s******y
发帖数: 28562 | 1 也没有那么恐怖啦，一般实验室用的金属用品都不太可能和azide 反应的，
（我依稀记得铜和铅好像是对sodium azide最敏感的)
只不过没有什么事不要拿自己当小白鼠就是了。 |
|
n********1
发帖数: 165 | 2 这种azide C/N ratio 小于1，不是不能分离么？怎么有的文献报道可以用柱子分离？ |
|
n***l
发帖数: 143 | 3 how dangerous it is to use sodium azide on 10 gram scale?
I need to transform an OH to a NH2 group and do not want to do the mess
workup of Mitsunobu reaction. |
|
n***l
发帖数: 143 | 4 Thanks, the molecule has 7 carbons.
One more question, is it ok to handle sodium azide with a metal spatula? |
|
S*R
发帖数: 1057 | 5 因为实验需要用到少量Sodium azide，但是听说这玩意太危险，想请教有经验的同学：
1. 这玩意买回来放在实验室哪里存放？通风厨还是冰箱里？
2. 称取时是不是用塑料或者牛角勺，不能用不锈钢勺？
3.如何处理使用过的废水溶液，我每次使用量大概在1~10 mg左右。
还有其它建议嘛，谢谢！~~~ |
|
x********e
发帖数: 1064 | 6 Sodium azide 以前做农药的。没那么夸张。我向来 down sink的 |
|
y********4
发帖数: 1116 | 7 各位好，请问哪里能够买到perfluorophenyl azides。我在一个实验中需要使用这个组
分，但是总是找不到购买的地方，缩写是PFPA。谢谢！ |
|
s******y
发帖数: 220 | 8 我的目标蛋白是老鼠的，然后一抗是老鼠里产生的，只好用这个EZ-Link的kit。
instruction说不能用sodium azide在buffer里面，我的一抗里面有0.05%的sodium
azide，
需要dialyze吗？ 还是说只要不接着加sodium azide就没问题了。
而且，说明上要求把1mg IgG 溶解到0.5-1ml buffer， 我的抗体是1mg/ml的，有100ul
， 那我是
不是scale down就可以了呢？
多谢。 |
|
c********b
发帖数: 363 | 9 不知道大家是怎么纯化抗体的，挂IgG的proein A柱子得到的肯定不纯。
如果是用antigen－affinity purification就会好很多。只是有时候那个his－tag还是
会干扰。一个师兄教我先用一个带HIS6的无关蛋白把non-specific的先去掉（比如
sunnyday最喜欢的actin就被我加了his6来干这事），然后再来做antigen－affinity。
如果是intein－tag提出来的这一步都可以省掉，只是intein得到的蛋白量好像没有his
－tag提出来的多。
要提到的是这个protocol在我手上得到的抗体浓度很低，我一般用1：100稀释，但是很
特异。还有就是不太适用于IP。
这个方法不用挂柱子，跑SDS－PAGE，直接转到膜上，block之后先把血清和actin－
his6（in my case）的膜放2hr，然后上清拿出来和block过的antigen的膜泡2hr，
Wash with 1XTBS（contains 0.02％ sodium azide) twice, 10 min each，Elute
with glycine（pH3）... 阅读全帖 |
|
c********b
发帖数: 363 | 10 不知道大家是怎么纯化抗体的，挂IgG的proein A柱子得到的肯定不纯。
如果是用antigen－affinity purification就会好很多。只是有时候那个his－tag还是
会干扰。一个师兄教我先用一个带HIS6的无关蛋白把non-specific的先去掉（比如
sunnyday最喜欢的actin就被我加了his6来干这事），然后再来做antigen－affinity。
如果是intein－tag提出来的这一步都可以省掉，只是intein得到的蛋白量好像没有his
－tag提出来的多。
要提到的是这个protocol在我手上得到的抗体浓度很低，我一般用1：100稀释，但是很
特异。还有就是不太适用于IP。
这个方法不用挂柱子，跑SDS－PAGE，直接转到膜上，block之后先把血清和actin－
his6（in my case）的膜放2hr，然后上清拿出来和block过的antigen的膜泡2hr，
Wash with 1XTBS（contains 0.02％ sodium azide) twice, 10 min each，Elute
with glycine（pH3）... 阅读全帖 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 11 你是不是刚进实验室？如果是的话，忍一阵子吧。
一般都要经过这个阶段的。我以前刚进实验室的时候我老板恨不得盯着我用pipet,
一开始也是有点不爽，但是后来还是从她那里学到不少小窍门，还是很有用的。
相反，我第一个博士后的老板是那种三不管的，把我往实验室一扔自生自灭那种，
虽然貌似自由，但是后来让我挣扎了很久，很多东西我是非常久之后才发现自己
做错的了。比方说那时候在第一个老板那里用的是牛奶，但是觉得一抗太贵，
我很自觉的把一抗存起来用，然后很傻很想当然的往里面加了点sodium azide,
结果western blot 的结果总是抽风，时而好时而不好，什么一抗二抗的浓度
我调了又调，死活查不出原因。后来过了很久，才发现是这个azide的问题。
如果老板对我多关心一点，而不是简单的让我自己去调一抗二抗的浓度，
我可能就少走很多弯路了。 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 12 WB reagent,
比方说你的二抗 （这个是最可能出问题的），
或者chemifluorescent reagents,
buffer (check your PBS or TBS buffer pH)
Sodium Azide (did you mistakenly put sodium azide in your buffer anywhere?) |
|
l**********1
发帖数: 5204 | 13 LZ 两个月前 不上心没细看这的suuny 的WB 经验回帖了吧 啊
回复]
[ 9 ]
发信人: sunnyday (飞鱼), 信区: Biology
标 题: Re: 刚才老板问我，are you shaking plates？郁闷
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Apr 2 20:52:04 2012, 美东)
你是不是刚进实验室？如果是的话，忍一阵子吧。
一般都要经过这个阶段的。我以前刚进实验室的时候我老板恨不得盯着我用pipet,
一开始也是有点不爽，但是后来还是从她那里学到不少小窍门，还是很有用的。
相反，我第一个博士后的老板是那种三不管的，把我往实验室一扔自生自灭那种，
虽然貌似自由，但是后来让我挣扎了很久，很多东西我是非常久之后才发现自己
做错的了。比方说那时候在第一个老板那里用的是牛奶，但是觉得一抗太贵，
我很自觉的把一抗存起来用，然后很傻很想当然的往里面加了点sodium azide,
结果western blot 的结果总是抽风，时而好时而不好，什么一抗二抗的浓度
我调了又调，死活查不出原因。后来过了很久，才发现是这个azide的问题。
如果老板对我多... 阅读全帖 |
|
|
发帖数: 1 | 15 南开大学元素有机所陈弓课题组因团队建设和研究项目需求，现聘请副教授（有正式编
制）和博士后各1人。
陈弓教授初期任教于美国宾州州立大学化学系，2015年初受聘南开大学在元素有机
化学国家重点实验室全职开展教学科研工作。陈弓课题组的主要研究方向包括：有机合
成方法学（侧重于金属和非金属催化碳氢键活化）、复杂多肽多糖的合成和化学生物学。
该副教授职位为南开大学正式编制，享受相应副教授职位待遇，需承担相应教学和科研
任务。申请人需有有机化学及相关领域的博士学位，不少于一年的博士后工作经验（国
内外不限），和良好的科研文章发表记录。
该博士后岗位为天津化学化工协同中心资助，年薪20万（还可有额外绩效），两年(可
延)。申请人需有有机化学及相关领域的博士学位和良好的科研文章发表记录。具有有
机合成和多肽化学背景者优先考虑。
有兴趣应聘者请将个人材料通过电子邮件形式发送到：[email protected]/* */
陈弓教授的简介：
http://chem.nankai.edu.cn/dt.aspx?n=A001514758
陈弓课题组近期代表性文章：
1. Bo Wa... 阅读全帖 |
|
|
c******n
发帖数: 16403 | 17 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区 】
发信人: crazyman (荒神), 信区: Chemistry
标 题: Scripps to be sold to USC?
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 17 15:25:15 2014, 美东)
In the Pipeline
« Your Metal Azide Worries Are Over | Main
June 17, 2014
Scripps Merging With USC?
Email This Entry
Posted by Derek
This news broke last night: that USC might be acquiring Scripps. It all
looks to come down to tight federal money: that's where most of the funding
comes from, and institutions that rely on grants (and overhead from grants)
... 阅读全帖 |
|
q**x
发帖数: 1636 | 18 Material Safety Data Sheet
Sulfuric Acid
ACC# 22350
Section 1 - Chemical Product and Company Identification
MSDS Name: Sulfuric Acid
Catalog Numbers: S71211SC, S71826, S79200, S80213, S80213-1, A298 212,
A298212, A300 212, A300 225LB, A300 500, A300 612GAL, A300 700LB, A300212,
A300225LB, A300500, A300612GAL, A300700LB, A300C 212, A300C212, A300C212001,
A300C212002, A300C212003, A300C212004, A300C212005, A300C212006,
A300C212007, A300C212008, A300C212009, A300C212010, A300C212LC, A300FP 500,
A30... 阅读全帖 |
|
q**x
发帖数: 1636 | 19 Material Safety Data Sheet
Sulfuric Acid
ACC# 22350
Section 1 - Chemical Product and Company Identification
MSDS Name: Sulfuric Acid
Catalog Numbers: S71211SC, S71826, S79200, S80213, S80213-1, A298 212,
A298212, A300 212, A300 225LB, A300 500, A300 612GAL, A300 700LB, A300212,
A300225LB, A300500, A300612GAL, A300700LB, A300C 212, A300C212, A300C212001,
A300C212002, A300C212003, A300C212004, A300C212005, A300C212006,
A300C212007, A300C212008, A300C212009, A300C212010, A300C212LC, A300FP 500,
A30... 阅读全帖 |
|
r****o
发帖数: 105 | 20 BSA这里起类似与分子伴侣的作用，主要是防止酶蛋白发生
由疏水相互作用引起的聚合和沉淀。也有可能起避免残存
蛋白酶分解酶蛋白的作用。不管怎么样，主要是为了稳定酶了。
别的添加物比较常见还有：
(1)甘油：也是避免疏水作用引起的蛋白质聚合。尤其可以保护酶
在溶解/冷冻时得活性。
(2)EDTA：可能是为了消除少量protease 的活性，从而使酶蛋白不
会被分解吧。
(3)DTT/BME: 还原剂。防止形成蛋白质分子之间非天然的二硫键。从
而防止蛋白发生聚合。
(4)Sodium Azide: 毒药。抑制微生物生长。如果长期保存蛋白，加
这个会有帮助。
(5) 其他比较常见的盐或者温和的去垢剂：帮助蛋白保持可溶状态。
|
|
M*****e
发帖数: 279 | 21 If you are interested in cell proliferation, phosphorylated Histone H3 S10
antibody is better.
Ki67 is not M-phase specific. Histone H3 pS10 is relatively M-phase specific.
You can use 1:50 to 1:100 for Histone H3 pS10 on Formalin fixed paraffin
embedded tissue section. You can recycle the antibody (add sodium azide) and
re-use it later. |
|
p******i
发帖数: 1092 | 22 如果一抗在MILK裡，裝到FALCON管子裡 -20
如果一抗在BSA裡，裝到FALCON管子裡，4度（可以加點sodium azide） |
|
v***a
发帖数: 1242 | 23 我们实验室把一抗加了sodium azide后通常用很久
最近我还拿了2001年某人配的一个一抗（保存在4度的）来用了
信号很强 |
|
h*******g
发帖数: 91 | 24 一般抗体买来的时候都是在含有HEPES, BSA和sodium azid的buffer
今天不小心用di water稀释了后，再分装，然后放到-20保存
请问对以后western blot的试验结果有关系吗？
另外，以后实在要稀释后分装，应该用什么溶液?
感谢各位！ |
|
|
|
s******y
发帖数: 28562 | 27 干粉遇到金属会爆炸。
所以不要用金属勺子或者其他容器去盛它
要用塑料制品。 |
|
C*******e
发帖数: 4348 | 28 这个到是真不知道
以前都是用金属勺子称量的
记下了 |
|
n********k
发帖数: 2818 | 29 you scare the hell out of many now including me:))) |
|
|
|
|
|
h*****o
发帖数: 342 | 34 好像汽车的airbag里装了这个东西
谁想我们生物学家拿来杀菌 |
|
o********e
发帖数: 474 | 35 请问这东西中毒有啥反应吗？
今天得知同实验室的薄厚都是随便用个薄薄的纸巾惦着称量，然后随便乱抛的，丫完全
没有一点安全意识。
我无语！ |
|
|
s******y
发帖数: 28562 | 37 http://www.piercenet.com/browse.cfm?fldID=02020104
Substances compatible with the Thermo Scientific Coomassie Plus Protein
Assay. The following is a short list of compatible substances and their
concentrations that the BCA Protein Assay can tolerate. For a more complete
list please refer to the instruction booklet for the product or view our
Table of Compatible Substances for a comparison of substance compatibilities
among several different protein assay methods.
Substance Compatible Conc. ... 阅读全帖 |
|
c********r
发帖数: 1125 | 38 生物物理所我不太清楚，貌似这几年除了THOMPSON实验室的一个薄厚以外没有招过做干
细胞的。
近5年内清北招的做干细胞的都水平很是可以
清华医学院有SHEN XIAOHUA，是STUART ORKIN实验室出来的。
北大招了TANG FUCHOU，是AZID SURANI实验室出来的，
你有兴趣可以PUBMED一下上面两个人的背景和文章。。。。
当然能拿到职位的话任意一个都很好吧？我个人推荐清华，小孩教育，房子的条件听说
比另外两个好。生物物理所干细胞太小众，北大你也知道水有点深。。。
人文气氛北大是不错，但是我看不出对于科研有什么帮助。北大生科院倒是应该反省下
为什么隔壁的生物系只有不到30年历史，现在从引进人才到文章到本科课程的质量再到
学生出国的去向都几乎完胜自己（这还是在十一公来之前就体现出来的。。。），天天
把历史，积淀，文化放在口头上清谈没有意思，科研是看实力说话的。 |
|
h*******o
发帖数: 4884 | 39 sodium Azide at low concentration mainly interferes with the peroxide
reaction (HRP conjugated 2nd antibody). It should be fine to use at a very
low concentration.
After all, it is all up to the antibody. For b-actin, sure freeze and thaw
is fine.
For some delicate antibodies, it will be a big problem.
So for me, unless it is extremely hard to get the antibody, I woudn't reuse
for more than 5 times, usually 3 times. |
|
g*********5
发帖数: 2533 | 40 It depends.
some antibodies I put -20C and take out more than five times and work.
and usually rabbit antibodies are stable than mouse antibodies.
and if you use Licor system, azide is ok.
reuse |
|
L**u
发帖数: 933 | 41 看看人家化学怎么转行的
看滑雪班的讨论，这个属于做的很牛很牛的了
【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区 】
发信人: getjob (bright), 信区: Chemistry
标 题: 终于要走了
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jun 22 19:33:03 2011, 美东)
终于要转行了。
没了，才知道什么叫没了。走了，才知道再也回不来了。
今天最后一天。
我在NMR谱图上贴标签的时候，手写分子式，比任何时候都要认真。也许我以后一辈子
也不会在写天然产物的分子式了，呵呵。11个手性中心，3个顺反双键，两个环，还有
一个moiety 怕酸，另一个moiety怕碱。不算复杂，但也不好做。看着我的几大本子谱
图，几大本子实验记录，冰箱里一盒一盒的样品，无论以后他们怕酸，怕碱，怕光，怕
水，怕氧，不能久放，再也不关我的事了。
这么些年，我纯手工人肉过得柱子有两千根了吧。。。几年下来，发了三篇一区一作的
文章（mitbbs的热心读者请勿评论），有全合成，有方法学，还有全合成加方法学。写
到这里，真的眼泪要出来了。不为这些今后再也无人问津的所谓“科研成果... 阅读全帖 |
|
l**********1
发帖数: 5204 | 42 RE: 德艺双馨的楼主
please go to
//www.creativebiomart.net/description_10243_28.htm
You Position: Home >> Antibody >> Polyclonal Antibody >> Rabbit PAb >> Anti-Cdh5 PAb
Anti-Cdh5 PAb
Cat. No.
CPB-133RM
>
Immunogen
Recombinant mouse CDH5 protein.
Antibody Type
Rabbit Polyclonal Antibody.
Ig Type
Rabbit IgG.
Formulation
0.2 μm filtered solution in PBS with 5% trehalose
Preparation
Produced in rabbits immunized with purified, human cell-derived, recombinant mouse CDH5 extracellula... 阅读全帖 |
|
C*******e
发帖数: 4348 | 43 可以展开说说为什么事sodium azide的问题么？ |
|
s******y
发帖数: 28562 | 44 因为sodium azide 会抑制 HRP 的活性。
不过现在大家都用红外荧光二抗了，反而就没有这个问题了。 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 45 我在研究生院的时候从来没有做过western blot...
细胞组化倒是常作，但是azide 并不影响抗体结合，所以immunochemistry 里面
常常用它的，所以我当时就把这个习惯带到western blot 里去了。
另外，二抗并不是越用越干净吧，我猜其实是越用越弱了，然后弱的信号看起来都
会干净一些吧？ |
|
h*******o
发帖数: 4884 | 46 For whole brain or hemisphere, what I did is to overnight fix them at 4oC.
Change to PBS with sodium azide for storage afterwards.
Make sure that your brain samples were perfused well.
Residue serum/blood is usually the cause of high background.
Also, block for longer time may help too.
Last take a 3D stack then get sharper images through deconvolution. |
|
s******y
发帖数: 28562 | 47 哦，那还真的很奇怪。
会不会你在buffer 里不小心加进了sodium azide?
另外，也有可能是你们的一抗被细菌污染了然后全部失效了。。。虽然这种情况很少见 |
|
E*****1
发帖数: 610 | 48 first antibody I put sodium azide |
|
s******y
发帖数: 28562 | 49 不要加那个东西，
那个东西会抑制HRP
如果不小心加了，必须注意用普通的PBST or TBST 多洗几次（最少5次），
洗液里和二抗里切切不可再加sodium azide |
|
E*****1
发帖数: 610 | 50 Thanks for all of you.It really gave me some hints.
I was just thinking if i did not put sodium azide, The 1st antibody in BSA
is easy to go bad. I want to keep for while to use it (one or two or three
month). so I did that
Also my previous lab all did the same. Never happened this problem before.
Thanks again. You all are really nice |
|
