j***i
发帖数: 39 | 1 做一个EKR1/2底物磷酸化的实验，用ERK1/2抑制剂发现磷酸化被block掉.
但是32-ATP体外磷酸化做了两次，都没信号。
磷酸化实验没问题，因为positive control可以被phos-ERK2磷酸化。
有没有可能ERK不是上游直接Kinase?
不知道那位有好的idea? |
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h**********y
发帖数: 18 | 2 我做过一个实验，不是MAPK，用的是MAP2K，
发现在in vitro kinase的条件下，MAP2K自己就可以autophosphorylation，我猜想
MAPK应该也会是类似的情况，毕竟体外的实验总是有一些artifact。另外，看早期的
MAPK的paper，他们的in vitro kinase assay是不需要加入MAP2K的。当然加入MAP2K之
后，对MAPK底物的磷酸化会强很多。
另外，你在你的kinase里面有没有加入DTT？我们发现某些kinase因为某些特定位置的
aa，对DTT是敏感的。而ERK在相应的位置恰好存在一个这样的aa |
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R****n
发帖数: 708 | 3 My tissue sample was homogenizd by micropestle in RIPA buffer+protease
inhibitors. The serial dilution results confirmed what you said 100ug/well,
cause my 1mg/well input showed strong signal from ERK and pERK both. I
boild my sample for 5 mins to denature proteins, not sure about your protein
. I am having some trouble in Standard curve now,but I will find out
tomorrow. |
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s*****g
发帖数: 7857 | 4 "细胞还是挂掉了"是在给药的24小时/48小时?我还真没有看过这么早的ERK/AKT/ERK.但
我在另一个药物里也见到ERK磷酸化的现象.通常我的药是在48小时时要了癌细胞的命的.
一般你用AKT 或 PI3K 或 ERK inhibitors 是那几种?哪些厂家的好?谢谢!
翘首以待您的大做文章横空出世!^-^ |
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A*X
发帖数: 908 | 5 GG! SONY~ PS3系列密钥公布~！1
fail0verflow、Mathieulh、geohot众神给的贺礼，毕竟有时差。 有了这些，我们什么
都能签。
@fail0verflow said:
Private Pastie <-- sha1 hashes for some keys
Sony seem to have just randomly sprinkled crypto on the PS3 as magical pixie
dust. Wackier crypto usage MUST be more secure, right? Right?
Code:
a3d8fbcf120177844c848c72afe8bf7e5fa29ab4 iso-ctype-315
287e056ab77c7a10ec73108e63f12b811ff0f888 iso-iv-315
161e5c4ca0064bddf445c19d89f703384e504f41 iso-key-315
9739847f294d869b4c73fc8115be3f60cf660c4c iso-... 阅读全帖 |
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a********e
发帖数: 3771 | 6 最近一次做western，用NEPER kit提取胞浆里的ERK和p38蛋白。因为用划伤组织做刺激
，脱落不少细胞，我就把medium离心得到这些脱落的细胞。同时在培养皿里加冰PBS，
在冰PBS里刮下剩余的细胞放进脱落的细胞里再次离心。然后用kit里CER lysis buffer
裂解（已加入inhibitor cocktail）。
裂解的时候我vortex两次，每次15sec。NEPER protocol要求vortext一次，15sec即可。
结果照片洗出来什么都没有，连EGF刺激的positive control都没出来。
以前只用过一次NEPER，erk出来band，而且结果可信。不同点在于没有收集脱落的细胞。另外，这次实验煮沸变性的时间长了，用了15min。
所以我考虑是不是多次离心、vortex是蛋白降解，也可能是收集脱落细胞的时候medium
和细胞都没有冷却到ice cold，磷酸酶还在起作用。煮沸时间长我不确定会不会对实验有影响。
另外，p38一直没做出来过。用超声裂解细胞也好，用NEPER vortex裂解也好都没出过
band。
请高手指点，同行探讨。谢谢。 |
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o**d
发帖数: 3080 | 7 1， 表达E，L ，E＋L，看看有E的情况下L是否更稳定（首先假设E和L在293cell里是能
结合的。而且你需要很多control，来证明这个由于蛋白的稳定性造成的）。也可以用E
的KO 或KD细胞来看L是否更不稳定。
2，突变你认为的L上的磷酸化位点，重复实验1，
3，先查一下有没有人报道L被AKT 或ERK磷酸化。然后看看AKT／ERK KO （KD） cell里
L的磷酸化是否降低（如果有磷酸化抗体的话）。还可以看L是否更稳定。
L
白L |
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i*****i
发帖数: 154 | 8 正在研究AKT-ERK-GSK3beta-proteasome pathway，
现在手里有AKT和ERK的inhibitor.我想知道有没有GSK3beta和proteasome的促进剂。也
就是能够稳定gsk3beta，促进proteasome活性的小分子。 |
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l***y
发帖数: 4671 | 9 一定一定。
Tumor drug responses 中 ERK1/2 啥的被激活还是挺常见的。比如说手头这个数据，
给药后 5 分钟 ERK pT202 就达到峰值，AKT pT308 也出现峰值，而 AKT pS473 缓步
上升，要在 60 分钟时才达到峰值，同时 AKT pT308 出现第二次也是更高的峰值。而
细胞还是挂掉了。
对了，哪位知道除了 MEK 以外，还有谁能直接磷酸化 ERK1/2 T202/Y204 啊？我们的
数据表明 MEK1 pS217 没有动静，ERK 却发飙了。准备用 U0126 再 validate 一次。 |
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S**********e
发帖数: 1789 | 10 Tony Hunter的博后，独立以后表现很不错。
Yang W, Xia Y, Hawke D, Li X, Liang J, Aldape K, Hunter T, Yung WK, and Lu Z
. PKM2 phosphorylates histone H3 and promotes gene transcription and
tumorigenesis. Cell 150(4):685-696,
Ji H, Ding Z, Hawake D, Jiang B, Mills G, Lu Z. AKT-dependent
Phosphorylation of Niban Regulates Nucleophosmin- and MDM2-Mediated p53
Stability and Cell Apoptosis. EMBO Reports 13(6):554-60,
Yang W, Xia X, Zheng Y, Liang J, Huang W, Gao X, Aldape K, Lu Z. Nuclear
PKM2 regulates beta-catenin ... 阅读全帖 |
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m******5
发帖数: 1383 | 11 Thank you !!!! for the ERK inhibitor, I supposed you were talking about 2i
medium? I thought I would need more than ERK, maybe also p38 inhibitor?
Could you coomment more on which part is the most tricky part?
Thank you very very much!
me
was
http://dev.biologists.org/content/137/20/3351.full.pdf
it |
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a********e
发帖数: 3771 | 12 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: andyzzdlee (麦地之一看二慢三通过), 信区: Biology
标 题: western提蛋白的困惑：多次离心vortex会不会降解蛋白
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jan 20 23:38:17 2010, 美东)
最近一次做western，用NEPER kit提取胞浆里的ERK和p38蛋白。因为用划伤组织做刺激
，脱落不少细胞，我就把medium离心得到这些脱落的细胞。同时在培养皿里加冰PBS，
在冰PBS里刮下剩余的细胞放进脱落的细胞里再次离心。然后用kit里CER lysis buffer
裂解（已加入inhibitor cocktail）。
裂解的时候我vortex两次，每次15sec。NEPER protocol要求vortext一次，15sec即可。
结果照片洗出来什么都没有，连EGF刺激的positive control都没出来。
以前只用过一次NEPER，erk出来band，而且结果可信。不同点在于没有收集脱落的细胞。
所以我考虑是不是多次离心、vortex是蛋白降解，也可能是收集脱落细 |
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发帖数: 1 | 13 ◇◇新语丝(www.xys.org)(newxys.com)(xys10.dxiong.com)◇◇
再说饶毅、管坤良实验室联合发表的论文数据造假
·方舟子·
昨天我发出《关于饶毅、管坤良实验室联合发表的论文数据造假的分析》后，
饶毅转给我他当天登在其微信公众号的文章《饶毅、管坤良就论文图片的分析》
（以下简称饶文），作为对“有人匿名散发指饶毅参与署名的9篇论文中图片有
造假问题”的回应。由于第6、7、8、9等四篇文章“不存在需要解释的地方”，
饶文称只需回应第1、2、3、4、5等五篇文章——对此我也同意，我在前文也只
分析了这五篇论文。
但是实际上饶文只回应了“饶毅需要负质量和监管责任的图片”，指的是这
两篇论文中的图片：
论文1：
J Neurosci. 2007 Jan 24; 27(4): 957–968.
p130CAS Is Required for Netrin Signaling and Commissural Axon
Guidance
Guofa Liu, Weiquan Li, Xue Gao,1,2 X... 阅读全帖 |
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i***i
发帖数: 5368 | 14 真正应该去骂的是经常在湖南台做广告那些山寨产品。
人家叫apple，国内来个oppo；
人家叫vaio（sony），国内来个vivo；
人家叫nike（耐克），国内来个erke（尔克）；
人家nike标记是个对勾，国内“特步”的标记来个叉叉；
人家叫江诗丹顿（名表），国内来个阿诗丹顿（还是陈建斌代言，光看见这个厨具广告）
……
还有国内无数服装和化妆品牌，叫什么斯，利，瑞，尔，完全是起名字时候就是无中生
有，从英文里捏造或者山寨一个词出来，然后音译成汉语的。冒充国外品牌。
联想最让我觉得有可能有抄袭嫌疑的倒是这个，apple广告最著名的sloagan: Think
Differently。
Yamaha、Samsung、Mitsubishi是因为日本本身牌子就这个字母组合，还有什么必要创
造出另一个英文字母组合来混淆所有人呢？
而中国品牌本身是汉字组合，所以需要一个英文字母组合，可以选择拼音，也可以选择
更有意义信达雅的翻译。
同理，美国或者欧洲品牌本身也是字母组合，翻译成中文品牌的汉字组合，可以选择单
纯意译（譬如微软），也可以选择单纯音译（这个最不讨好），也可以选择音译和意译
都好... 阅读全帖 |
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a*******s
发帖数: 117 | 15 Yan, X.; Li, F.; Dozmorov, I.; Frank, M. B.; Dao, M.; Centola, M.; Cao, W.;
Hu, D., External Qi of Yan Xin Qigong induces cell death and gene expression
alterations promoting apoptosis and inhibiting proliferation, migration and
glucose metabolism in small-cell lung cancer cells. Molecular and Cellular
Biochemistry 2012, 363 (1-2), 245-255.(IF 2.329)
Yan, X.; Shen, H.; Jiang, H. J.; Hu, D.; Wang, J.; Wu, X. Q., External Qi of
Yan Xin Qigong Inhibits Activation of Akt, Erk1/2 and NF-kappa B and
I... 阅读全帖 |
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a**s
发帖数: 1892 | 16 http://jkee.net/erke/ac/353205_s.html
脖子的皮下左右2侧都发现了肉球一样的东西，好象淋巴结，摸着还会滑动的，后脑勺
处好象摸着也有一块，都比黄豆粒大些些。不知道是什么原因，是正常现象还是怎么回
事呢？ ...
回答：增大的淋巴结，可以查查异常淋巴细胞，如果没问题，则考虑是淋巴结的炎性增
生，平时注意预防感冒。
问题：10个半月宝宝左后脑部皮下有一小肉球 10个半月宝宝左后脑部皮下有一小肉球
医生您好!我的女宝宝10个半月了,一个月以前发现她左后脑部快靠近脖子下方皮下有一
小肉球,用手摸明显可以滑动,表面上看不出什么.也无不适.身体精神也挺好.就没太在
意.近几天发现那个小肉球表面仔细看有一个小包,似乎小肉球也长大了些.请问这是怎
么回事呢?我们好着急,现 ...
回答：据你说的,应该可能是脂肪瘤,不过,小孩这么小,一切都不好说,建议带到医院检
查一下,主要是穿刺检查,而不是拍片子. 祝早日确诊 ... |
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g********e
发帖数: 1638 | 18 208 邬俊波
(MSE) 男 1977/08/20 中国华能集团公司 工程与材料科学 2010年
06月毕业于[美国]斯坦福大学 [美国]SunPower公司 研发主管工程师/R&D Staff
Engineer
名校的威力太大了，这位千青有自己的主页，文章少的很。
http://peumansgroup.stanford.edu/Junbo_Wu
Junbo Wu
Contact Information
Email: wujunbogmailcom
Mobile: (650) 704-4362
Office: CISX 218X
Contact Address: CISX (Paul J. Allen Building), Stanford University, 420 Via
Palou Mall, Stanford, CA 94305
Research Project
Organic Solar Cells. Semiconductor device physics, Material proce... 阅读全帖 |
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V**F
发帖数: 164 | 20 I have referred one ID with the closest background to the manuscript. Sorry
to others.
****
For toxicology journal impact factor >4, one of the top journals in
toxicology.
Key words: Optical coherence tomography, MAPK/ERK kinase (MEK) inhibitors
Please send me your brief background and contact info if you think you will
be able to handle this manuscript.
I will refer you to the editor.
**** |
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d******6
发帖数: 276 | 21 HI blehum
I'd like review MS for JAPS.
pls see the following information. Many thanks
Ⅰ: PERSONAL INFORMATION
Name: Xiaoyi XU
Telephone Number: +1-(650)391-5991
E-mail Address: d******[email protected];
x**[email protected]
Address: Stanford University, School of Medicine
3801 Miranda Ave, Palo Alto, CA, 94304, US
Ⅱ: EDUCATION EXPERIENCE
YEAR INSTITUTION DEGREES /
2003.09-2006.06 Changchun Institute of Applie... 阅读全帖 |
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d******6
发帖数: 276 | 22 我是做高分子化学药物控释，包括前药这个方向的，求审稿推荐。多谢
Ⅰ: PERSONAL INFORMATION
Name: Xiaoyi XU
Telephone Number: +1-(650)391-5991
E-mail Address: x**[email protected]
Address: Jilin University
Stanford University, School of
Medicine
3801 Miranda Ave, Palo Alto, CA, 94304, US
Ⅱ: EDUCATION EXPERIENCE
YEAR INSTITUTION DEGREES /
2003.09-2006.06 Changchun Institute of Applied Chemistry, Ph... 阅读全帖 |
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i********n
发帖数: 171 | 23 有审稿意愿的请发送你的CV到[email protected]/* */并告知你希望审稿的文章编号
请有时间愿意多审几篇的也可以，只要你能保证质量，之前有些审稿人有些敷衍，希望
大家能认真对待。谢谢合作。
1. Comparative assessment of cytotoxic effect of Cuban and Brazilian
propolis in human laryngeal epidermoid carcinoma cells
2. Role of PI3K/AKT/mTOR signaling pathway in ostearthritis by regulating
articular chondrocytes autophagy in rats
3. CREB knockdown inhibits growth and induces apoptosis in human pre-B
acute lymphoblastic leukemia cells through inhibition of prosurvival sig... 阅读全帖 |
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s*******a
发帖数: 599 | 24 an European journal, key words include vpa, tsa, erk, p53, pancreatic cancer
If you are interested in reviewing it, please send me you name, organization
email and brief research background and publication. |
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s******d
发帖数: 9806 | 25 Their soccer team deserves more, that's one thing for sure.
But that doesn't imply it's a good example for team china, cause they're
doing this only because they have to, not they want to... It's a tragedy
that such a good team is in such a suck county...
BTW, I thought the chinese brand Erke is supporting DPRK's olympic team,
aren't they supporting the DPRK soccer team? |
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d*********2
发帖数: 48111 | 26 erke亏大了
I
U
what
not
publi |
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a***e
发帖数: 757 | 27 hehe,it should take a lot of money to do this. |
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w*********h
发帖数: 664 | 28 2010-10-12 中国网球第一品牌鸿星尔克集团（ERKE GROUP）再度发力，继“鸿星尔克杯
”上海大师赛球童招募活动后，近日正式签约西班牙网球明星罗布雷多为代言人。签约
仪式现场，双方在各界嘉宾、球迷及媒体的共同见证下互赠礼物，一件以罗布雷多为主
题的文化纪念衫首度登场，作为回馈，罗布雷多也将亲笔签名的网球拍慷慨相赠，可见
双方之间的精诚合作之意。 |
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G*********o
发帖数: 2045 | 29 Robredo is currently sponsored by Erke for his sportswear, Asics for his
shoes, Dunlop Sport for his tennis racquets, TW Steel watches, and the
Ukrainian Food Company. |
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s***i
发帖数: 6149 | 30 and the owner is sponsored by erke? |
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h*d
发帖数: 19309 | 31 ☆─────────────────────────────────────☆
zli (茶众，not Tea Party) 于 (Fri Dec 10 15:29:55 2010, 美东) 提到:
rt
☆─────────────────────────────────────☆
hueyhy (Cesc) 于 (Fri Dec 10 15:33:26 2010, 美东) 提到:
排
☆─────────────────────────────────────☆
hsl99 (爽哥) 于 (Fri Dec 10 15:34:20 2010, 美东) 提到:
吃
☆─────────────────────────────────────☆
we200023 (we200023) 于 (Fri Dec 10 15:34:30 2010, 美东) 提到:
吃
☆─────────────────────────────────────☆
superbobo (123) 于 (Fri Dec 10 15:34:52 2010, 美东) ... 阅读全帖 |
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r***u
发帖数: 1272 | 32 高考之前流传一句话“二十一世纪是生物的世纪”从此就跳进火坑了有没有！！！！！
考得比谁都高学得比谁都苦考了笔试考实验最后收入比谁都低！！！有没有！！！！！
一进大学就开始狂背这辈子除了考试就用不到的东西有没有！！！！
鸟适应飞行的进化十大特征！ 三碳循环！二十个氨基酸中文名！！！！！
英文名！化学式！化学结构！性质特征！
最变态的还有代谢途径 ！！！！！
氨基酸有多少种代谢途径有没有！
背什么生糖氨基酸 生酮氨基酸 生糖兼生酮氨基酸！！！！
你以为生完酮就完了？根本没完！还有分解转化！
转成糖有没有！转成脂肪有没有！
不要以为吃了蛋白质不吃脂肪就不会长胖有没有！蛋白质可以转化为脂肪的！
你以为把氨基酸代谢背完了就完啥了！没完！！！！！！
还有糖代谢！糖氧化！糖酵解！脂肪代谢！脂肪酸代谢！核酸代谢！有没有！
DNA完了RNA RNA完了rRNA, rRNA完了mRNA，然后RNAi！！！！！
你有完没完了！！！
原核遗传学完，还有真核遗传！
这还只是一门课有没有！！！！！
你说学生物的人不正常！背下来这么多没用的东西还能正常么！！！！
学GRE的说自己成天背得痛苦！
学生物的每门课课本都... 阅读全帖 |
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d*****r
发帖数: 2583 | 36 ☆─────────────────────────────────────☆
Statefarm (天道酬勤) 于 (Mon Feb 9 14:18:26 2009) 提到:
Cell, Vol. 121, 179–193, April 22, 2005
Phosphorylation and Functional Inactivation of TSC2 by Erk: Implications for
Tuberous Sclerosis and Cancer Pathogenesis
Li Ma, Zhenbang Chen, Hediye Erdjument-Bromage, Paul Tempst, Pier Paolo
Pandolfi
☆─────────────────────────────────────☆
lookingpeak (巧逢) 于 (Mon Feb 9 14:23:07 2009) 提到:
你不知道这一作是本版当红美女吧？
for
☆─────────────────────────────────────☆
Stat |
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c*********r
发帖数: 1312 | 37 wiki了一下，“Myc is activated upon various mitogenic signals such as Wnt,
Shh and EGF (via the MAPK/ERK pathway).”看来Wnt比较上游。在胚胎发育里也是。
可能太上游的信号通路不会“直接”诱导细胞。。。（也许长期来看有可能？也许还更
多能一些？？） |
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a******u
发帖数: 211 | 38 Please send those papers to e*********[email protected]
thanks so much!!!!
1. Toxicol Mech Methods. 2009 Jan;19(1):51-8.
Silica-induced TNF-alpha and TGF-beta1 expression in RAW264.7 cells are
dependent on Src-ERK/AP-1 pathways.
Li X, Hu Y, Jin Z, Jiang H, Wen J.
2.Toxicology. 2006 Oct 3;227(1-2):105-16. Epub 2006 Aug 11.
Mechanisms of silica-induced IL-8 release from A549 cells: initial kinase-
activation does not require EGFR activation or particle uptake.
Øvrevik J, Refsnes M, Namork E, Bech |
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n********k
发帖数: 2818 | 39 check austin smith etc, there are already so many of them, to name a few,
GSk3b, erk, Mapk etc etc inhibitor can all do this, RA can do it too...IPS
is not a bad field, but u need a good angle/niche to catch the tide/stand
out now....
on |
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s****s
发帖数: 43 | 41 人组织细胞的
如果能有一些技术细节，比如blocking buffer和wash buffer的配方那就更好了
谢谢！ |
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j***i
发帖数: 39 | 43 谢谢hanchenjammy的分享。
1）我用了1mM DTT在Kinase Buffer。这次我去掉DTT试试；
2）“当然加入MAP2K之后，对MAPK底物的磷酸化会强很多” EK293T中才纯化的ERK2,收
细胞前，用EGF刺激细胞，让EKR磷酸化，所以可以替代加MAP2K；
3）我发现分子量很小的一个位置（20Kd?），有信号，而对照点突变没有，可能是降解
产物。所以在想：是不是全长不容易被磷酸化？降解的反而暴露出位点？
有没有新的结果，给告详解。 |
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j***i
发帖数: 39 | 44 update my result.
其他的条件都没变，就重新纯化地物蛋白，把GST切除点，可以被磷酸化了。
可能GST对蛋白的结构有一定的影响。
再次感谢hanchenjammy 。 |
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s********n
发帖数: 248 | 47 M-CSF培养的bone marrow macrophage，stimulate以后western blot 磷酸化的AKT/ERK
/STAT1，其他两个都blot的很好，但是pAKT总是没有想要的带，貌似出来的带都是二抗
结合的非特异性带。
请问版上高人，有blot过pAKT的没有？能否帮我看看问题出在什么地方了啊？
我用的WASHING BUFFER是TBST with 0.05%Tween 20，
BLOCKING BUFFER:5%BSA/TBST,
一抗就dilute在blocking buffer里边。
protocol:
室温block 1h，一抗4度过夜，洗3次×10min；二抗室温30min，洗3次×15min。
我初步怀疑是tween 20量加多了，又看到班上有用pbs做washing buffer的，貌似pbs更
温和一些，不知道用pbs会不会好一些？
小女子多谢了先！ |
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b********i
发帖数: 73 | 48 Depending on your stimuli, p-Akt may not be high enough. Another trick, use Femto, not Pico, to develop
your membrane. This issue is about how much p-Akt in your system, but not Ab issue.
ERK |
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s*********s
发帖数: 110 | 50 cell signaling的pAKT(473) antibody应该没有问题
有可能的问题
1.抗体坏了
buy new antibody
2.收细胞的过程中dephosphorylation了
A.adding phosphatase inhibitor in your lysis buffer and do everything
quick on ice
B.终极解决方案
do duplicate plates
one plate is used for normalizing protein concentration
another plate directly lyzed with sampling buffer, in this way, you can
preserve all phosphorylation
ERK |
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