f********s
发帖数: 115 | 1 想请教一个实验问题：有没有人尝试过用液体培养基加细胞因子来分化过细胞？
我想做这样一个实验，把MEP用FACS分选出来，然后在每一个96孔板的孔里面放一个细
胞。分化7天以后把这个孔里的细胞cytospin + staining， 然后看每个MEP都能分化成
什么种类的子细胞。用这个实验来比较wt 和mut 的区别。我看到一个protocol， 用
IMDM+ SCF，IL3, IL11, GM-SCF, FLT3-Ligand, TPＯ和EPO 来养细胞。我没有做过液
体培养基，一般用的都是methylcult medium,所以不知道液体培养基的效果好不好。有
没有有经验的人来说一说呢？
不知道在哪里看到说semi-solid的培养基比纯液体好，但是考虑到最后要cytospin,
semi-solid的培养基太粘了，洗一下的话又怕细胞丢失太多，因为本来一个细胞就分化
不出太多细胞。
多谢多谢！！ |
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s******s
发帖数: 13035 | 2 贴壁的细胞，直接把slide扔到dish里面长；悬浮的细胞，
用cytospin。
stuck |
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l*****a
发帖数: 1431 | 3 Thanks Shakuras! Can you tell a bit more about cytospin? |
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l*****a
发帖数: 1431 | 4 Thank you shyoung. found one cytospin in our institute. |
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f********s
发帖数: 115 | 5 你说的很多我都同意。只不过现在我想定量的的来分析一种特定的 progenitor （ex.
CMP） 分化到各个lineage 的能力。我觉得在把多个progenitor 接种到同一个盘子上
有几点非常影响我做定量分析：
1.你在挑集落的时候是可以看到集落的样子的，所以也许你会不自觉的多挑或者少挑某
些集落，引入bias;
2.在挑集落的时候，大的集落容易挑出来，小的集落不容易挑，即使挑了小集落在后续
实验过程中不知道怎么就不见了 (而且大小通常意味着不同的lineage)，也会严重影响
实验者的判断。
因此，我觉得一定要接种单细胞到96孔板里，在不看孔的情况下, 随机挑选比如说20个
孔来观察，这样可以得到各种百分比，比如说百分之多少的单细胞能形成集落，百分之
多少的细胞能形成红细胞集落，多少能形成粒细胞集落……不知道关于这一点你是否同
意？
在这个基础上，我想知道半固体和全液体培养基在这个实验里的优劣。我能想到的半固
体的坏处在于，1.如果你不看孔，不知道这个克隆在哪里，你就要把全部的200ul半固
体培养基吸出来，非常不利于cytospin. 2.而且半固体培养基会有一部分粘在t... 阅读全帖 |
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d****i
发帖数: 2346 | 7
是贴到培养板子，然后加药，最后再洗。谢谢！cytospin之后细胞就只能做荧光之类的
了。 |
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r*****i
发帖数: 117 | 8 some suggestions from my boss:
1. colony forming assay,
2. RBC count,
3. body weight measure,
4. blood smear assay (cytospin) |
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s*****g
发帖数: 7857 | 11 要不
1。固定，打孔，直接免疫荧光染色，照相？（你会需要一个cytospin的机器把悬浮细
胞离心到玻片上）
2。或 IP-Western
3。 或针对此蛋白做细胞的免疫荧光染色， 再做Flow cytometry
4。灵敏的 ECL 液体也是关键。反正GE 的ECL不行。 我平时都是用GE的加少量
MILLIPORE的。MILLIPORE的太强了，有杂带，还需要更好的分子量marker. （GE的我们
是专门用
来显GAPDH，ACTIN等常规大量蛋白的） |
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R****n
发帖数: 708 | 12 最近在做一个DNA和histone甲基化共染色，主要是想看在chromosome上的分布。先拿
colcemide处理2小时，然后放0.075M KCl，滴到玻璃板上。染了几次，细胞核都打不开
，也看不到一条条染色体。要是只用DAPI，能看到100-200个核中有一个能打开，但是
很不稳定。看protocol,有两个可能的问题。
1）我是悬空滴的，效果不如用cytospin?
2) 玻璃板没有poly-lysine coating,沾不住chromosome.
有人能提供点经验么？这方面是新手。 |
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R*******t
发帖数: 367 | 13 来自主题: Medicalpractice版 - 两个病例 SITE OF BIOPSY:A: Fine needle aspiration of Breast, right
FINAL CYTOPATHOLOGICAL DIAGNOSIS
Interpretation: NEGATIVE FOR MALIGNANT CELLS.
See microscopic.
MICROSCOPIC:
This aspirate contains small, mature appearing lymphocytes. The
differential
diagnosis includes seroma and intramammary lymph node. Clinical
correlation
suggested.
***Electronically Signed Out***
, MD, Senior Staff Pathologi... 阅读全帖 |
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