x********u
发帖数: 430 | 1 TWO POST-DOCTORAL POSITIONS
Self-splicing introns and inteins: Structure, Function, Evolution,
Application
Postdoctoral positions are available in the Marlene Belfort lab to study
both self-splicing introns and inteins. The group investigates both the
dynamics of retrotransposon-like group II introns and their evolutionary
relationship to spliceosomal
introns, and the structure, function, evolution and application of the
protein-splicing inteins.
The successful applicants will use genetic, bioch... 阅读全帖 |
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c********b
发帖数: 363 | 2 不知道大家是怎么纯化抗体的，挂IgG的proein A柱子得到的肯定不纯。
如果是用antigen－affinity purification就会好很多。只是有时候那个his－tag还是
会干扰。一个师兄教我先用一个带HIS6的无关蛋白把non-specific的先去掉（比如
sunnyday最喜欢的actin就被我加了his6来干这事），然后再来做antigen－affinity。
如果是intein－tag提出来的这一步都可以省掉，只是intein得到的蛋白量好像没有his
－tag提出来的多。
要提到的是这个protocol在我手上得到的抗体浓度很低，我一般用1：100稀释，但是很
特异。还有就是不太适用于IP。
这个方法不用挂柱子，跑SDS－PAGE，直接转到膜上，block之后先把血清和actin－
his6（in my case）的膜放2hr，然后上清拿出来和block过的antigen的膜泡2hr，
Wash with 1XTBS（contains 0.02％ sodium azide) twice, 10 min each，Elute
with glycine（pH3）... 阅读全帖 |
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c********b
发帖数: 363 | 3 不知道大家是怎么纯化抗体的，挂IgG的proein A柱子得到的肯定不纯。
如果是用antigen－affinity purification就会好很多。只是有时候那个his－tag还是
会干扰。一个师兄教我先用一个带HIS6的无关蛋白把non-specific的先去掉（比如
sunnyday最喜欢的actin就被我加了his6来干这事），然后再来做antigen－affinity。
如果是intein－tag提出来的这一步都可以省掉，只是intein得到的蛋白量好像没有his
－tag提出来的多。
要提到的是这个protocol在我手上得到的抗体浓度很低，我一般用1：100稀释，但是很
特异。还有就是不太适用于IP。
这个方法不用挂柱子，跑SDS－PAGE，直接转到膜上，block之后先把血清和actin－
his6（in my case）的膜放2hr，然后上清拿出来和block过的antigen的膜泡2hr，
Wash with 1XTBS（contains 0.02％ sodium azide) twice, 10 min each，Elute
with glycine（pH3）... 阅读全帖 |
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w********2
发帖数: 632 | 4 Mobile genetic elements
MGEs are non-essential (accessory) genomic elements composed of genes and
structural features that facil- itate their spread both within and between
organisms (Doolittle and Sapienza, 1980; Orgel and Crick, 1980). They are
found in the genomes of all prokaryotes and eukaryotes. MGEs share many
features and often share a common ancestry with viruses. The main difference
is that viruses are usually capable of extracellular persis- tence.
MGEs, including defective forms, are... 阅读全帖 |
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w********2
发帖数: 632 | 5 HGT involving prokaryotes
Many studies support the significant role of HGT in the evolution of
prokaryotes (Gogarten et al., 2002; Jain et al., 2003; Kunin and Ouzounis,
2003). The principle sources of novel genes are provided by other prokary-
otes, viruses and MGEs (Fig. 1). In particular, plasmids and composite
mobile elements contribute significantly to HGT between prokaryotes. In some
cases, composite elements and megaplasmids are composed of more than 100
genes (Bentley et al., 2002; Hacke... 阅读全帖 |
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z****l
发帖数: 5282 | 6 ☆─────────────────────────────────────☆
geniusyao (michael) 于 (Fri Dec 28 21:38:09 2007) 提到:
请问准备从美国WIRE TRANSFER到中国，国内银行收手续费么？仅仅是美国这边收手续
费么？还有WIRE TRANSFER是电汇的意思么？谢谢。
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intein82 (intein) 于 (Fri Dec 28 21:40:35 2007) 提到:
精华区
还有考古以前的帖子
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geniusyao (michael) 于 (Fri Dec 28 21:41:19 2007) 提到:
能给我个QUICK ANSWER，谢了。
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kubuntu (苦苯土=JessicaDad) 于 (Fri Dec 28 21:55:54 2007) |
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i******2
发帖数: 86 | 7 【 以下文字转载自 Travel 讨论区 】
发信人: intein82 (intein), 信区: Travel
标 题: 请教在disney, universal玩的时候的存包问题
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Dec 22 10:39:51 2009, 美东)
大家去disney的园子玩的时候都带包吗？到时候估计要背一个包带着，不知道玩那些项
目的时候包都放
哪里，院子里面有没有存包的地方？谢谢。 |
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i******2
发帖数: 86 | 8 【 以下文字转载自 Travel 讨论区 】
发信人: intein82 (intein), 信区: Travel
标 题: 请教一个在orlando打车的问题
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Dec 22 10:36:53 2009, 美东)
过两天去orlando，住在international drive上，发现现在租车都很贵，住的宾馆趴车
要十几一
天，再加上在disney趴车，觉得租车很不合算，所以想打车，反正只有两天去disney，
另外两天去环
球和seaworld宾馆都有很方便的shuttle。想问一下从international drive打车到
magic
kingdom单程大概多少钱？还有晚上如果玩的很晚在magic kingdom里面方便打到车回宾
馆吗？谢谢
了。 |
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i******2
发帖数: 86 | 9 【 以下文字转载自 Travel 讨论区 】
发信人: intein82 (intein), 信区: Travel
标 题: 请问disney的售票点都几点开门？
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Dec 22 21:41:31 2009, 美东)
跟公园的开门时间是一致的吗？还是会早点开门？谢谢。 |
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i******2
发帖数: 86 | 10 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区 】
发信人: intein82 (intein), 信区: Chemistry
标 题: Paper help, thanks very much!
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Mar 19 16:36:47 2010, 美东)
PULSE SEQUENCES FOR REMOVAL OF THE EFFECTS OF CROSS-CORRELATION BETWEEN
DIPOLAR AND CHEMICAL-SHIFT ANISOTROPY RELAXATION MECHANISM ON THE
MEASUREMENT OF HETERONUCLEAR T1 AND T2 VALUES IN PROTEINS
Author(s): KAY, LE; NICHOLSON, LK; DELAGLIO, F, et al.
Source: JOURNAL OF MAGNETIC RESONANCE Volume: 97 Issue: 2 Pages: 359-
375 Published: APR 1992
麻 |
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i******2
发帖数: 86 | 11 【 以下文字转载自 Returnee 讨论区 】
发信人: intein82 (intein), 信区: Returnee
标 题: 是发nature子刊二作还是发Biochemistry一作？
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Oct 8 16:39:27 2010, 美东)
手头一些数据想发掉，我自己想独立写篇一作，作者名字只有我和老板。但是老板的意
思是和我们合作者的数据放在一起，发一篇nature的子刊。而且的确他们的数据比我们
的要重要。那样的话我只能放在二作，不知道哪个更合适。 |
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i******2
发帖数: 86 | 12 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区 】
发信人: intein82 (intein), 信区: Chemistry
标 题: 3.0左右的文章有没有意义？
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Mar 5 20:58:40 2011, 美东)
当年来这里就是想发好文章的，不过research实在做得不怎么出色，phd快读完了眼看
着都没希望，只
能发3.0左右的文章发个四五篇，也不知道值得不值得在这条路上走下去了。以后只想
回国找个一般的学
校待着。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 13 纯感慨
我猜搞生物的没几个从来没有纯化过蛋白的
纯化过蛋白却没有用过这个tag那个tag、没有用过亲和层析的又是少之又少
His-tag，GST-tag等等真是大大方便了重组蛋白的提纯
很少再需要old school的技术
提纯蛋白变得不那么tricky
但是。。。。。
最近反思有点太过依赖于这些tag
有的时候没有能够充分利用蛋白本身的特性
因为有tag嘛
用差不多千篇一律的提纯步骤就好啦
不过要有些微调而已
手上在做的一个蛋白
比较大，高pI
以前大家都是加tag做
His-，GST-，intein-
放N端，放C端。。。。
产量低
容易沉淀出来
折腾半天也折腾不出来多少
一直被定性为比较麻烦难搞的蛋白
最近因为别的原因改了一下纯化流程
加了一个阳离子交换的步骤作为粗提
然后再亲和层析
结果出乎意料的好
蛋白浓缩到17mg/ml都没有沉淀的迹象
回头想想太依赖于亲和层析真是走了不少弯路呢
特此感慨 |
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c********b
发帖数: 363 | 14 可以试试NEB的Intein system,可以得到没有tag的蛋白.
另外,pI6.9, 你的buffer pH多少?不要太接近pI啊. 而且你用Tris buffer的话低温下pH不准(印象中是会变高).
为什么一定要pelB,是怕包涵体吗?如果是的话我可以给你一个protocol,基本上我试过
的蛋白都OK,而且保留活性,包括>100 Kd的T7 polymerase. |
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c********b
发帖数: 363 | 15 已经发了. 忘了说,我的方法对HIS tag或者Intein tag都适用. |
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d******n
发帖数: 29 | 16 Split intein mediated ultra-rapid purification of tagless protein (SIRP).
Guan D, Ramirez M, Chen Z.
Biotechnol Bioeng. 2013 Apr 8.
谢谢！！第一个发的有包子，不好意思，穷人包子不多。
请发到d******[email protected] |
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i******2
发帖数: 86 | 17 【 以下文字转载自 Returnee 讨论区 】
发信人: intein82 (intein), 信区: Returnee
标 题: 是发nature子刊二作还是发Biochemistry一作？
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Oct 8 16:39:27 2010, 美东)
手头一些数据想发掉，我自己想独立写篇一作，作者名字只有我和老板。但是老板的意
思是和我们合作者的数据放在一起，发一篇nature的子刊。而且的确他们的数据比我们
的要重要。那样的话我只能放在二作，不知道哪个更合适。 |
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i******2
发帖数: 86 | 18 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: intein82 (intein), 信区: Biology
标 题: 关于invited manuscript的接收几率
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Feb 20 20:46:35 2011, 美东)
某杂志最近要出一期special issue，老板在这个领域算是小有名气，所以被邀请写一
篇invited
manuscript。老板就把我的一点点数据整理了一下投了过去，不过在我看来数据真的是
太少了（其实
其他还有很多数据，不过老板说留着发其他杂志）。请问这种情况下接收几率大吗？ |
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