d*****g 发帖数: 36 | 1 问题在于,一般的冷冻技术会导致水在冷冻时形成很大的冰晶体,比如大于10nm,
这样冰晶体就把蛋白结构破坏了。同样的道理,解冻的时候也会导致细小的非晶态
的“固体水”重结晶形成比较大的晶体,导致蛋白结构破坏。
如果能够实现快速冷冻,比如几个~几十毫秒内把样品快速冷冻(-10000-17000C/sec),
样品中的水分子来不运动(结晶)就被原地固定形成固态水,这样就不会破坏蛋白结构。
一般比较薄的样品很容易快速冷冻,不会破坏结构。含水少的样品,一般就不是太大的问
题。含水多的样品,如细胞(70%的水),样品比较厚的时候,快速冷冻就非常困难,
因为外层的水先凝固,形成一层隔热层,导致样品中间的温度不容易快速释放出去,从而
形成比较大的冰晶体。我做过很多冷冻实验,一般冷冻生物组织,10微米以下不会有什么
问题,20微米以上时,常规冷冻技术就不行了,因此我们得用高压冷冻技术来解决这个问
题。 |
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