t*****z
发帖数: 1598 | 1 喜欢Fermentas的酶。RE都换成FastDigest格式的，全部缓冲液通用，和其他修饰酶也
可以通用，做什么都不用换缓冲液，而且连loading dye也给你加好了，非常适合我这
种懒人。T4连接酶，号称室温五分钟（我没试过这么短的）。
克隆载体方面Fermentas有个pJET，便宜又好用，传统的平端T4连接，但是效率很高，
我每次只连15-30分钟，就长出很多克隆。阳性率100%，假阳性率0%，我有时甚至都可
以省下筛选这一步，直接养菌抽质粒了。美中不足的是载体上的常见的酶切位点少了点
。与之相比的QIAGEN的pDrive，也挺好用，但是阳性率不是那么高，。每次还是不得不
挑那么四五个菌落来做PCR鉴定。Invitrogen的TOPO TA载体们，我们实验室和隔壁实验
室用起来都很不顺利，我现在弃之不用。
Invitrogen的Gateway载体们，虽然贵，没办法，只能买他们的，感觉Gateway这么方便
的东西还是只此一家。效率不高，有时会出问题，但是勉强够用了。我曾自己试图构建
类似于pDONR的载体，失败，原因复杂，一言难尽。不喜欢NTI，宁可用最土的BioEdit |
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c*********r
发帖数: 1312 | 2 Qiagen的很好用，一直在用。最近看到Fermentas的新kit，在降价做活动，几乎是
Qiagen的一半价格。准备用完了Qiagen的买个fermentas的试一试。 |
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s********n
发帖数: 2939 | 3 我觉得Fermentas的RE挺好用的，尤其是FastDigest系列的，只用五分钟就可以，还有
就是几乎所有的酶（RE & phoshatase）都用一种Universal Buffer，不用换，非常方
便。不像NEB的有1,2,3,4，每一次用都得查一查用什么buffer，还要考虑BSA，比较麻
烦。但是NEB的RE比较全，也就是这个优点比较明显了。 |
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c*****a
发帖数: 179 | 4 我喜欢takara，特别是旗下的clontech。后者真好啊，就是真贵啊
Fermentas和promega都属于那种还行，但是不会感慨“真好，真漂亮啊”那种 |
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s******y
发帖数: 28562 | 6 Thanks! I will give them a try later.
Are they using the oligo-dT system or the 5'-end RNA ligase?
Is it possible to do a 5-RACE with Fermentas' kit? |
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m*****y
发帖数: 857 | 7 MassRuler by Fermentas
total |
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n***e
发帖数: 180 | 8 回收试一下fermentas的glass beads based DNA purification，大概回收率在8成左右
，qiagen的应该在5成以下 |
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c******y
发帖数: 148 | 9
1, 1-2hrs
2, fermentas prestained PAGE ruler google
3, Running, big gel constant 70V overnight, transferring as Tris glycine gel
4, PVDF or NC |
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i*********0
发帖数: 915 | 10 used before. no difference between the invitrogen one and the fermentas,
sigma ones. |
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m**z
发帖数: 787 | 11 我们实验室的DNA相关的都换成fermentas的了，work得很好啊，据说便宜不少，里面的
东西其实是一样的，连buffer都可以通用。。。RNA的kit不知道怎么样 |
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b*********l
发帖数: 490 | 12 其实就是提取斑马鱼组织totalRNA而已，没有花头。我是觉得qiagen应该有这种kit,不
知道怎么没找到，哈哈，真土。那我要不就试试fermenta的，以前也用过他们的酶，效
果不错。谢谢大家啊，节日快乐。 |
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s********n
发帖数: 2939 | 14 5 kb不算长吧，如果只是鉴定用的话用一般的Taq应该没问题的，Fermentas的DreamTaq
便宜量又足，manual说可以扩增genome 6kb片段和viral的20 kb片段。我用来检测过3
kb片段。 |
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k*******s
发帖数: 214 | 15 需要从gDNA上PCR尽可能长的片段，20Kb以上最好。请高人推荐几个公司的酶试试。另
外2个问题：
1. PCR最长能得到多长片段？我看到Fermentas的long 片段的，可以得到47kb,可信么？
2. 长片段PCR的是否有什么特别要求，比如引物设计。
谢谢。 |
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m**z
发帖数: 787 | 17 现在实验室都用fermentas的，去说他家用的东西和qiagen是一样的，protocol都基本
一样，里面的buffer都可以和qiagen的通用。。。他家kit的效果也挺好，用下来没觉
得有什么问题，据说价格便宜不少 |
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e**e
发帖数: 614 | 18 Fermentas有， K0513 Silica Bead DNA Gel Extraction Kit, 效果挺好 |
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j****x
发帖数: 1704 | 19 很久很久没做胶回收了，但是Qiagen的Qiaquick印象中还是不错的，得率应该在50%的
样子。其实胶回收得率的关键在跑胶而不在kit，各家柱纯化kit的效率基本都在90%以
上，但是很多时候一个样品从上胶到切下来就已经损失了50%甚至更多了。
不过QIAquick有个缺点，就是溶胶buffer的用量是3倍gel slice的体积，稍微大一些的
gel slice就得分好几次离心，这点很不爽，所以后来就换成Fermentas家的GeneJET，1
倍gel slice的体积的溶胶buffer，效率也很好，还便宜。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 20 Fermentas家的GeneJET，记下啦，谢谢推荐！
不过你说的从胶上切下来就损失50%是什么意思呢？
，1 |
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x********u
发帖数: 430 | 21 Works very well (Fermentas FastDigestion) and produce high affinity sticky
ends (GGCC). |
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M****7
发帖数: 214 | 22 请问板上有哪位用过Thermo 的Pageblue Commassie blue staining solution?
这个东东貌似以前是fermentas的，后来被thermo收购了吧 |
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l*******c
发帖数: 478 | 23 哈哈哈，SHAKURAS你太幽默了！
谢谢楼上大家的鼎力相助哈，太好了，看来我有望解开当年的谜了。
我顺便把酶切的反应量列出来，大家看看。都是FERMENTAS的。
我想问：双酶切对两种酶量的比例有没讲究？
ddH2O 30UL
DNA 7UL
10XTANGO 10UL
BAMH I 2UL
ECOR I 1UL |
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a*****a
发帖数: 415 | 24 fermentas的酶没用过
neb的用 neb double digest finder查
ecori和bamhi如果都是HFversion的可以用buffer 4做double digest
bamhi如果不是hf version最好在buffer3切，不然star activity强 |
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s********n
发帖数: 2939 | 25 Go to buy, it is really cheap! Fermentas. |
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i*******n
发帖数: 48 | 26 收细胞的时候cold block很好用，但进口的很贵
我们是找公司定做的，一个几百块。
Ultra Pfu,rTaq,Hotstart Pfu可以找到给大公司做OEM的小公司
我都是一次买几百毫升，可以用很久.基本上cloning,mutagensis都解决了。
当然了，如果你自己做纯化更便宜。
内切酶可以买Fermentas的，3000RMB买一套酶(单买的话要好几万吧)
FBS你可以找公司一次买一批，FBS每年都涨价。
Gool luck. |
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h**********r
发帖数: 671 | 27 有人用过 Dharmacon FASTDIGEST的内切酶吗？刚在fisher看到了，贼便宜。不知道这
个和fermentas的fastdigest的内切酶兼容不？用过的人说说效果。
fisher技术部门下班了，打电话没法回答。
多谢！ |
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n**********u
发帖数: 77 | 28 ex taq 比哪些好？ 可以说一下吗？ 我订了Fermentas 的dream taq，有人用过吗？
I |
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n**********u
发帖数: 77 | 29 我最近用promega的Gotaq酶做pcr，然后再TA克隆。 情况是这样的：我循环是40,后面
有10min 72度extension.但是就是连接不上，pcr product跑胶后的条带是很亮的。 我
怀疑是我的TA kit的问题，但是也不是，因为我把我的pcr products 中浓度较弱的几
个当作template再来一次short-pcr后（15cycles,然后10min 72度extension）得到的
产物回收再做TA克隆，得到满板。这说明我的TA克隆是正确的，就是pcr的问题。 我怀
疑是开始的循环数太多了，就降到35个循环，但是还是不行。 后来我又怀疑是我的酶
和体系出问题了，pcr的产物可能没有加上A尾，我加大酶量和dntp的量。 但是还是不
行。我后来又做了加A尾的实验，换了fermentas一般taq酶，也还是不行。大家说可能
是什么原因。
我的pcr体系：
20ul体系
H2O 9
5*GoTaq color buffer 4
dNTP（2mM） 2
mgcl2（25mM） 1.6
BSA（100mg/ml） 0.15
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j****x
发帖数: 1704 | 30 没有人推荐Thermo Fisher（原Fermentas）的GeneJet吗？真正价格便宜量又足，效果
比Qiagen只强不差，操作也便捷一些。 |
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j****x
发帖数: 1704 | 31 没有人推荐Thermo Fisher（原Fermentas）的GeneJet吗？真正价格便宜量又足，效果
比Qiagen只强不差，操作也便捷一些。 |
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n*****k
发帖数: 69 | 32 我用这个kit提plasmid DNA，实际浓度比nano drop测出来的少很多。比如：
nano drop测的是1ug/ul，但是跑DNA胶只有约0.3ug/ul。
但是同公司的mini就没有这个问题。Qiagen的两种kit也没有问题。
不知道有没有人遇到类似情况？ |
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m*****z
发帖数: 1451 | 33 听起来像有RNA没除干净，如果你测得没有问题的话 |
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j****t
发帖数: 1663 | 34 恩，293是长得比较快。下次铺细胞是计一下数，确定你铺的是70-80%confluence
另外，还有你也可以试试其他的transfection reagents 来提高转染效率，例如CaCl2
， PEI (Polyethylenimine），Turbofect from Thermo-Fermentas |
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