t*********o
发帖数: 20 | 1 1. buffer, potassium phosphate buffer, pH 7.4,用 1XPBS 可以代替吗？还是要用
henderson-hasselbalch equation去配buffer？
2.实验室有570和595nm的plate reader filters. 没有600nm的filter。这样计算时，
能用相应的molar extinction coefficients(600nm)代替595nm的系数吗？会有误差吧
？大吗
3.如果我用fluorescence,560(excitation)/590(emmision), 实验室没有560德filter,
能用530的代替吗？我用530/590，但是得出的数值只有~60，我做cell proliferation
study,觉得很诡异，manual上都是2000/10，000cells.
多谢大牛赐教！！！！ |
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F*******2
发帖数: 103 | 2 在bradford protein assay中，先设置一个standard curve, 但是用作standard的蛋白
和需要测的蛋白不是一种蛋白。
那么，我设standard curve （不同蛋白浓度下的595nm Reading）时，浓度单位应该用
mol/L 还是mg/mL? (以便与sample蛋白的595值对比）
感觉应该用mol/L吧，因为sample蛋白和standard蛋白每mg中含的蛋白量不一样啊 |
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f********n
发帖数: 6465 | 3 发信人: squirrabbit (松鼠兔), 信区: Biology
标 题: 也问问bradford法测量蛋白浓度
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Oct 26 06:14:12 2011, 美东)
是每次都要做标准曲线吗？那也太麻烦了吧
我们实验室的做法：167ul的BioRad的bradford溶液 加833ul水，混好加1ul稀释的样品
，用空白的样品调零，595nm测得的读数，每0.06算1ug／ul。读数最好不低于0.1，不
高于0.6, 高了就稀释样品。
这个误差是不是很大啊？一直对这个protocol不放心，不过大家都是这么测的。
发信人: squirrabbit (松鼠兔), 信区: Biology
标 题: Re: 也问问bradford法测量蛋白浓度
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Oct 26 06:36:57 2011, 美东)
那做一次标准曲线是不是可以一直用啊？
我看biorad的instruction manual给出了bsa和IgG的标准曲线啊 |
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s*********t
发帖数: 600 | 4 是每次都要做标准曲线吗？那也太麻烦了吧
我们实验室的做法：167ul的BioRad的bradford溶液 加833ul水，混好加1ul稀释的样品
，用空白的样品调零，595nm测得的读数，每0.06算1ug／ul。读数最好不低于0.1，不
高于0.6, 高了就稀释样品。
这个误差是不是很大啊？一直对这个protocol不放心，不过大家都是这么测的。 |
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