 901 | 30 是我猜测应该不行，因为印象中有XXY的人但是没有XY的oocyte。
当然只是我的猜测。。。
以前那个精子文章我记得只能是male的。而且精原细胞小，而且是对称分裂，比oocyte
形成和分裂简单得多。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 31 不育并不一定就是Y染色体有缺陷啊。
而且。。。如果。。。真的一狠心，可以用那个男的体细胞来做成X卵子，
然后用另外一个男的Y精子。。。不就可以生出男孩了么？
只不过这样一来，原来那个男人的老婆和这个孩子就没有什么关系了，估计
会大大不满。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 32 XXY的人能产生卵子么？
难道他们不都是不可育的群体么？
oocyte |
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a*****x
发帖数: 901 | 33 这篇文章开头就有的：
“We have shown previously that embryonic stem cells (ESCs) and induced
pluripotent stem cells (iPSCs) from male (XY) mice are induced into epiblast
-like cells (EpiLCs), which are in turn induced into primordial germ cell–
like cells (PGCLCs) with proper function for spermatogenesis and offspring
production”
所以精子用的是XY
oocyte |
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D*a
发帖数: 6830 | 35 但是如果Y搞不成卵子，就生不出来"他的"男孩啊。
哦看了刚刚的回复，看来男人能搞出来精子，女人能搞出来卵子。
刚才回帖的时候没看最新的回复 |
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s*******e
发帖数: 1389 | 37 不育男的的体细胞能去分化成精子就可以了（Y sperm），再和你喜欢的女的的卵子人
工受精一下。这个oocyte给不育女的用的。 |
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m***i
发帖数: 4637 | 38 不是的
这个应该叫free mating才准确 |
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s******y
发帖数: 28562 | 39 是啊，所以现在一个有趣的问题就是，XX 能诱导成精子么？以及XY 能诱导成
卵子么？
自然界存在的XXY 以及 YYX 都是表现为男的，所以这个可能性不能直接推导，
必须试了才知道。不过这个肯定会比原来的实验更复杂一些吧。
另外，其实我对这个实验最感兴趣的还是epigentic marker, x-silencing 这些
问题。 |
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m***i
发帖数: 4637 | 40 理论上显然可以啊
要相信遗传学基本知识点lol |
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a*****x
发帖数: 901 | 41 epigenetics marker应该是被reset了，否则怎么变成oocytes呢。telomere length应
该在iPSC的时候就变了，因为激活了telomerase。
凭感觉XY还是不能诱导为卵子，感觉如果可以的话Single X的人应该也能产生卵子。不
过值得试一试。我猜他们应该也试过，还没有成功。
我个人认为在人的细胞中重复这个发现比做这个性别错乱更有实用价值。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 43 不一定啊，比方说也许XY体细胞里的Y 染色体上的基因会抑制这个细胞发育成
卵细胞怎么办？
XX发育成精子就更难，因为貌似有一两个精子发育需要的基因是位于Y 染色体
上的。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 44 在人细胞上重复这个？估计哪个实验室只要走漏了风声让别人知道他们在
做这个，保管第二天整个实验室就会被愤怒的宗教分子，环保分子以及各色
人士一起砸个稀巴烂！ |
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a*****x
发帖数: 901 | 45 没那么夸张。这个文章自己还说最后可以给不孕不育带来福音。如果不做人怎么实际应
用。而且人和小鼠的干细胞一直以来都知道有很本质的区别，所以做人是必要的，至少
可以做到egg和sperm的阶段，至于胚胎会比较麻烦。。。 |
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m***i
发帖数: 4637 | 46 联想到haploid是可以活下来
然后再走sperm或oocyte |
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s*******e
发帖数: 1389 | 47 理论可以？至今为止iPSC到sperm or oocyte的过程都是黑盒子，最复杂的一点就是PGC
如何与niche cell communicate。举个例子（我不是做老鼠的，业余看的），male PGC
：SRY on Y chromosome--->SOX9--->FGF9--->(gonad cell->sertoli cells）--->
male PGC
如何让XX iPS cell 与male gonad interaction？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 48 问题就是至少得作到胚胎阶段才能知道是不是真的是functional egg and sperm.
你看这个文章里面是一直做到了第二代。 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 50 侯赛因连任的话 有可能
不然 No way to that kind of research in States.
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