【求助】CM-DiI注射标记神经元 - Neuroscience版

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Neuroscience版 - 【求助】CM-DiI注射标记神经元

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c*********r
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代LP发帖，欢迎交流指教。多谢！^_^
实验中需要标记斑马鱼幼体（D1-D4）的运动神经元，就是通过在肌肉里面的运动神经
元轴突把荧光染料注射进去（retrograde backfilling）。由于注射后的斑马鱼会用于
冰冻切片和免疫染色，同时用的抗体需要先切片然后再快速用甲醛固定，然后还要做免
疫染色，所以一般的dextran或者DiI的染料都不适用，会被洗掉。最后选择了
Invitrogen的CM-DiI，说是可以共价联接在膜蛋白上。
试了CM-DiI，确实不会被洗掉，但出现了几个问题：
1. 注射鱼的时候鱼的组织会被粘在注射用的玻璃针里面，一来会堵玻璃针，二来对鱼
造成的伤害很大。我试过用DMF、酒精以及二者的混合溶液作溶剂，全都有这个问题（
染料浓度是1 mg/ml）。其中用酒精做溶剂造成的存活率相对高一点，所以最后我一直
都用酒精作溶剂。
2. 标记运动神经元的效率下降。以前我用dextran注射的时候，只要注射到轴突支配的
肌肉里面，很容易就标记了运动神经元。现在用CM-DiI，会发现被注射的肌肉部分有很
强的荧光，但却没有进入轴突。貌似需要很精确地注射到轴突里面才行，那个难度就比
较大了。
总之，现在用这个CM-DiI用得非常失败，目前为止还没有一例标记成功。如果有哪位有
用过这个染料或者知道一些经验，还望多多指教。多谢了！

c*********r
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