S*****n
发帖数: 6055 | 1 Dear Tsinghua Alumni and Friends,
It is our great honor to welcome the visit of Dr. HU Heping, Chief Secretary
of CPC Committee and Vice President of Tsinghua University.
Tsinghua Alumni at Yale University will host a reception session for all
alumni and friends of Tsinghua University tomorrow afternoon (Sat, Oct. 24).
Dr. HU and other leaders of Tsinghua University will be present and discuss
the development of Tsinghua University with you.
Time:
4:00 ~ 6:00 PM
Saturday, Oct. 24, 2009 |
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c********i
发帖数: 1489 | 2 【 以下文字转载自 Heart 讨论区 】
发信人: heping947 (heping), 信区: Heart
标 题: 达拉斯很冷----我的冬天
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Dec 26 13:11:35 2010, 美东)
达拉斯很冷，冷的很。本来希望迎接一个温暖的冬天，现在却和寒冷不期而遇。我被寒冷隔离了，公寓，车里，实验室成了永恒的画面。
回到冰冷的房间后不仅胃里一阵痉挛，像要把它全部清空才能获得一丝安慰，不禁同情起自残的wsn们。冲到卫生间洗把脸，喜欢冰水泼在脸上的感觉，那寒冷透过七窍弥漫到整个身体，寂寞也随之冰冻，这就是以毒攻毒吧。该吃东西了，昨天的残羹冷炙还历历在目，咬了一
半的朝鲜泡菜还瑟瑟的缩在米饭中间，等待着温暖的降临，但代价却是粉身碎骨，可怜的泡菜！一切还是昨晚的摸样，如果不是桌角一粒被遗弃的米饭旁边开会的蚂蚁，真的以为自己只是用餐间隙去了趟卫生间，可惜卫生间不是天宫：）。呆呆的盯着这动感的场景，仿佛远远看到自己昨天吃饭的样子，一个模糊的蠕动的背影。随着额头上最后一滴水的蒸发，不仅一个寒噤，把自己从痴呆状拉回现实。匆忙将这些余孽丢... 阅读全帖 |
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s***g
发帖数: 44 | 5 First Round Results - partial (square bracket[] indicates the winner):
1) Wang, Yishen vs [Liu Zhi Yuan(Andy)]
2) [Huang, Kevin] vs Chen, Zhaonian(Michael)
3) [Lui, Eric] vs Guo, Jing(Jimmy Creeks)
4) Zhao, Zhongxia(Ricky) vs [Zhang, Mengshen]
5) [Wang, Heping] vs Andrew, Naoki
6) Wang, Jun vs [Zhang, Lionel]
7) [Huang, Andrew] vs Imai, Yurika
8) [Yang, Jimmy] vs Teng, Justin
9) [Hatori, Yukiharo] vs Qian, Y... 阅读全帖 |
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s***g
发帖数: 44 | 6 4th Round
1) [Lui, Eric] vs Hung, Kevin
2) [Chen, Zhaonian] vs Zhang, Mengchen
3) [Zhao, Zhongxia] vs Wang, Jun
4) Guo, Jing vs [Zhang, Lionel]
5) [Huang, Andrew] vs Wang, Heping
6) Arakawa, Naoki vs [Imai, Yurika]
7) [Zen, Lingyu] vs Yang, Jimmy
8) [Teng, Justin] vs Hatori, Yukihiro
9) [Qian, Yingzhi] vs Song, Forest
10) Huang, Willis vs [Zhong, Sichen] |
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x***k
发帖数: 3311 | 7 Hepe to ski with you guys and learn from your teacher soon. |
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d**********n
发帖数: 3634 | 8
其实可以自己一个人去吃的，八个都下肚，多爽啊！
Oh also I highly recommend Shanghai Café on mott. Almost everything there
sucks, but their soup dumplings are really really good. Beats Shanghai Asian
Manor and Shanghai Gourmet and Shanghai Heping Restaurant and Joe's
Shanghai. |
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d********0
发帖数: 5142 | 9 ☆─────────────────────────────────────☆
scfysl (scfysl) 于 h 提到:
请拿出一张纸一支笔把你的答案写下来，回复后结论就在后面：
场景：
你在森林的深处，你向前走，看见前面有一座很旧的小屋。
(1) 这个小屋的门现在是什么状态？（开着/关着）
(2) 你走进屋子里看见一张桌子这个桌子是什么形状的？（圆形/椭圆形/正方形/长方
形/三角形）
(3) 在桌子上有个花瓶，瓶子里有水，有多少水在花瓶里？（满的/一半/空的）
(4) 这个瓶子是由什么材料制造的？（玻璃/陶瓷/泥土/金属/塑料/木头）
(5) 你走出屋子，继续向森林深处前进，你看见远处有瀑布飞流直下，请问水流的速度
是多少？
（你可以从0—10任意选一个）
(6) 过了一会，你走过瀑布，你站在坚硬的地面上，你看见地上有金光闪烁，你弯腰拾
起来，是一个带着钥匙的钥匙链。
有多少把钥匙拴在上面，你可以任意选一个数字（从1到10）
(7) 你继续向前走，试着找出一条路来，突然你发现眼前有一座城堡。这个城堡是什么
样的？
（旧的/新的）
(8)你走进城堡，看见一个游泳池，黑... 阅读全帖 |
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l*********r
发帖数: 674 | 10 【 以下文字转载自 Movie 讨论区 】
发信人: boguagua (厚瓜瓜), 信区: Movie
标 题: 变形金刚2比up和star trek好看太多了！！！！
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jun 26 23:09:31 2009, 美东)
TF2绝对本年度最佳了，比up和star trek强太多了，那两个太垃圾。俺英语暴烂，基本
上是啥也听不懂，特别是机器人说话带金属声就更是一点也听不懂了，俺也根本不想听
懂啥，就是去看变形和对砍的，这级比上一级好看多了，终于看清楚怎么变形的了，而
且打架也很好看、很清楚，袁和平是武术指导？（最后看了半天字幕也没找到 Yuan
heping或者Yuan peace)。
说下缺点：人类小孩的戏太多了，还搞了很多他爸他妈的戏出来，还有一个不认识的傻
了吧唧的大叔和另一个小屁孩，靠，他们又不会变形给那么多镜头干啥？讲笑话？不是
还有那两个小车那么？其实观众们不需要笑话..........
建议下一级：
1、删掉人类的戏份，统统删掉，不要有人类，也不要有美军的那些傻了吧唧的航母和
坦克，嗯，不会变形的垃圾全都不要。可以把情节安排在赛博 |
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S*********f
发帖数: 1938 | 11 ☆─────────────────────────────────────☆
nina2005 (nina) 于 (Wed Mar 23 11:17:37 2011, 美东) 提到:
不知道怎么写。
2006年开始读PhD，有次一起去外地开会，我误了航班，结果到半夜才到开会的那个城
市，导师先到了，他开车去机场接我，外面雨雾蒙蒙的，他边开车边和我聊一些工作上
的事情，从那天起暗恋上他了。
读PhD的几年，过得甜蜜又痛苦，能和他谈研究进度，聆听他的教导，让我感觉特别幸
福，他那么聪明，睿智。上他的课，心里就一直在想，以后就没有机会坐在他的课堂里
看着他听他讲课了，他说的每一句话，每一个字都深深的印在心里。
曾经以为毕业之后就会忘记，事实是到了新的地方，不能再看到他，每天都非常想念他
。吃饭，走路，工作，时时刻刻都在想他。在网上搜他的名字，看他的照片。
一点儿没有和他说过暗恋他的事，担心如果他不喜欢自己，伤自尊。有时又想人生苦短
，不如告诉他，不计后果，大不了以后永不见面，永不联系。有时又想还是彼此留个好
印象吧。偶尔收到他的email，谈论有关论文的事，都要高兴上好多天。
毕... 阅读全帖 |
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x******n
发帖数: 8550 | 12 这个hepes viral infection的猫是不是应该两个眼睛都发红？
ie=UTF8&s=home-garden&qid=1270854376&sr=8-3 |
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x******n
发帖数: 8550 | 13 我来更新一下。
在网上看到hepes viral infection的猫经常是一个眼睛有症状，所以也有去买了L-
lysine。但是我的猫猫很灵敏的鼻子，一
口都不吃。这个坏家伙以前也不肯吃药，只有药片融在水里，用针管（去头）喂它。
关于这个CVS 的抗菌药膏，买了后发现是“不可以用于眼睛”，马上推掉了。
现在有用最普通的人用的红霉素眼药膏，早晚各一次，3天左右间好，准备再继续3－4
天。猫猫眼睛好些后，有力气淘气
了。 |
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c****i
发帖数: 27 | 14 全职海归就是强啊
这篇文章是这期Cell的唯一featured article，还配了一段五分钟的paper clip。
Cell, Vol 134, 279-290, 25 July 2008
Article
Superoxide Flashes in Single Mitochondria
Wang Wang,1,** Huaqiang Fang,4 Linda Groom,5 Aiwu Cheng,2 Wanrui Zhang,4 Jie
Liu,4 Xianhua Wang,4 Kaitao Li,4 Peidong Han,4 Ming Zheng,4 Jinhu Yin,3
Weidong Wang,3 Mark P. Mattson,2 Joseph P.Y. Kao,6 Edward G. Lakatta,1 Shey-
Shing Sheu,5 Kunfu Ouyang,7 Ju Chen,7 Robert T. Dirksen,5 and Heping Cheng4,
*
1 Laboratories of Cardiovascular Sciences
2 Neu |
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S*****n
发帖数: 6055 | 15 【 以下文字转载自 Connecticut 讨论区 】
发信人: Synthon (听，...听), 信区: Connecticut
标 题: Tsinghua University Alumni Reception for Secretary HU Hepin
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Oct 23 18:24:16 2009, 美东)
Dear Tsinghua Alumni and Friends,
It is our great honor to welcome the visit of Dr. HU Heping, Chief Secretary
of CPC Committee and Vice President of Tsinghua University.
Tsinghua Alumni at Yale University will host a reception session for all
alumni and friends of Tsinghua University tomorrow afternoon (Sat, Oct. 24). |
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P******n
发帖数: 1220 | 16 what's the building on the right? Heping Lou? |
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a*****a
发帖数: 1038 | 17 hoho.. Heping Lou is still not demolished.. too old .. |
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s******e
发帖数: 12 | 18 What I can remember about Heping Lou is there are swarms and swarms of
mosquitos, not very pleasant... |
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u******o
发帖数: 140 | 19 Heping He in University of Kansas, maths department. |
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k*****a
发帖数: 1518 | 20 http://wangkanghong.51.net/khjy1.htm
“九.一八”事变后，日本霸占了沈阳航空工厂和机场后，于1932年
9月在奉天商地（和平区五经街3号）建立满洲航空株式会社。1938
年6月迁址于北陵后改称满洲飞行机制造株式会社。1946年国民党政
府接管空军第三十八厂。1948年11月人民政府接管，先后更名为国
营一一二厂、国营松陵机械公司、沈阳飞机制造公司等。
（摄于1934年11月）
The Manchu Airlines After the september 18 Incident, the
Japanese captured the Shenyang Aeronautic Plant and airport
In September 1932, they established the Manchu Airlines at the
Fengtian Port (no.3 Wujing Street Heping District).After it
was moved to Beiling in June 1938,it was called the |
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s******y
发帖数: 28562 | 21 This is a convenient recipe: 0.5% Triton X-100, 20~50mM Hepes-KOH, pH 7.8,
50mM KCl, 2mM MgCl2, 5mM EGTA,1mM EDTA, 100mM Sucrose, Plus cocktail of
protease inhibitors.
Triton X-100 is for lysis of cell membrane, Sucrose is for the stablity of
most proteins, protease inhibitors is again proteolysis.
However, this may differe depend on your purpose. You should check related
reference to get a recipe that works for your experiment
By the way, in some recipe, I notice they don't use Triton, don't un |
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a***o
发帖数: 129 | 22 It's not availbale in the web, but in the book "current protocols in molecular
biology". Most molecular biology labs should have it. I am sure you can find
one in either your lab or a nearby one. They are 3 huge red binders. A concise
version "short protocols in molecular biology" also exist.
Basically the method is the same as HEPES one. If you cannot find it I can
find you a recipe when I go back to lab.
As for toxicity, Roche's fugene 6 is famous for lower toxicity than other
liposomal method |
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a*****i
发帖数: 361 | 24 我看的有的用tRNA，有的用poly(dI:dC)? 究竟那个好些？
还有binding buffer中有的用HEPES,有的用Tris-HCl. 有什么区别？ |
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a***e
发帖数: 1010 | 25 for DNA, poly(dI::dC) is better.
for RNA, tRNA maybe better.
no difference between HEPES and Tris-HCl buffer. |
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l*******k
发帖数: 361 | 26 有些时候你需要自己去试，我做DNA-protein interaction的时候，三种buffer Hepes/
Tris/Phos都用过，也试过不一样的PH, 不一样的东西，不同的buffer效果不一样的 |
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P******r
发帖数: 11 | 27 有人很懂ATPs (aquae two phases system)的请帮忙.
Whether it will work for removal of all soluble proteins (bulk proteins)
from protein mixture in HEPES solution?
Condition: PEG1450 (low molecule weight); High pH up to 12; 1M (NH4)2SO4; 0.
5M NaCl. |
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g***s
发帖数: 60 | 28 我知道一般的tris, hepes什么的，buffer pH,
Detergent可以溶解细胞膜，看大家常用1%NP-40或者1%Triton x-100，
这个1%是怎么确定的，经验？
还有各种盐，多数时候是NaCl，但是nuclear extract经常用KCl，这是为什么呢？
也常常加Mg，不过Mg不是protease需要的吗，会不会导致蛋白降解？更疑惑的是
还有同时加Mg和EDTA的，EDTA不是chelate二价离子吗，这样的话不是互相取消了吗。 |
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h*******g
发帖数: 91 | 29 一般抗体买来的时候都是在含有HEPES, BSA和sodium azid的buffer
今天不小心用di water稀释了后，再分装，然后放到-20保存
请问对以后western blot的试验结果有关系吗？
另外，以后实在要稀释后分装，应该用什么溶液?
感谢各位！ |
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m******5
发帖数: 1383 | 30 我怀疑两个蛋白的相互作用只在核成分里发生，细胞质成分会抑制其相互作用，于是计
划用核抽提物做co-ip
发上根据别人文章里方法设计的protocol，请有经验的同僚帮忙看看有没问题？
1, 10 mm 盘NIH 3T3 细胞， 用 500 ul 10mM hepes, 10mM NAcl冰上重悬溶胀
2，半小时后过针头，理论上说此时只有核完整，大多数细胞质都裂开
3，500G低速离心收核
4，等volumn高盐高甘油buffer吹吸
5，再加等总体积的低盐buffer降盐浓度至140mM， 降NP-40至0.5%
6，常规co-ip步骤
大家说这个protocol会有大问题么？这个相互作用难做，之前曾经有这个protocol做出
过很强的相互作用，但不说明protocol没问题 |
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r**o
发帖数: 212 | 31 细胞培养用的是Sigma的牛胰岛素（insulin solution from bovine pancreas）,但是
现在Sigma缺货，backoeder不知道什么时候才能到货。转用Sigma的合成胰岛素（
recombinant from Saccharomyces cerevisiae）,细胞生长状态变差，出现凋亡状态。
多次从冷冻管活化，生长不到一周又会变差。
求教：不同来源的胰岛素对细胞生长影响那么大么？
有无其他公司售卖的牛胰岛素？
或者用Sigma的牛胰岛素powder替代，唯一的考虑是powder必须用酸性溶液溶解（
dilute acetic or hydrochloric acid, pH 2-3），是否影响细胞生长？原来的牛胰岛
素溶液是现成的溶解在25mM HEPES,pH 8.2里面。
困扰两个月了，求教各位达人了。多谢多谢！ |
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M****m
发帖数: 2142 | 32 多谢，那还是重新配吧，就是调pH很麻烦，等了好久才调好 :-S
后面还真要做crosslinkng。。。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 33 不会全部都水解掉的，还是会有大部分留下来的。如果是不重要的场合就无所谓了。
重要的场合当然不行 |
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s*******e
发帖数: 1010 | 34 interesting question although it may not lead to Nature paper.
before u propose protein-ion interaction, I think u should make sure the
precipitation is ur protein and it is phosphate-dependent.
use HEPES as buffer and add series conc. of Pi to test dose-response. Only
difficulty is to quantify protein precipitation, but u could spin down it
and determine protein conc in supernatant. |
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C*******e
发帖数: 4348 | 35 我们实验室用Thermo Scitific的Glutathione Agarose纯化GST-tag蛋白
他们的手册上说用Tris buffer
想问问看有没有人用过别的buffer
比如HEPES，phosphate，Bicine之类的？
打电话去tech support已经下班了：（ |
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C*******e
发帖数: 4348 | 37 谢谢！
不过这里我还是不太想用PBS buffer
因为要跟在cation exchange chromatography后面做
所以最理想的是用HEPES之类 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 38 HEPES 25 mM
250-300 mM NaCl
pH 7.4
你看靠谱不？
我们不用glutathione洗脱
而是用GST tag的precision protease切
所以问题不大 |
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w*****3
发帖数: 1582 | 39 我做过人的
For preparation of protein extracts, renal tumor tissue was pulverized with
a mortar under liquid nitrogen and suspended on ice in lysis buffer (20 mM
Hepes, pH 7.7, 0.2 M NaCl, 1.5 mM MgCl2, 0.4 mM EDTA, 1% Triton X-100, 0.5
mM DTT, 100 µg/ml leupeptin, 100 µg/ml aprotinin, 10 mM
benzamidine, 2 mM phenylmethylsulphonyl fluoride, 20 mM -
glycerophosphate, and 0.1 mM sodium-orthovanadate).
然后加 sds-dtt buffer里 homogenize sample,煮沸 然后run,
跟细胞不同的是非常容易degradation. |
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C*******e
发帖数: 4348 | 40 pH值没有不同
buffer也没有不同，Tris-HCl或者HEPES都可 |
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m**********d
发帖数: 137 | 41 IHC及IF显示蛋白A在tumor cell的细胞核里高表达，蛋白A的canonical function是与
蛋白B bind并激活B。一些preliminary data提示蛋白A有新的功能，就是与蛋白C
bind而调控另一个重要的生物过程。
现在需要得到A与C直接作用的证据，下面这个用Dynal magnetic beads做CO-IP的
protocol：
10μl Dynal beads coated with protein A+10μl Dynal beads coated with
protein G each reaction, wash with ice cold PBS plus 5% BSA, three times.
Incubate with antibody against 蛋白A (20μl, approximately 4μg) in 500μl
PBS plus 5%BSA, overnight.
2^106 cells/10cm plate, treatment (which induces A and C interaction while
... 阅读全帖 |
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s********n
发帖数: 2939 | 42 一堆的buffer可以试，Tris, HEPES, etc. |
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S******e
发帖数: 36 | 43 我曾经试过用不同的方法裂解细胞，比方说用低渗Buffer(10 mM HEPES (pH 7.9), 10
mM KCl, 1.5 mM MgCl2）溶胀细胞后，dounce 10次或者加1%NP40，每次我都用普通的
相差显微镜检查过细胞，溶胀后细胞膜没破，但Dounce或者加入NP40后，90%以上细胞
膜破掉，细胞核似乎还是完整的。可是当做WB时候，很多只在核内的蛋白（比方说转录
因子）都可以明显的在cyto的fraction里边检测到，我估计还是有渗漏。你能检测到H3
可能也是这个原因？ |
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S******e
发帖数: 36 | 44 我曾经试过用不同的方法裂解细胞，比方说用低渗Buffer(10 mM HEPES (pH 7.9), 10
mM KCl, 1.5 mM MgCl2）溶胀细胞后，dounce 10次或者加1%NP40，每次我都用普通的
相差显微镜检查过细胞，溶胀后细胞膜没破，但Dounce或者加入NP40后，90%以上细胞
膜破掉，细胞核似乎还是完整的。可是当做WB时候，很多只在核内的蛋白（比方说转录
因子）都可以明显的在cyto的fraction里边检测到，我估计还是有渗漏。你能检测到H3
可能也是这个原因？ |
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c****g
发帖数: 93 | 45 我们用这个lysis buff：
10 mM HEPES/KOH, pH7.6
1.5mM MgCl 2
10 mM KCl
5 mM EDTA
5 mM EGTA
250 mM Sucrose
Adjust pH 7.6 with 10N KOH
然后过过15次#7 needle，低速离心后上清基本是cytosol，无nuclear protein。
10
H3 |
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j****x
发帖数: 1704 | 46 关于这个问题，刚读研无聊的时候做过不是很严谨的比较，“结论”是和缺氧无关
当时的培养瓶盖还是老式的，不带filter需要自己拧开一个角度的那种，同时养的三种
细胞293/Huh7/Hela，用的invitrogen的普通DMEM培养基，不含hepes。有一次传细胞的
时候没留神盖子全部拧紧，结果第二天发现所有培养基全部变碱，293/Huh7贴壁出现严
重问题，漂浮大量“死细胞”，活细胞形态也非常差。但是Hela没有任何问题，一切正
常。拧开瓶盖之后不到24小时，多数“死细胞”重新贴壁，细胞形态恢复正常，培养基
颜色也回到正常pH范围。这时候我又把瓶盖拧紧，继续培养差不多48小时，所有细胞生
长一切如常，这时候由于细胞已经生长一段时间自然产酸，即便拧紧瓶盖，培养基也不
会变碱的过分。
我的“结论”是，某些细胞（293/Huh7）对培养基pH比较敏感，尤其是在悬浮后等待贴
壁的时候，而有些糙的比如Hela就不敏感，而缺不缺氧，大部分细胞不在乎，尤其是在
短时间内 |
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E**********1
发帖数: 73 | 47 Hi all:
Recently I planning to do siRNA, but I have a detailed question.
I got siRNA from Dharmacon, and it came as dried pellet, which means I need
to dissolve it in some solutions. The instruction suggests resuspending the
dried pellet in RNase-free 1X siRNA buffer (60mM KCl, 6mM HEPES-KOH, pH7.5,
0.2mM MgCl2), or in RNase-free water for short-term storage.
It will take time to place another order only for those buffers. So I am
wondering how you guys do that. Can we make the buffer by ourselv... 阅读全帖 |
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