l********m
发帖数: 73 | 1 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: liangmao (凉猫 窝里横 -,=), 信区: Biology
标 题: 问克隆高手：什么strain容易克隆unclonable的片段？
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 15 12:43:18 2008)
偶在clone一些highly structured DNA segments, 不长，也就100bp左右
但是在DH5a里，测序发现大部分都只剩下10bp左右的一小段尾巴了。。。哭。。。
老板说可能是因为很多时候host不喜欢某些外源片段，特别是我这种highly
structured
很可能就发生deletion了
请问有哪位高人有这方面的经验吗？
知不知道什么strain比较能tolerant这种unstable segments？
我现在找到了stratagene的SURE 2, 不过stransformation efficiency 好像很低，还
是有很多不长
还有比sure 2更好的推荐吗？
谢谢啦～～ | l********m
发帖数: 73 | 2 bio版好像没人知道。。。
来万能的校版碰碰运气吧。。。 | k********g
发帖数: 2534 | 3 啥东西highly structured阿
【在 l********m 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
: 发信人: liangmao (凉猫 窝里横 -,=), 信区: Biology
: 标 题: 问克隆高手：什么strain容易克隆unclonable的片段？
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 15 12:43:18 2008)
: 偶在clone一些highly structured DNA segments, 不长，也就100bp左右
: 但是在DH5a里，测序发现大部分都只剩下10bp左右的一小段尾巴了。。。哭。。。
: 老板说可能是因为很多时候host不喜欢某些外源片段，特别是我这种highly
: structured
: 很可能就发生deletion了
: 请问有哪位高人有这方面的经验吗？
| f***y
发帖数: 247 | 4 不懂的人飘过~~
【在 l********m 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
: 发信人: liangmao (凉猫 窝里横 -,=), 信区: Biology
: 标 题: 问克隆高手：什么strain容易克隆unclonable的片段？
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 15 12:43:18 2008)
: 偶在clone一些highly structured DNA segments, 不长，也就100bp左右
: 但是在DH5a里，测序发现大部分都只剩下10bp左右的一小段尾巴了。。。哭。。。
: 老板说可能是因为很多时候host不喜欢某些外源片段，特别是我这种highly
: structured
: 很可能就发生deletion了
: 请问有哪位高人有这方面的经验吗？
| a***a
发帖数: 40617 | 5 尽管很多strain已经声称被敲掉了所有DNA修复的系统,但是这种情况我也碰到过
你有没有注意到你用DH5a的时候菌有没有长得很慢,或者clone很少的情况
有的时候这些东西对他们来说太过于toxic,所以活下来的都是有deletion的
(DNA水平的toxic,或者有表达系统的basal leaking)
没太好办法,如果是蛋白水平的,你可以试着加glucose
如果是DNA水平的,你可以有2个办法
1.换strains
2.还是用某个strain,然后大量做,用原位杂交的方法检测完整性(自己设计杂交引物)
这样可以大批量的筛几万个clone,最后应该可以筛出来
old school stuff, but works
good luck
【在 l********m 的大作中提到】
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: 标 题: 问克隆高手：什么strain容易克隆unclonable的片段？
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 15 12:43:18 2008)
: 偶在clone一些highly structured DNA segments, 不长，也就100bp左右
: 但是在DH5a里，测序发现大部分都只剩下10bp左右的一小段尾巴了。。。哭。。。
: 老板说可能是因为很多时候host不喜欢某些外源片段，特别是我这种highly
: structured
: 很可能就发生deletion了
: 请问有哪位高人有这方面的经验吗？
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