s******r
发帖数: 2876 | 1 石蜡应该不合适，有人说LacZ不能耐受有机溶剂。
肠子这样的组织 能不能石蜡包埋切片 应该一样可以看到lacz |
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l**i
发帖数: 8245 | 2 我用其它组织做过 没问题的
先x-gal染色，再固定包埋切片 |
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s******r
发帖数: 2876 | 3 我明白你的意思，
我说的是染色切好的片子，不是先染再切。
我用其它组织做过 没问题的
先x-gal染色，再固定包埋切片 |
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l*****z
发帖数: 13617 | 4 我们一般先Lac-Z 染色，再石蜡包埋切片。。。 |
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v*********d
发帖数: 382 | 5 Paraffin 包埋的不基本上都是PFA fix过的吗？
Qiagen的 |
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p******d
发帖数: 3737 | 7 在家带一天娃，晚上上来有这么多热心人啊。我是把组织切小块，paraformaldehyde固
定，尝试过30min-2h，切片都会碎。固定pbs洗，然后30%sucrose 4度shaking过夜，第
二天组织仍然是浮在上面的。然后OCT干冰上包埋切片。我没有做到30度，试过最低是
19度就没有再下降。
这么说我是温度不够低？高手看看，还有没有啥别的技巧啵？ |
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M******s
发帖数: 138 | 8 直接用OCT干冰包埋，差不多-19度切，厚度可以到5-7微米，不行的话15微米也行，air
-dry，4%PFA固定15-30分钟，过水或PBS,水性封片剂或甘油封片，去看荧光 |
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S******9
发帖数: 2837 | 9 我切mouse brain从来就是直接OCT干冰包埋，— 20切，厚度 8微米， air dry，4%
PFA固定 5-10分钟，PBS清洗，然后开始染色 |
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M******s
发帖数: 138 | 10 pfa灌过得组织一定要过糖，绝不能直接冻，否则你的组织切出来全是末子，这个一定要注意。
这个程序大致是灌注》PFA固定》过糖》冰冻包埋》切片
所以你的组织还是需要固定的 |
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s*********a
发帖数: 1409 | 11 老板要交grant，天天逼data，我快被逼疯了。
实验室学生切的片子，是PBS perfuse的小鼠脑子，然后在4%PFA 4度过夜fix，然后放
到pbs里，室温切片，40UM厚。我第一次觉得片子太厚了，用了漂片法，荧光染色，染
完了再mount到slides上，效果还马马虎虎。可是老板不喜欢荧光，喜欢DAB染色。说是
同时有人的脑染色，人脑用的是DAB，鼠脑也要用DAB才行。我也不知道是什么理论。我
只好又做DAB染色。可是我没做过DAB，完全照实验室的protocol做了两次，没做出来。
用的是贴片法，我想是不是片子太厚了，所以染不出来。可我老板偏认定是抗体浓度的
问题，让我继续试抗体浓度。我觉得真不是浓度问题，因为啥也没出来。
这个实验室染色用的protocol和我以前lab的很不一样。我们以前都是pbs+PfA灌流，然
后fix过夜，蔗糖沉降，oct包埋冷冻切片，从来没超过10um厚，然后荧光染色。这个
lab染色就没怎么做出来过，可是老板偏要按照他那套来。我觉得他就是火星来的。 |
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s*********a
发帖数: 1409 | 12 老板要交grant，天天逼data，我快被逼疯了。
实验室学生切的片子，是PBS perfuse的小鼠脑子，然后在4%PFA 4度过夜fix，然后放
到pbs里，室温切片，40UM厚。我第一次觉得片子太厚了，用了漂片法，荧光染色，染
完了再mount到slides上，效果还马马虎虎。可是老板不喜欢荧光，喜欢DAB染色。说是
同时有人的脑染色，人脑用的是DAB，鼠脑也要用DAB才行。我也不知道是什么理论。我
只好又做DAB染色。可是我没做过DAB，完全照实验室的protocol做了两次，没做出来。
用的是贴片法，我想是不是片子太厚了，所以染不出来。可我老板偏认定是抗体浓度的
问题，让我继续试抗体浓度。我觉得真不是浓度问题，因为啥也没出来。
这个实验室染色用的protocol和我以前lab的很不一样。我们以前都是pbs+PfA灌流，然
后fix过夜，蔗糖沉降，oct包埋冷冻切片，从来没超过10um厚，然后荧光染色。这个
lab染色就没怎么做出来过，可是老板偏要按照他那套来。我觉得他就是火星来的。 |
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b******s
发帖数: 1089 | 13 固定组织需要考虑组织大小，否则不能彻底固定。如果组织小于1mm，2hr PFA足够了。
否则需要4度过夜固定。或者先固定2小时，再切成小块固定。
上面有人说0.1%的glut都会影响抗体结合。你可以自己试试，如果是这样的情况，可以
只用4% PFA。
固定完之后，需要dehydration和infiltration，再包埋切片。
glut: glutaraldehyde
PFA: paraformaldehyde |
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F*****e
发帖数: 182 | 14 多谢大家的回复。
我是用50度左右的温水展片的，这些褶皱也展不开。我试了下以前相同条件包埋的样品
，可以展的比较平整。是不是蜡太软了？准备换种牌子的蜡试试。或者脱水或浸蜡时间
不够？
另外准备先把样品冻一下，再切切看。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 15 另外，non-hydrolyzable GTP analog和GDP analog，你难道不能用脂类包埋的
方式来辅助过膜么？要确认是否成功过膜也比较简单，同时放点可溶的荧光分子
就好了。 |
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P******r
发帖数: 966 | 16 control的tissue包埋在一起，问题就怕没有信号或者自发荧光啥的。 |
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v****e
发帖数: 131 | 17 能告诉我哪几个比较好，如果去做石蜡包埋的免疫萤光染色吗？我要做co-
immunostaing去定位我要做的那个基因。谢谢 |
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a*****3
发帖数: 565 | 18 我很久以前做过IHC，但也做得不多，那时我们都是用一抗加二抗做的，现在的老板
喜欢直接用荧光标记的一抗，不知道这样做出来效果和加二抗哪个好？我没做过直接
加荧光标记的一抗，所以也不清楚哪种效果好，老板说直接用荧光标记的一抗，不加
二抗能减少干扰，但我觉得二抗能放大信号，洗得干净的话不会有很深的背景，谁有
经验的给说说呀，我老板他自己也没什么IHC经验，他以前倒做过Flow Cytometry,那
都是直接用荧光标记的一抗，所以他就说要用荧光标记的一抗直接做。
另外再问一下，做组化是用OCT包埋好还是石蜡好呀？是小鼠脑组织。 |
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s**u
发帖数: 9035 | 19 先那到绿卡，在美国咋鬼混全行。
将来我到医院做技术员，反正我切片，包埋，染色，技术行，老了就干这。
我想过回去，一考虑孩子，现在连中文不会说，我就打退堂鼓 |
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s******y
发帖数: 28562 | 20 此神经毒性非彼神经毒性。
acrylamide在这里是作为一个支撑细胞结构的胶体，在本质上和我们做切片的
石蜡包埋是类似的道理。只不过acrylamide胶体是透光的而石蜡不透光。
在我的理解中，这么处理至少对细胞层次的结构影响不会很大。但是具体到里面的蛋白
和亚细胞结构就比较难说。因为acrylamide聚合的时候是有可能导致某些细微结构产生
形变的。 |
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v***2
发帖数: 131 | 24
谢谢，俺老板说，这东西很简单，无需用kits，俺就只好自认倒霉了 |
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X***n
发帖数: 366 | 26 脱蜡，然后proteinase K in 1%SDS/10 mM Tris / 1 mM EDTA. 65度, 30 min。 |
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H****N
发帖数: 997 | 27 OCT stands for optimum cutting temperature, is Tissue-Tek's brand name. We
use it to embed GFP-expressing tissue all the time and the signals are
maintained well. We never treat the tissues at 37 C though. |
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D*a
发帖数: 6830 | 28 我以前用的是TomatoRed在brain里 那个红通通啊 换了YFP 换了organ 换了年龄 我也
不敢瞎搞啊 |
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D*a
发帖数: 6830 | 30 谢谢！就是说用sucrose跟OCT混起来泡一下更好，泡多长时间呢？ |
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D*a
发帖数: 6830 | 33 综合版上的意见，我周六用leica的FSC 22 Frozen Section Media冻了胚胎，冷冻是用
isopentane放在干冰里冷到差不多干冰的温度，然后把小格子放进去悬在液体里冻。
我的问题是：感觉冻起来很慢啊，一个格子要冻三分钟左右，拿得我手都酸了。大家是
这样冻的吗？ |
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d****u
发帖数: 33 | 34 在Isopentane里放一两颗干冰就快多了，但不要多放，否则“沸腾”的太厉害了，容易
没到格子里。 |
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s********8
发帖数: 619 | 37 我们这里不做paraffin section的.我一直以为冷冻切片做in situ 比paraffin好,难道
不是吗?是OCT包埋的.
you |
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m***T
发帖数: 11058 | 38 frozen stored in paraffin block通常是指已经经过福尔马林处理的石蜡包埋的。我
不是这方面的行家，但FAOD应该是fatty acid oxidation disorders的缩写。即使
确诊需要liver tissue来检测酶的活性，FFPE过的tissue酶的活性也应该已经丧失了。
这病好象是autosomal recessive disorder，说明父母双方都是携带者孩子才有可能得
病，这可以通过基因检测的方式来确认。孩子目前做过哪些检查，尿和血液的各类检查
做过吗？为什么怀疑是FAOD？ |
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d**********g
发帖数: 129 | 39 好像slider scanner不用买，是切片追踪系统，可以全手工做的，国内人力便宜，如果
医院已经有切片室，那是需要买自动的免疫祖化仪器即可，什么固定，包埋，切片机都
不用买，这些都是前期工序。罗氏底下有个公司做得挺好，我看我们医院用得这个。 |
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t***m
发帖数: 114 | 40 环氧包埋
我用过Epon812
不知道是不是你说的牌号 |
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a***y
发帖数: 5 | 41 主要是研究一种材料，3个审稿人都要求证明一个事实。
材料直径5微米，长度1厘米，要求证明两端通电后材料温度是否升高超过45摄氏度？
我的计划是把荧光小分子通过共混的办法包埋进去，该荧光小分子的熔点在45摄氏度左
右，然后通过荧光显微镜来比较材料通电前后的照片。如果升高温度超过荧光小分子熔
点（即固态向液态转变）后，荧光显微镜照片肯定不同，原来材料是普通的没有荧光的
材料。
请大家帮忙提供上述荧光小分子，对这方面比较陌生。另外，请问有没有其他合适的方
法来证明？我可以致谢提供帮助的人甚至加为作者，谢谢。 |
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w********h
发帖数: 12367 | 42 你的方法不可靠，因为不知道包埋进小分子后会不会改变性质；
可以把这个纤维表面coat一层熔点在45摄氏度附近的小分子，
然后通电，看是否表面有融化。 |
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q*******7
发帖数: 273 | 43 非常理解你！
毕竟不敢冒险不要学位去考试，所以老板还是要应付的。
至于一天定多少时间去学习，真是身不由己的事情。
我的实验还有时间点的限制，晚上想不加班都不行。
还是把一些可能中间间隔比较长的实验叠加起来。即便是不同的project也不要紧，一
整一批，然后再集中整理你的raw data。
我就经常包埋的同时染片子或者切片子，反正都在一个病理室；做手术的同时，在身后
的bench上杀老鼠。不过这样忙一天就非常的累，晚上吃饱饱后休息一下，再看书。 |
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a***y
发帖数: 5 | 44 主要是研究一种材料，3个审稿人都要求证明一个事实。
材料直径5微米，长度1厘米，要求证明两端通电后材料温度是否升高超过45摄氏度？
我的计划是把荧光小分子通过共混的办法包埋进去，该荧光小分子的熔点在45摄氏度左
右，然后通过荧光显微镜来比较材料通电前后的照片。如果升高温度超过荧光小分子熔
点（即固态向液态转变）后，荧光显微镜照片肯定不同，原来材料是普通的没有荧光的
材料。
请大家帮忙提供上述荧光小分子，对这方面比较陌生。另外，请问有没有其他合适的方
法来证明？我可以致谢提供帮助的人甚至加为作者，谢谢。 |
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发帖数: 1 | 46 http://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzA5OTA0NDk2NQ==&mid=402151046&
很多朋友们在关注PD-1/PD-L1抗癌药物，这是目前为止获批上市的最有名的肿瘤免疫疗
法药物，包括:
美国默沙东公司的 Keytruda（Pembrolizumab、MK03475）,
美国百时美施贵宝的 Opdivo（纳武单抗、Nivolumab、ONO-4538、BMS-936558、
MDX1106）。
这两个药物都已在美国、欧洲、日本等国家和地区上市，用于治疗黑色素瘤和肺癌。
Keytruda在中国的临床试验信息尚未查到。我们将继续关注，及时更新。
Opdivo在中国有两个临床试验。
（一）登记号为CTR20150755的试验【Nivolumab（BMS-936558）在经治的中国晚期或复
发性实体瘤受试者中的1/2期、开放性研究】的状态显示为【尚未招募】
【入选标准】
患有晚期或复发性实体瘤的中国受试者（包括但不限于非小细胞肺癌、胃癌、鼻咽癌、
食管癌）
【排除标准】
1 有脑转移的受试者需排除，除非研究者判断入选时临床稳定2周以上
2... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 47 http://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzA5OTA0NDk2NQ==&mid=402151046&
很多朋友们在关注PD-1/PD-L1抗癌药物，这是目前为止获批上市的最有名的肿瘤免疫疗
法药物，包括:
美国默沙东公司的 Keytruda（Pembrolizumab、MK03475）,
美国百时美施贵宝的 Opdivo（纳武单抗、Nivolumab、ONO-4538、BMS-936558、
MDX1106）。
这两个药物都已在美国、欧洲、日本等国家和地区上市，用于治疗黑色素瘤和肺癌。
Keytruda在中国的临床试验信息尚未查到。我们将继续关注，及时更新。
Opdivo在中国有两个临床试验。
（一）登记号为CTR20150755的试验【Nivolumab（BMS-936558）在经治的中国晚期或复
发性实体瘤受试者中的1/2期、开放性研究】的状态显示为【尚未招募】
【入选标准】
患有晚期或复发性实体瘤的中国受试者（包括但不限于非小细胞肺癌、胃癌、鼻咽癌、
食管癌）
【排除标准】
1 有脑转移的受试者需排除，除非研究者判断入选时临床稳定2周以上
2... 阅读全帖 |
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I****a
发帖数: 407 | 48 你爸爸还需要其他方法降低体内的雄激素.传统的治疗是联合使用LHRH agonist 和
androgen receptor blocker.你爸爸现在只在用androgen receptor blocker所以需要
开始LHRH agonist, 常用的有两种Lupron or Zoladex, 肌肉内包埋,三个月换一次.如
果以上方法失败,最近刚批了一个新的抗雄激素的药,Arbiretarone (Zytiga), 还有正
在进行三期实验的MDVN3100也很有前途.晚期前列险腺现在进展很快,不是一言两语就能
讲清楚.除抗激素治疗外,还可用化疗(Texetere+prednisone or cabazitaxel+
prednisone) 和免疫治疗.Peovenge 是第一个批的自体细胞免疫治疗.
因为你爸还有骨转移所以还建议用来增强骨质的药,通常用Zometa,最近FDA又批了一种
新类型的叫Xgeva. |
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I****a
发帖数: 407 | 49 你爸爸还需要其他方法降低体内的雄激素.传统的治疗是联合使用LHRH agonist 和
androgen receptor blocker.你爸爸现在只在用androgen receptor blocker所以需要
开始LHRH agonist, 常用的有两种Lupron or Zoladex, 肌肉内包埋,三个月换一次.如
果以上方法失败,最近刚批了一个新的抗雄激素的药,Arbiretarone (Zytiga), 还有正
在进行三期实验的MDVN3100也很有前途.晚期前列险腺现在进展很快,不是一言两语就能
讲清楚.除抗激素治疗外,还可用化疗(Texetere+prednisone or cabazitaxel+
prednisone) 和免疫治疗.Peovenge 是第一个批的自体细胞免疫治疗.
因为你爸还有骨转移所以还建议用来增强骨质的药,通常用Zometa,最近FDA又批了一种
新类型的叫Xgeva. |
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