A******y
发帖数: 2041 | 1 G1 always looks like that for cancer cell culture in a flask. If you show a
different one, I will simply told you that your control is junk. |
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h*******o
发帖数: 4884 | 2 不会， adult NSC培养的前一个礼拜neurosphere 很少的
你看到的大部分片状的东西不是细胞，应该是debris， 等到能看到neurophere的时候
要通过离心来除掉debris
我们都是养在flask里面，长出大量neurosphere以后在dissociate，然后进行下一步试
验的， 那种直接养96孔板， 离心去debris 貌似比较麻烦 |
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J******9
发帖数: 736 | 3 谢谢赐教~！再追问几个技术问题：
1，如何通过离心去掉debris ？多少rpm？如果离心的话，神经球和debris不是都沉底
了吗？
2，你们原代养在flask里面的神经球，一般多久可以长出大量的神经球？ 如何提取神
经球？也就是只含有神经球，没有那些细胞杂质和碎片。如果能将神经球与其他死细胞
、组织碎片杂质分离出来，那么接下来的实验，就容易多了。
谢谢指点·！ |
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T****u
发帖数: 424 | 4 1. T25 or T75 Flask, medium，Fedex international priority寄回国或随身带。
2. 如果实验室要整体搬家，细胞很多的话。可以用world carrier，可以寄干冰 or 液
氮罐，他们会中途帮你加干冰。较贵。
正规报关检疫程序一般要走3-6个月。 |
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c*****y
发帖数: 35 | 5 自己或托朋友带细胞回国，近两年共6次，都是SFO-PEK， 贴壁细胞于50ml flask灌满
media3次，冻存细胞于干冰foam box中托运行李箱3次，均顺利抵达，没有受到任何海
关检查。至少8今年8月还没问题。其他机场没试过，不敢保证，但认为值得尝试。 |
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n***3
发帖数: 663 | 6 有多少细胞飘着？一般情况下是flask都长满了，没有多余的地方贴壁的情况才会有少
量细胞飘着。
做conditioned medium的时候飘着的细胞应该是BM cells。 我一般在配conditioned
medium以后最后一步过滤一下，去掉floating L929 cell. |
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n***3
发帖数: 663 | 7 If you start with just a little L929 cells, when they grow to 90% confluence
, remove the culture medium (throw away) and split the cells at 1:2 ratio
into new flask. Then, these cells will grow to 90% confluence every one day.
This time you can collect the culture medium as your "conditioned medium"
for BM cells.
Culturing L929 cells for "7" days without changing medium is not a good idea
. No matter how many cells you start with, at least change the medium every
3 days. |
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A******y
发帖数: 2041 | 8 Wow, I'm probably talking to someone never did cell culture! What's 1% of a
million cells in a flask. That's 10000. 10000 colonies for you to pick and
a
single colony will take about 15 to 30 minutes to process by hand. Silly
boy is really silly. If this is the product of Chinese education, I feel
very sorry for my kind. |
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m**********3
发帖数: 706 | 9 I dont use trypsin for 293. Just shake your flasks and they will be flushed
out. Then you can spin down and split them. This will reduce the damage. |
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m**********3
发帖数: 706 | 10 I dont use trypsin for 293. Just shake your flasks and they will be flushed
out. Then you can spin down and split them. This will reduce the damage. |
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m*********D
发帖数: 1727 | 11 纯化现在简单很多了，这么多flag-tag...自己作容易，小心点，生物活性还可能高一
些。commercially available往往会每次纯化的生活活性不一样呢。
我们大多是baculovirus是让人家用发酵罐来作的。干冰寄过来自己纯化。bacteria表
达，往往自己就上几个4 litter的flask. |
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b**********8
发帖数: 349 | 12 这个问题快困扰我一年了，今天特意翻墙过来求助各位大大，
事情是这样的，之前在博士的实验室一直用pLKO.1-puro shRNA干扰基因表达，用的
invitrogen的包装质粒（PLP1，PLP2和VSVG），在10cm的dish里面用HEK293FT转染，转
染用的是磷酸钙沉淀法，病毒上清用SBI的 precipitation solution（5x）浓缩，一直
都work well，偶尔偷懒奢侈一把用lipo2000转染，效率也是没得说。自去年博士毕业
回国后来到现在这个小实验室，当时雄心勃勃自信满满，打算自己包装慢病毒，用的还
是跟之前一样的质粒，细胞，只不过换到了T75的flask里面，用lipo2000转染（磷酸钙
转染法配buffer太烦，实验室pH计不准，老板对经费管的也很松，哈哈），之后用同样
的方法收病毒上清，浓缩。感染细胞后加puromycin筛选，染毒的细胞都能活下来，而
对照细胞48小时候就死光。可是收集细胞蛋白做WB却一点都看不到knockdown，前前后
后重复好几回了，都是一样的结果，现在无奈把这一块交给公司做了，但是自己还是不
死心，今天写出来问问大家... 阅读全帖 |
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f******l
发帖数: 101 | 13 看了一下fisher catalog，要六七千。
便宜的如amscope，才一两千。不过不知会不会老坏。
大家有靠谱的推荐吗？谢谢啦。 |
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w********w
发帖数: 469 | 14 好像vent cap 都是0.2um的 virus 会在0.1um以下， 那virus会出来吗？谢谢 |
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A******y
发帖数: 2041 | 16 You cannot filter out virus. However, under normal laboratory condition and
the common virus used in the lab, you should be fine. Unless you lab is
against regulation using biosafty 3 or higher virus in a biosafty 2
laboratory. |
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s******s
发帖数: 13035 | 17 我一般都用针筒，然后hood里放一个装大口瓶子，所有接触
virus的东西都扔里面，泡在bleach里面。
实验室有些老美直接往垃圾袋扔，虽然说现在的lenti不扩增，
最多感染表皮；不过做ips的都是myc这类东西，就算只感染表皮
也不是啥好事，一般说服教育又忘了的，只能躲着 |
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s******y
发帖数: 28562 | 19 没有这么可怕啦。
病毒不会爬，除非你在另外一头施加压力让溶液流出来，否则病毒不会自己钻过filter
的。 |
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c*z
发帖数: 157 | 20 virus不会爬，更不会飞，不洒出来不碰到就不会有问题
如果lenti viral的话bl2的lab就可以做，这个没问题的，和serum contaminated的东
西一样autoclave,
如果做purified virus，那就要bsl3的lab了。。。其实bsl3就是拿许可比较麻烦，操
作和bsl2没有差很多
filter |
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w********w
发帖数: 469 | 21 好像是airborne or droplet transmission
filter |
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s******y
发帖数: 28562 | 24 是用来养细胞的。
本身经过伽马射线消毒。
可以叠成一摞节省空间，盖子是用来盖着不会被污染。 |
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p****9
发帖数: 240 | 26 培养瓶吗，最大的优点就是1）蒸发少，2）污染概率低；表面积不是优势，比不上dish
。 |
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C*********h
发帖数: 83 | 27 传到p25 or p75 flask,贴壁后灌满medium.
然后parafilm封口
fedex overnight |
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c********e
发帖数: 598 | 28 1)location: Connecticut, not Boston.
2)Salary (80k-100k), temporary position via Yoh at this moment.
3)Need strong JS skills! Python packages and framework like flask, django
etc, know R at biology level.
4) If you are really good especially in advanced statistics or something
else (data science), we will convert to staff senior scientist.
For those emailed me, please be patient and i will try my best to reply. |
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e*******o
发帖数: 4654 | 29 80k-100k 东部算可以了。
不过期望别太高， JS 看你要多强，很强的话，这个是不行的。
另外，任何一个本版上的人，把我帖子中的书看一遍，代码练练。都达的到lz的要求。
http://www.mitbbs.com/clubarticle_t2/biojailbreak/123365.html
lz 你看看是不是？
# Books
### Programming language
### Python
__Learning Python__
### Javascript
__Javascript the missing manual__
## linux command line
cd,ls,mv,rm
this is enough to begin with and then learn by using.
if you want more,
__Learning the Bash Shell__ is a good book
## Web specific
### HTML, CSS
easy enough to learn very quickly for baic use.... 阅读全帖 |
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s******o
发帖数: 5 | 31 原来老中跟老印差别这么大。。。。老中给100k，老印给140k(还是不知道好不好用的)
，lol
lz之前来这里招人，给的薪水和要求：
2)Salary (80k-100k), temporary position via Yoh at this moment.
3)Need strong JS skills! Python packages and framework like flask, django
etc, know R at biology level.
4) If you are really good especially in advanced statistics or something
else (data science), we will convert to staff senior scientist.
http://www.mitbbs.com/article/Biology/31928847_3.html |
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m*********D
发帖数: 1727 | 33 严格地说，我不知道“不整合又有功能的几率”。你的ES可能integration的概率高一
些，我以前作过knockout老鼠的stem cell。平常用cnacer cell line作stable,反正拿
到的效率很低。除了transfection的效率低，integration的概率低可能也是原因。
他那个300X的library coverage,不知道是不是考虑到这个因素，我的理解是每个guide
RNA有300个机会（转进细胞），加上一个gene有三个guide sequences,就是每个基因
平均有900的机会，这样也许能compensate integration的概率低？我的瞎理解。
100M的细胞，大约是10个T75 flask,我应该能对付。：）。 |
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h******y
发帖数: 351 | 34 How To Make Your Own ECL
ECL can be an expensive reagent in a lab, and what with it being involved in
the final stage of a western blot, it’s something you don’t want to have
to worry about too much. During my PhD, I was struggling with my western
blots for ages – it seemed I was doing everything right, I just wasn’t
getting any signal in the dark room. At the time I was using a pre-made ECL,
and a friend that I shared lab space with suggested I try her home-made
brew. I was sceptical at first, ... 阅读全帖 |
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j****n
发帖数: 3370 | 39 我们实验室之前的美女都是autoclave
说是比bleach好 hehe |
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b******y
发帖数: 627 | 42 autoclave, pour waste to the sink, rinse a bit, autoclave again for next
round of use.
e. coli is very robust. why use bleach?? |
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m*********D
发帖数: 1727 | 44 （CRISPR的背景资料请参阅Feng Zhang的“Genome engineering using the CRISPR-
Cas9 system”，Nature Protocols 8, 2281–2308 (2013)）
背景
我们是作一个与激素相关的肿瘤的。这个肿瘤的治疗方法已经相当完善，就是让身体里
不能生产激素或用一个小分子化合物抢占激素受体上激素的结合部位。但多年治疗后，
会有相当比例的病人产生抗药性。这个抗药性机理相当复杂。我们实验室一直致力于筛
选和现有药物不同的机理的小分子化合物，包括受体和DNA的结合或其他与受体相关的
pathway的inhibitors。前几年成功地筛选出了几个不同机理的化合物，个别在细胞水
平达到了nM的级别，动物测试也在10 mg/kg的水平。
最近在这个领域对抗药性肿瘤的研究发现，部分病人的抗药性是因为受体激素结合部位
发生了突变。一个或几个氨基酸的突变就能导致肿瘤细胞的生长不能被现有药物抑制。
所以，我们很想知道我们筛选出来的化合物对这些突变受体是不是也起作用。理论上来
说，我们的化合物不和激素竞争，突变不会影响我们化合物的效果。但只... 阅读全帖 |
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m****a
发帖数: 270 | 45 文章说的是细胞培养液。曾经常温把细胞装在装满培养基的FLASK里面给人快递过，两
天没啥问题。
问题在于FACS之前细胞一般重悬在PBS里面，这个时候可能4度更好。 |
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f***8
发帖数: 571 | 46 以前去公司参观的时候，那人说他是搞biofuel的，去实验室看了看好像跟搞合成的没
啥两样（当然都很大，flask至少1+ Liter），但是跟biology的实验室就很不一样了 |
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S*****n
发帖数: 6055 | 47 你要是来我实验室看看。。。连flask都没有。。。
不过感觉确实需要有机化学的人做机理研究
我知道几个公司的biofuel team里头都有有机化学PhD做机理的 |
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w*s
发帖数: 50 | 48 有，这种及其特殊的反应器叫做烧瓶(round bottom flask),满足你的一切需求，就是
没刻度。但没关系，你可以再拿一个一样的烧瓶，与反应器比较，往里加水到副产物沉
淀的量，所加的水量即为沉淀的量。 |
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c****o
发帖数: 1280 | 49 你说的方法值得一试，还有不要有太多扰动。最好flask放在hood里不要动它。还有些
其他的办法可以试试，比如说heating cooling, solvent antisolvent. |
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l**********c
发帖数: 434 | 50 有可能是主要贡献吗？
A challenge in photodynamic therapy (PDT) cancer treatment is developing
novel methods of singlet oxygen generation using near infrared light.
Titanium
dioxide is a photocatalyst that generates reactive oxygen species (ROS), but
it requires ultraviolet light. Lead sulfide (PbS) quantum dots have a
narrow band
gap, allowing them to tune the absorbed wavelengths of the nanotubes to the
near infrared. To ensure singlet oxygen generation, the photoreactive NO
donor
S-nitroso-cysteine was ... 阅读全帖 |
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